اثر کینورنین بر آپوپتوز و اتوفاژی سلوهای کاردیومیوسیت قلب در حضور و عدم حضور رزوراترول از طریق مسیر سیگنالینگ Ahr/Src/MAPK
The effect of Kynurenine on Apoptosis and Autophagy of Cardiomyocytes in Presence and Absence of Resveratrol via Ahr/Src/MAPK Dependent Pathway
مجریان: مهرانگیز ابراهیمی ممقانی , کریستینا کریستوفرسن
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه مکانیسم اثر کینورنین بر آپوپتوز و اتوفاژی سلوهای کاردیومیوسیت قلب و نقش رزوراترول بر اثرات ناشی از کینورنین از طریق مسیر سیگنالینگ Ahr/Src/MAPK بررسی می گردد. کاردیومیوسیتهای H9c2 مشتق از کاردیومیوبلاست جنینی موش صحرایی خریداری و در DMEM مناسب ، همراه با سرم گاو جنین ، 1٪ پنی سیلین / استرپتومایسین در جو 5٪ CO2 و رطوبت بالای 90% در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت داده خواهند شد. برای همه آزمایشات ، سلولها با توجه به طرح آزمایشی در تراکم مناسب سیدینگ می شوند و به مدت 24 ساعت رشد داده می شوند تا قبل از آزمایش به کانفلوئنسی 70-80٪ برسند. سپس با غلظت های مختلف کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول انکوبه می شوند و زنده مانی سلول ها مورد بررسی قرار می گیرد. در ادامه با توجه به نتایج حاصل از زنده مانی غلظت مورد نظر رزوراترول و کینورنین برای ادامه آزمایش ها تعیین می گردد و اثر کینورنین بر آپوپتوز، اتوفاژی، فعالیت گیرنده آریل هیدروکربن و بیان پروتئین های c-Src و MAPK در سلول های H9C2 در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار گیرنده آریل هیدروکربن، SRC و MAPK ها مورد بررسی قرار می گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 68569 |
| عنوان فارسی طرح | اثر کینورنین بر آپوپتوز و اتوفاژی سلوهای کاردیومیوسیت قلب در حضور و عدم حضور رزوراترول از طریق مسیر سیگنالینگ Ahr/Src/MAPK |
| عنوان لاتین طرح | The effect of Kynurenine on Apoptosis and Autophagy of Cardiomyocytes in Presence and Absence of Resveratrol via Ahr/Src/MAPK Dependent Pathway |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | تغذیه درمانی پزشکی در بیماریهای مزمن و غیرواگیر |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | علی رغم وجود مطالعاتی در خصوص اثر آنتاگونیستی رزوراترول بر فعالیت AHR و تاثیر این ماده بر کاهش اثر توکسین های اورمیک در رده های سلولی مختلف، مطالعه ای در مورد اثر این ماده بر سمیت ناشی از توکسین های اورمیک در سلول های قلب از طریق محور ahr/src/Mapk انجام نگرفته است. از سویی، با توجه به اهمیت نارسایی کلیه در بروز بیماری های قلبی و افزایش تجمع توکسین های اورمیک که معلول کاهش عملکرد کلیه و تغییر میکروبیوم روده می باشد و همچنین افزایش شیوع نارسایی های کلیوی و کمبود مطالعات در مورد تاثیر مصرف رزوراترول بر سلامت سلول های قلبی در این شرایط ، انجام مطالعات بیشتر برای کاهش مصرف برخی داروها و جایگزینی آنها با ترکیبات غذایی سودمند ضروری به نظر می رسد. |
| اهداف اختصاصی | تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول بر زنده مانی سلول های H9C2 -تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده های گیرنده آریل هیدروکربن (CH223191)، src ((PP2 و MAPK ها (U0126، SB203580، SP600125) بر آپوپتوز سلول های H9C2 الف) خلاصه روش اجرا هدف اختصاصی دو: (توصیف دقیق گروههای مورد مطالعه، تعداد نمونه هر گروه، ‌نحوه انجام تحقیق یا آزمایش)): کینورنین و رزوراترول با نتایج حاصل از هدف اختصاصی 1 و set up اولیه در غلطت های مناسب مورد بررسی قرار می گیرند. مهار کننده های CH223191، PP2 و خانواده MAPK ها در غلظت و زمان مناسب قبل از تیمار کردن سلول ها با کینورنین به کار گرفته می شوند و آپوپتوز سلول ها توسط تست tunnel توسط میکروسکوپ فلورسنس مورد ارزیابی قرار خواهد گرفت. سلول ها به گروه های ذیل طبقه بندی می گردند.
تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده های گیرنده آریل هیدروکربن (CH223191)، src ((PP2 و MAPK ها (U0126، SB203580، SP600125) بر بیان پروتئینهای Bax ، Bcl-2 در سلول های H9C2 -: تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده های گیرنده آریل هیدروکربن (CH223191)، src) (PP2 و MAPK ها (U0126، SB203580، SP600125) بر اتوفاژی الف) خلاصه روش اجرا هدف اختصاصی چهار: (توصیف دقیق گروههای مورد مطالعه، تعداد نمونه هر گروه، ‌نحوه انجام تحقیق یا آزمایش)): کینورنین و رزوراترول با نتایج حاصل از هدف اختصاصی 1 در غلطت های مناسب مورد بررسی قرار می گیرند. مهار کننده های CH223191، PP2 و خانواده MAPK ها در غلظت و زمان مناسب قبل از تیمار کردن سلول ها با کینورنین به کار گرفته می شوند و اتوفاژی از رنگ آمیزی و بررسی توسط میکروسکوپ فلورسنس یا fluorescence micro plate reader استفاده خواهد شد.
تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده های گیرنده آریل هیدروکربن ، Src و MAPK ها بر بیان پروتین Beclin-1 در سلول های H9C2 -تعیین اثر کینوزنین در حضور و عدم حضور رزوراترول بر فعال شدن گیرنده آریل هیدروکربن AHR -هدف اختصاصی 7: تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده ی گیرنده آریل هیدروکربن (CH223191) بر بیان پروتئین c-Src هدف اختصاصی 8: تعیین اثر کینورنین در حضور و عدم حضور رزوراترول و مهار کننده های گیرنده آریل هیدروکربن (CH223191) و src )(PP2 بر بیان پروتئین های MAPK |
| چکیده انگلیسی طرح | In this study, the mechanism of the effect of kynurenine on apoptosis and autophagy of cardiomyocytes and the role of resveratrol on these effects through the Ahr/Src/MAPK signaling pathway will be investigated. H9c2 cardiomyocytes derived from rat embryonic cardiomyoblasts will be purchased and cultured in appropriate DMEM, supplemented with fetal bovine serum, 1% penicillin/streptomycin in an atmosphere of 5% CO2 and high humidity of 90% at 37°C. For all experiments, cells will be seeded at the appropriate density according to the experimental design and grown for 24 h to reach 70–80% confluence before the experiment. Then, they will be incubated with different concentrations of kynurenine in the presence and absence of resveratrol, and cell viability will be examined. In the following, according to the survival results, the desired concentration of resveratrol and kynurenine will be determined to continue the experiments, and the effect of kynurenine on apoptosis, autophagy, aryl hydrocarbon receptor activity and the expression of c-Src and MAPK proteins in H9C2 cells in the presence And the absence of resveratrol and inhibition of aryl hydrocarbon receptor, SRC and MAPKs will be investigated. |
| کلمات کلیدی | رزوراترول: ترکیب طبیعی پلی فنولیک فیتوالکسین می باشد که به وفور در انگور ، انواع توت ها ، شراب قرمز و انواع دیگر میوه های تیره پوست یافت می شود. آپوپتوز: فرایندی همئوستاتیک که طی تکامل برای کنترل تکثیر سلولی در بافت اتفاق می افتد. تشخیص آپوپتوز شامل روشهای مربوط به تغییرات غشا، تکه تکه شدن DNA، سمیت سلولی و تکثیر سلولی، آسیب میتوکندری، تشخیص ایمونولوژیک و سنجشهای مبتنی بر مکانیسم است. اتوفاژی: مکانیسم خود هضم کننده ای است که برای از بین بردن اندامک های آسیب دیده ، پروتئین های ناقص در حین بیوسنتز و پروتئین های غیر عملکردی با عمر طولانی توسط لیزوزوم عمل می کند.اتوفاژی را می توان با شمارش نقاط LC3، اندازه گیری محتوای لیزوزومی، وسترن بلات LC3 یا با تشخیص وزیکول های دو غشایی با استفاده از میکروسکوپ الکترونی عبوری تشخیص داد. کینورنین: متابولیت تریپتوفان است که توسط IDO-1 و تریپتوفان-2،3-دی اکسیژناز 2 (TDO-2) تولید می گردد و لیگاند گیرنده ه ی آریل هیدروکربن (AHR) می باشد. MAPK: پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن نوعی پروتئین کیناز است که مخصوص اسیدهای آمینه سرین و ترئونین است. c-Src: یک پروتئین تیروزین کیناز غیر رسپتوری است که در انسان توسط ژن SRC کدگذاری می شود. متعلق به خانواده Src kinase است. گیرنده آریل هیدروکربن (AhR): گیرنده آریل هیدروکربن AhR یک فاکتور رونویسی فعال شونده با لیگاند است که در مسیرهای تکوینی و متابولیسم مواد شیمیایی سمی دخالت دارد. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مهرانگیز ابراهیمی ممقانی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| عفت علیزاده | مشاور |
| سید رفیع عارف حسینی | مشاور |
| سارا محیطی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| کریستینا کریستوفرسن | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر رزوراترول میتواند از آپوپتوز و اتوفاژی ناشی از کینورنین را با مهار مسیر AhR/p38 MAPKجلوگیری کند.متن خبر با توجه به شواهدموجود در خصوص نقش کینورنین بهعنوان متابولیت التهابی مسیر تریپتوفان در افزایش خطر نارسایی قلبی در بیماران مبتلا به بیماری مزمن کلیه، نتایج مطالعه حاضر بمنظور تعیین اثر کینورنین در مدل سلولی قلبی (H9C2) سلولهای کاردیومیوسیت H9C2 در شرایط آزمایشگاهی در حضور یا عدم حضوررزوراترول یا مهارکنندههای مسیر AhR/Src/MAPKs بر زندهمانی سلولی، آپوپتوز، پتانسیل غشای میتوکندری و اتوفاژی نشان داد که کینورنین موجب آپوپتوز و اتوفاژی از طریق فعالسازی مسیر AhR/p38 MAPK شده و رزوراترول توانست با مهار این مسیر، از آسیبهای سلولی جلوگیری کند. این یافتهها، حاکی از نقش کینورنین بهعنوان عامل پیونددهنده آسیبهای کلیوی و قلبی و رزوراترولبهعنوان ترکیبی محافظتی در برابر اثرات آن است. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
