تاثیر غلظت های مختلف هیدروژن پراکساید بر بیان ژنهای مرتبط با اتوفاژی در سلول های بنیادی پالپ دندان انسان
Effect of different concentrations of hydrogen peroxide effect on the expression of autophagy-related genes in human dental pulp stem cells
مجریان: محمود بهاری , مهدی رهبر
خلاصه روش اجرا: سلول های پالپ دندان با رده سلولیDPS_7 و کد بانک سلولی IBRC C10371 از مرکز ذخایر ژنتیک خریداری خواهد شد . این سلول ها بر اساس مارکرهای سلول های بنیادی با غلظت های مختلف H2O2 تیمار شده و درصد زنده مانی آنها با استفاده از تست MTT بررسی خواهد شد. در مرحله بعد جهت اندازه گیری میزان بیان ژن ها، سلول ها به مدت 24 ساعت با دوزهای مختلف H2O2 تیمار شده و RNA Total سلول ها با استفاده از کیت استخراج RNA بر اساس پروتکل شرکت سازنده کیت استخراج خواهد شد. سپس RNA با استفاده از کیت سنتز cDNA ( synthesis kit ) به DNA مکمل(cDNA) تبدیل خواهد شد. در نهایت میزان بیان ژن های اتوفاژی (LC3, Beclin-1 , p62) با استفاده از تکنیک Real time PCR مورد بررسی قرار خواهند گرفت. تمامی تست ها بصورت سه بار تکرار انجام شده و گروهی که H2O2 دریافت نمی کند به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته می شود. تمامی نتایج بدست آمده از گروه های تیمار شده، با گروه کنترل مقایسه خواهد شد. مقدار احتمال کمتر از 05/0 به عنوان سطح معنی دار در نظر گرفته خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 68703 |
| عنوان فارسی طرح | تاثیر غلظت های مختلف هیدروژن پراکساید بر بیان ژنهای مرتبط با اتوفاژی در سلول های بنیادی پالپ دندان انسان |
| عنوان لاتین طرح | Effect of different concentrations of hydrogen peroxide effect on the expression of autophagy-related genes in human dental pulp stem cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 6 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | با توجه به اینکه اتوفاژی نقش مهمی در خودنوزایی و تمایز سلول های بنیادی دارد، لذا شناخت مواد موثر در اتوفاژی مزایایی درمانی برای طیف وسیعی از بیماری های دارد. لذا نتایج این طرح نشان خواهد داد که چه غلظتی از هیدروژن پراکساید (غلظت 6 و 20 و 35 درصد ) خواهد توانست با تنظیم اتوفاژی، بدون اثر سمی بر سلولهای بنیادی پالپ دندان باعث افزایش پتانسیل بقا و تمایز ادنتوژنیک آن ها شود. یکی از مزیت های مهم این روش، ایمن بودن آن است که در آن سلول بنیادی از نظر ژنتیکی دست ورزی نمی شود و این که می توان این روش را بدون خطر در طب بالینی نیز استفاده کرد. هدف از مطالعه حاضر بررسی تاثیر هیدروژن پراکساید جهت تحریک اتوفاژی می باشد. لذا باید غلظت اپتیمم آن جهت تیمار سلول ها تعیین شود. مطالعات مختلف نشان داده برخی مواد در غلظت های بالاتر اثر سمی بر روی سلول ها داشته و باعث مرگ سلولی می شوند درحالیکه در غلظت های پایین اثر حفاظتی و یا ترمیمی دارند. لذا جهت تیمار سلول ها غلظت های sub-toxic انتخاب می شوند تا نتایج قابل اعتماد تری بدست آید. |
| اهداف اختصاصی | تعیین و مقایسه میزان سمیت سلولی در مواجهه با غلظت های مختلف هیدروژن پراکساید با استفاده از تست MTT -سنجش بیان ژن های LC3 , P62, Becline-1 در مواجهه با غلظت های مختلف هیدروژن پراکساید |
| چکیده انگلیسی طرح | Dental pulp cells with DPS_7 cell line and IBRC C10371 cell bank code will be purchased from the Genetic Resources Center. These cells are characterized and confirmed based on surface markers. Stem cells will be treated with different concentrations of H2O2 and their viability will be assessed using MTT assay method. In the next step, to measure the expression of genes, the cells were treated with different doses of H2O2 for 24 hours and the total RNA of the cells was extracted using an RNA extraction kit based on the kit manufacturer's protocol. The RNA will then be converted to complementary DNA (cDNA) using a cDNA synthesis kit. Finally, the expression of autophagy genes (LC3, Beclin-1, p62) will be examined using the real-time PCR technique. All tests are repeated three times and the group that does not receive H2O2 is considered as the control group. All results obtained from the treated groups will be compared with the control group. A P value less than 0.05 will be considered significant. |
| کلمات کلیدی | تست MTT : یکی از روشهای تست سمیت سلولی برای سنجش میزان مرگ سلولی روش MTT است که مبنای آن تشکیل رنگ فورمازان با احیا ماده MTT (دی متیل تیازول ۲ و ۵ دی فنیل تترازولیوم برمید) و یا سایر نمکهای تترازولیوم است. با گسستگی حلقه تترازولیوم MTT توسط آنزیمهای میتوکندریایی در سلولهای زنده، کریستالهای فورمازان بنفش رنگ نامحلول تشکیل میشود. تشکیل این کریستالها نشان دهنده فعال بودن آنزیمهای زنجیره تنفسی و معیاری برای زنده بودن سلولها است. با اندازه گیری میزان جذب توسط اسپکتوفتومتر در طول موجهای مشخص میتوان تعداد سلولهای زنده را تعیین کرد. این آزمون بر اساس استاندارد ISO 10993-5 انجام شده و هدف آن ارزیابی برون تنی سمیت سلولی میباشد.(21) سلولهای بنیادی پالپ دندان: سلولهای بنیادی پالپ دندان (DPSCs) سلولهای بنیادی موجود در پالپ دندان هستند که همان بافت زنده نرم در دندانها است. این سلول ها پلوری پوتنت هستند و می توانند در شرایط in vitro به بافتهایی که خصوصیات مشابه لایه های مزودرم ، اندودرم و اکتودرم دارند ، تمایز یابند.(19) هیدروژن پراکساید: آباکسیژنه( H2O2 ) یک اکسنده متداول است که به عنوان سفیدکننده استفاده میشود(12). اتوفاژی(Autophagy): مسیر حیاتی مورد نیاز برای بقاء سلول در طول گرسنگی از طریق خودخوری و تخریب پروتئین ها و اندامک های سلولی می باشد(20). |
| ذینفعان نتایج طرح | با توجه به استفاده ی گسترده از روش های درمانی زیبایی مثل بلیچینگ و تاثیر آن ها بر روی سلول های پالپ دندان از طریق نفوذ به داخل آن، نتایج این مطالعه می تواند در ارائه غلظت مناسب ماده بلیچینگ برای پروتکل های درمانی بیماران کمک کننده باشد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمود بهاری | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| مهدی رهبر | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| کاظم نجاتی کشکی | مشاور |
| فرشته حسنی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
