تأثیر فاکتورهای مترشحه از سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های بنیادی لوسمی +CD34 با هدف بررسی مسیرهای سیگنالینگ مرتبط به EMT
The effect of secreted factors from mesenchymal stem cells on CD34+ leukemic stem cells aiming to investigate signaling pathways related to EMT
مجریان: راحله فرحزادی
خلاصه روش اجرا: امروزه سرطان های خونی متعدد از قبیل انواع لوسمی ها جامعه بشری را رنج می دهند. لوسمی میلوئیدی حاد (AML) یکی از انواع سرطان خون است که منجر به ایجاد سلول های هماتوپوئتیک غیر طبیعی می شود. درمان های متعددی برای این بیماری از قبیل شیمی درمانی ، رادیوتراپی و ... وجود دارد که عواملی از قییل آسیب به سایر سلول ها در شیمی درمانی و عفونت های اولیه استفاده از این روش ها را محدود کرده است. اما امروزه روش پیوند مغز استخوان با استفاده از سلول های بنیادی، مؤثرترین روش درمان AML می باشد. از طرفی مطالعات مختلف نقش سلول های بنیادی مزانشیمی در القاء وضعیت انتقال اپی تلیال-مزانشیمال (EMT) را بررسی کرده اند و تحقیقات بیشتر در این زمینه مورد نیاز است. سلول بنیادی خواستگاه و منشاء انواع سلول ها بوده و دارای ویژگی مهم پرتوانی و خودنوسازی می باشد. این سلول ها به دلیل دارا بودن خاصیت خودتجدیدی و توان تمایز به بافت های مختلف می توانند در درمان انواع بیماری ها کارآمد باشند. کاربرد این سلول ها در درمان بیماری های ژنتیکی، بهبود خونسازی در بیماران سرطانی تحت درمان، بازسازی استخوان، سرطان خون و سرطان مغز استخوان به خوبی نشان داده شده است. بررسی مکانیسم های سلولی و مولکولی دخیل در تأثیر سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های سرطانی، گام مهمی در پیشبرد راهکارهای درمانی انواع سرطان می باشد. در این پژوهش، سلول های بنیادی مزانشیمی که در طرح قبلی مجری با کدپژوهان 59238 و کد اخلاق IR.TBZMED.REC.1396.849 از بافت مغز استخوان رت استخراج شده است، پس از شناسایی و بررسی قابلیت تمایز چندگانه مورد استفاده قرار خواهند گرفت. به این صورت که پس از دفریز سلول ها، درصد زنده مانی سلول ها با بررسی Ki-67 و روش فلوسایتومتری تأیید خواهد شد و سلول های مربوطه از نظر میزان بیان نشانگرهای سطح سلولی CD90، CD105، CD31 و CD34 بررسی خواهند شد. از طرف دیگر سلول های رده لوسمی میلوئیدی حاد (KG1)، به طور جداگانه کشت داده شده و تکثیر می شوند. پس از رشد و تکثیر، سلول های بنیادی سرطانی CD34+ با روش MACS جداسازی می شوند. در ادامه هر دو گروه سلولی بنیادی مزانشیمی و بنیادی سرطانی، به روش هم کشتی با استفاده از پلیت های مخصوص هم کشتی در مجاورت یکدیگر قرار می گیرند. آزمایشات انجام شده جهت بررسی نوع و اثرات فاکتورهای مترشحه از سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های بنیادی سرطانی CD34+ در روز 7 پس از هم کشتی انجام خواهد شد. بدین منظور سلول های بنیادی سرطانی CD34+ در روز 7 پس از هم کشتی جمع آوری شده، میزان تغییرات بیان پروتئین های مسیر آپاپتوزی SMAD independent از قبیل PTEN، RAF، RAS به روش وسترن بلاتینگ و همچنین بررسی نوع سایتوکین های مترشحه با استفاده از روش Cytokine array مترشحه در محیط اندازه گیری خواهد شد. در ادامه جهت مطالعه ی اثرات سیتوتوکسیک، میزان آپاپتوز سلولی با استفاده از روش انکسین-V بررسی خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 73395 |
| عنوان فارسی طرح | تأثیر فاکتورهای مترشحه از سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های بنیادی لوسمی +CD34 با هدف بررسی مسیرهای سیگنالینگ مرتبط به EMT |
| عنوان لاتین طرح | The effect of secreted factors from mesenchymal stem cells on CD34+ leukemic stem cells aiming to investigate signaling pathways related to EMT |
| نوع طرح | گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 18 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | شواهد نشان می دهد که سلول های بنیادی مزانشیمی می توانند به عنوان ابزارهایی برای تحویل عوامل درمانی سرطان مورد استفاده قرار گیرند.از طرفی مطالعات مختلف نقش سلول های بنیادی مزانشیمی در القاء وضعیت انتقال اپی تلیال-مزانشیمال (EMT) را بررسی کرده اند و تحقیقات بیشتر در این زمینه مورد نیاز است. با توجه به مطالعات فراوانی که در زمینه سلول درمانی و درمان انواع سرطان انجام شده است، بررسی جزئیات دخیل در اثرات سلول های بنیادی مزانشیمی بر رده های سرطانی گام مهمی در زمینه تحقیقات سرطان می باشد. |
| اهداف اختصاصی | تعیین اثر سایتوکاین های مترشحه از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بر میزان آپاپتوز سلول های بنیادی لوسمی CD34 -تعیین نوع سایتوکاین های مؤثره در هم کشتی سلول های بنیادی مزانشیمی و سلول های بنیادی لوسمی CD34+ به روش Cytokile array -تعیین اثر سایتوکاین های مترشحه از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بر میزان بیان پروتئین های PTEN، RAF و RAS در سلول های بنیادی لوسمی CD34 |
| چکیده انگلیسی طرح | Today, many blood cancers, such as types of leukemia, afflict the human society. Acute myeloid leukemia (AML) is a type of blood cancer that results in the development of abnormal hematopoietic cells. There are many treatments for this disease, such as chemotherapy, radiotherapy, etc., which factors such as damage to other cells in chemotherapy and early infections have limited the use of these methods. But today, the bone marrow transplantation using stem cells is the most effective method of AML treatment. On the other hand, various studies have investigated the role of mesenchymal stem cells in inducing epithelial-mesenchymal transition (EMT) and more research is needed in this field. Stem cell is the origin of all types of cells and has the important feature of multiplicity and self-renewal. These cells can be effective in the treatment of various diseases due to their self-renewal properties and the ability to differentiate into different tissues. The use of these cells in the treatment of genetic diseases, improving hematopoiesis in cancer patients undergoing treatment, bone regeneration, leukemia and bone marrow cancer has been well demonstrated. Examining the cellular and molecular mechanisms involved in the effect of mesenchymal stem cells on cancer cells is an important step in advancing the treatment strategies of all types of cancer. In this research, the mesenchymal stem cells isolated from the bone marrow tissue of rats in the previous project with researcher code 59238 and code of ethics IR.TBZMED.REC.1396.849 will be used after identifying and checking the ability of multiple-lineage differentiation. After freezing the cells, the percentage of cell viability will be confirmed by Ki-67 and flow cytometry, and the corresponding cells will be checked for the expression of CD90, CD105, CD31 and CD34 cell surface markers. On the other hand, acute myeloid leukemia (KG1) cells are cultured and proliferated separately. After growth and proliferation, CD34+ cancer stem cells are isolated by MACS method. Next, both groups of mesenchymal stem cells and cancer stem cells are placed in the vicinity of each other in the co-culure method using special plates of co-culture. The experiments conducted to investigate the type and effects of factors secreted by mesenchymal stem cells on CD34+ cancer stem cells will be performed on the 7th day after transplantation. For this purpose, CD34+ cancer stem cells were collected on the 7th day after transplantation, the number of changes in the expression of SMAD-independent apoptotic pathway proteins such as PTEN, RAF, RAS by western blotting method and also checking the type of secreted cytokines using Cytokine array method will be measured in the environment. In the following, in order to study the cytotoxic effects, the amount of cell apoptosis will be checked using Annexin-V method. |
| کلمات کلیدی | سلول بنیادی مزانشیمی: سلول های بنیادی مزانشیمی که نوعی سلول بنیادی بزرگسال محسوب می شوند، با دو خاصیت توان خود تجدیدی برای مدت طولانی و پتانسیل تمایز به رده های سلولی متفاوت شناخته می شوند. هم کشتی: در معرض قرار گرفتن دو نوع سلول متفاوت را گویند که این دو نوع سلول از طریق محیط کشت مشترک با یکدیگر تبادلات فاکتورهای رشد مختلف را دارند. رده سلولی KG1: رده سلولی مربوط به لوسمی میلوئیدی حاد است، این رده سلولی از یک مرد 59 ساله جدا شده است. MACs: روشی است برای جداسازی جمعیت سلول های مختلف، بسته به نوع آنتی ژن های سطحی شان که به بیدهای مگنت دار متصل شده اند. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| راحله فرحزادی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| عزت اله فتحی | همکار اصلی |
| سمیه وندقانونی | همکار اصلی |
| بهناز ولی پور | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر سلول های بنیادی مزانشیمی از طریق ترشح سیتوکاین باعث القای آپاپتوز در سلول های بنیادی لوسمی CD34 شدند.متن خبر از آنجائیکه درمان قطعی برای انواع لوسمی ها گزارش نشده است و استفاده از داروهای شیمی درمانی سبب مقاومت دارویی و اثرات توکسیک روی سایر سلول های بدن می شود، استفاده از سلول های بنیادی مزانشیمی می تواند به عنوان یک درمانی جایگزین، راهگشا باشد. نتایج مطالعه حاضر افزایش قابل توجهی در میزان آپاپتوز سلول های CD34 غنی شده از رده سلولی KG-1 در شرایط هم کشتی با BM-MSCs را نشان داد. فرض بر این است که سایتوکین ها و فاکتورهای رشد مانند IL-2، IL-4 و IL-10 می توانند نقش مهمی در اثرات ضد توموری تسهیل شده توسط MSCs ایفا کنند. القای قابل توجه آپاپتوز در محیط کشت مشترک CD34 LSCها و MSCها نشان می دهد که این سایتوکین ها ممکن است در مسیرهای سیگنالینگ مانند P53، PTEN، NF-κB، RAS، RAF و ERK1/2 دخیل باشند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
