بررسی سایتوکین های مترشحه از سلول های بنیادی مزانشیمی بر میزان زنده مانی سلول های بنیادی سرطانی خون CD34+

مجریان: راحله فرحزادی

خلاصه روش اجرا: خلاصه روش اجرا: امروزه سرطان های خونی متعدد از قبیل انواع لوسمی ها جامعه بشری را رنج می دهند. لوسمی میلوئیدی حاد (AML) یکی از انواع سرطان خون است که میلوسیت ها را تحت تأثیر قرار داده و منجر به ایجاد سلول های هماتوپوئتیک غیر طبیعی می شود. درمان¬های متعددی برای غلبه بر این بیماری از قبیل شیمی درمانی با میزان بالا، رادیوتراپی کل بدن و ... وجود دارد که عواملی از قییل آسیب به سایر سلول ها در شیمی درمانی و عفونت های اولیه استفاده از این روش ها را محدود کرده است. اما امروزه روش پیوند مغز استخوان با استفاده از سلول های بنیادی، مؤثرترین روش درمان AML می باشد. سلول بنیادی خواستگاه و منشاء انواع سلول ها بوده و دارای ویژگی مهم پرتوانی و خودنوسازی می باشد یعنی هم قدرت تبدیل به انواع سلول ها را دارد و هم می تواند به سلولی تمایز نیافته مشابه خودش تبدیل شود تا منبع اصلی سلول بنیادی باقی بماند. این سلول ها به دلیل دارا بودن خاصیت خودتجدیدی و توان تمایز به بافت های مختلف می توانند در درمان انواع بیماری ها کارآمد باشند. کاربرد این سلول ها در درمان بیماری های ژنتیکی، بهبود خونسازی در بیماران سرطانی تحت درمان، بازسازی استخوان، سرطان خون و سرطان مغز استخوان به خوبی نشان داده شده است. بررسی مکانیسم های سلولی و مولکولی دخیل در تأثیر سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های سرطانی، گام مهمی در پیشبرد راهکارهای درمانی انواع سرطان می باشد. در این پژوهش، سلول های بنیادی مزانشیمی که در طرح قبلی مجری با کدپژوهان 59238 و کد اخلاق IR.TBZMED.REC.1396.849 از بافت مغز استخوان رت استخراج شده است، پس از شناسایی و بررسی قابلیت تمایز چندگانه مورد استفاده قرار خواهند گرفت. به این صورت که پس از دفریز سلول ها، درصد زنده مانی سلول ها به روش تریپان بلو تأیید خواهد شد و سلول های مربوطه از نظر میزان بیان نشانگرهای سطح سلولی CD90، CD105، CD31 و CD34 بررسی خواهند شد. از طرف دیگر سلول های رده لوسمی میلوئیدی حاد (KG1)، به طور جداگانه کشت داده شده و تکثیر می شوند. پس از رشد و تکثیر، سلول های بنیادی سرطانی CD34+ با روش MACS جداسازی می شوند. در ادامه هر دو گروه سلولی بنیادی مزانشیمی و بنیادی سرطانی، به روش هم کشتی در مجاورت یکدیگر قرار می گیرند. آزمایشات انجام شده جهت بررسی اثرات سیتوتوکسیک و آپاپتوزی فاکتورهای مترشحه از سلول های بنیادی مزانشیمی بر سلول های بنیادی سرطانی CD34+ در روزهای صفر، سه و شش انجام خواهد شد. بدین منظور سلول های بنیادی سرطانی CD34+ در روزهای صفر، سه و شش جمع آوری شده، میزان تغییرات بیان پروتئین های مسیر آپاپتوزی Bax و Bcl2 به روش وسترن بلاتینگ و همچنین میزان سایتوکین های IL-2، IL-4 و IL-15 مترشحه در محیط اندازه گیری خواهد شد.