بررسی اثر داروهای اگزالو پلاتین و آیفسفوماید بر مهار بیان آنکوپروتئین E5 ویروس پاپیلومای انسانی HPV16 ، رشد ، مهاجرت و آپوپتوز سلول های CaSki
Investigating the effect of Oxaliplatin and Ifosfamide on the expression of human papillomavirus E5 gene(HPV16), proliferation, migration and apoptosis of CaSki cells
مجریان: حسین بنازاده باغی , امیر علی مختارزاده
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه، به منظور بررسی اثر سایتوتوکسیک داروهای شیمی درمانی Oxaliplatin و Ifosfamide روی سلولهای سرطانی و همچنین تعیین غلظت ایده آل treatment از آزمایش MTT استفاده میگردد. سلولهای تیمارشده با غلظت های مختلف داروهای اشاره شده، در پلیتهای 96 چاهکی کشت داده می شوند. پس از 24 ساعت از انکوباسیون، محیط کشت جدید حاوی MTT، به سلولها افزوده شده و پس از افزودن بافرها و محلولهای مناسب، جذب نوری در 570 نانومتر خوانده میشود؛ تا میزان مرگ و میر سلول ها مورد بررسی قرار گیرد. همچنین برای بررسی میزان سرکوب بیان ژنهایHPV E5 از روش qRT- PCR استفاده میشود. بدین منظور پس از مدت زمان کافی از treat سلولی توسط داروهای شیمی درمانی مورد نظر، RNAی کل سلولی (Total RNA) توسط معرف TRIZOL استخراج شده و پس از سنتز cDNA با روش SYBER Green quantitative PCR میزان بیان ژنها بررسی میگردد. برای بررسی میزان آپوپتوز، بعد از شست و شو با محلول های های مناسب و رنگ آمیزی با Annexin V، و رنگ های حیاتیFITC و PE توسط دستگاه فلوسایتومتری بررسی خواهد شد. در نهایت برای بررسی مهار مهاجرت، از روشWound Healing Assay استفاده می شود. بدین منظور زمانی که سلول¬های ترانسفکت شده به کف پلیت چسبیده و به تراکم 80 درصد رسیدند با استفاده از نوک سر سمپلر خراشی در وسط لایه سلولی کف پلیت ایجاد کرده و سلول های جدا شده به همراه محیط کشت قدیمی به آرامی از چاهک ها خارج شده و پس از شستشو با PBS، محیط کشت جدید به چاهک ها اضافه می شود و یک چاهک هم به عنوان کنترل بدون اضافه کردن تیمار در نظر می گیریم. نتایج چاهک ها را با میکروسکوپ عکس برداری کرده و مهاجرت سلول ها از لبه شکاف به محل شکاف در نمونه های تیمار شده را با نمونه های کنترل مقایسه می کنیم. آنالیز آماری با استفاده از آزمون Student t- Test و توسط نرم افزار GraphPad Prism انجام خواهد گرفت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 69475 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر داروهای اگزالو پلاتین و آیفسفوماید بر مهار بیان آنکوپروتئین E5 ویروس پاپیلومای انسانی HPV16 ، رشد ، مهاجرت و آپوپتوز سلول های CaSki |
| عنوان لاتین طرح | Investigating the effect of Oxaliplatin and Ifosfamide on the expression of human papillomavirus E5 gene(HPV16), proliferation, migration and apoptosis of CaSki cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | توسعه روشهای درمانی جدید در بیماریهای واگیر |
| نوع مطالعه | طرح تحقیقاتی-پژوهشی |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | از روش هایی که برای درمان سرطان دهانه رحم بکار می رود؛ می توان به داروهای مورد استفاده در شیمی درمانی، جراحی، رادیوتراپی و ایمونوتراپی اشاره کرد، که از جمله ی معایب آن¬ها عود مجدد بیماری، سایتوتوکسیک بودن روی سلول¬های غیرسرطانی، هزینه بالای درمان و عوارض جانبی آنهاست. با توجه به معایب ذکر شده از روش های درمان سرطان سرویکس نظیر جراحی، رادیوتراپی و همچنینی هزینه ی بالای برخی درمان های نظیر ایمنوتراپی، و از آنجایی که موارد یافت شده ناشی از سرطان دهانه رحم بیشتر مرتبط با ویروس HPV16 بوده و با توجه به عملکرد مهم آنکوپروتئین E5 در فرآیند ترانسفورماسیون سلول های آلوده به ویروس HPV، این مطالعه با هدف بررسی عملکرد combination دو داروی شیمی درمانی رایج بر مهار بیان ژن HPV E5 در رده ی سلول های CaSki و تاثیر این مهار بر بیان ژن های مسئول آپوپتوز، تهاجم سلولی و چرخه ی سلولی در سلول های آلوده به ویروس برای اولین بار انجام خواهد شد. در این راستا، در صورت تأیید مهار E5 ، می توان مهار بیان ژن E5 ویروس پاپیلومای انسانی را به عنوان یکی از اهداف درمان های مولکولی سرطان های وابسته به HPV ، در نظر گرفت. |
| اهداف اختصاصی | تیمار رده ی سلولیCaSki دارای ژنوم HPV توسط داروهای شیمیایی نظیر اگزالوپلاتین و آیفسفوماید برای بررسی اثر سایتوتوکسیک (viability) سلول ها به روش MTT -تیمار رده ی سلولی CaSki دارای ژنوم HPV-16 با داروهای اگزالی پلاتین و آیفسفوماید، و بررسی تکثیر سلولی ( Vimentin و فاکتورهای رشد) -تیمار رده ی سلولی CaSKi دارای ژنوم HPV-16 با داروهای شیمی درمانی مد نظر و بررسی میزان بیان آنکوپروتئین E5 ، ژن های مرتبط با آپوپتوز (ژن Bax القاء کننده آپوتوز و Bcl2 مهار کننده آپوپتوز) -تیمار رده ی سلولی CaSKi دارای ژنوم HPV-16 با دارو های اگزالوپلاتین و آیفسفوماید و بررسی مهاجرت سلول ها با روش Wound healing assay یا Scratch |
| چکیده انگلیسی طرح | Human papillomaviruses, from the papilloma viridae family, belong to a group of small, naked viruses with circular double-stranded DNA.HPV16 is the most common cause of cervical cancer. Cervical cancer is still a global problem, with about 570,000 cases identified and 311,000 deaths recorded in 2018. Although this type of cancer has declined in developed countries, it still has the highest number of cancer deaths in women in 43 less developed countries. The human papillomavirus E5 gene encodes a small, highly hydrophobic oncoprotein that affects immune invasion, cell proliferation, apoptosis, and angiogenesis in tumors. And this protein is associated with increased epidermal growth factor and its receptor. Significant advances have been made in the diagnosis and treatment of cervical cancer in recent decades. Among the methods used to treat this cancer are drugs used in chemotherapy, surgery, radiotherapy and immunotherapy. These drugs include oxaloplatin and ifsfomide. Given that the E5 gene is involved in the early stages of tumorigenesis and its inhibition can play a significant role in preventing malignant cervical cancer, and due to the important function of E5 oncoprotein in enhancing the transformation process of HPV-infected cells and also the lack of a study in the field of inhibition of E5 gene expression as a target of molecular therapy with chemotherapy drugs in other infected cell lines The aim of this study was to evaluate the function of oxaliplatin and ifosfamide inhibiting the expression of HPV E5 gene in CaSKi cells and the effect of this inhibition on the expression of genes responsible for apoptosis, migration and differentiation of virus-infected cells for Will be done first; Aimed at treating cervical cancer caused by the HPV16 virus. In this study, MTT assay is used to evaluate the cytotoxic effect of chemical drugs( ifosfamide and exalipelatin). The qRT-PCR method is also used to evaluate the suppression of HPV E6 gene expression. Total RNA is extracted by TRIZOL reagent and after cDNA synthesis, the expression of genes is checked by SYBER Green quantitative PCR. Finally, the Wound Healing Assay method is used to investigate migration inhibition. Statistical analysis will be performed using Student t-Test and GraphPad Prism software. |
| کلمات کلیدی | پروتئین های E ویروسی: پروتئین هایی که ویروس در فاز اولیه ی آلوده کردن سلول شروع به ساخت آنها می کند. پروتئین های L ویروسی: پروتئین هایی که ویروس در فاز تأخیری آلوده کردن سلول شروع به ساخت آنها می کند. ترانسفورماسیون: فرآیند تغییر شکل و تغییر مسیر های متابولیکی سلول در جهت بدخیم شدن را گویند. موتاسیون: فرآیند جهش در ژن را گویند. P53 و pRb: نوعی از پروتئین های سرکوب کننده ی تومور زایی در چرخه ی سلولی هستند. CaSki: رده های سلولی سرطان دهانه ی رحم که دارای ژنوم ویروس پاپیلومای انسانی هستند و همچنین رو نوشت های پروتئین HPV E5 در آن ها موجود می باشد. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حسین بنازاده باغی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| امیر علی مختارزاده | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| وحدت پورطهماسبی | مشاور |
| مهین آهنگر اسکوئی | مشاور |
| ریحانه راثی زاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
| پریسا شیری آقباش | همکار اصلی |
| محمد امینی | همکار اصلی |
| جاوید صدری نهند | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر درمان ترکیبی E5 ویروس در سرطان دهانه رحم موثر بود.متن خبر با توجه به اینکه تقریبا تمام موارد گزارش شده از سرطان دهانه رحم مرتبط با ویروس پاپیلومای انسانی است، این سرطان به عنوان چهارمین سرطان شایع در بین زنان در سراسر جهان میباشد. بنابراین ارائه راهبردی مناسب جهت پیشگیری، تشخیص و درمان ضروری میباشد. از سوی دیگر، داروهای شیمی درمانی به دلیل عدم اختصاصیت منجر به افزایش مقاومت دارویی و سمیت سیستمیک می گردند؛ در نتیجه، ژن درمانی با داروهای ضد سرطان یک روش درمانی موثر میباشد. به عبارت دیگر، درمان ترکیبی منجر به افزایش قابل توجه اثربخشی درمان در مقایسه با تک درمانی می شود. در این راستا، این مطالعه نشان داد که درمان ترکیبی داروی اگزالو پلاتین ، آیفسفوماید و siRNA به طور جالب توجهی تنها بافت توموری را هدف قرار می دهد و متعاقبا آسیب به بافت طبیعی و پیشرفت بدخیمی کاهش می یابد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
