بررسی جذب داخل سلولی اگزوزومهای آلوژنیک (بین گونهای) در اندامهای مختلف موش صحرایی (رت)
Evaluation of the cellular uptake of allogeneic exosomes in different organs of a rat
مجریان: رضا رهبرقاضی
خلاصه روش اجرا: ابتدا تعداد 16 سر رت نر بالغ نژاد ویستار، حدوداً 6 تا 8 هفته سن و در محدوده وزنی 160 تا 200 گرم خریداری خواهند شد. پس از نگهداری حیوانات به مدت یک هفته پیش از شروع کارآزمایی جهت آداپتاسیون با شرایط موجود، رتها بصورت تصادفی به دو گروه کنترل و آزمایشی تقسیم بندی خواهند شد. پس از کشت و تکثیر سلولهای انسانی در شرایط in vitro، اگزوزومها با روش اولتراسانتریفیوژ استخراج و سپس توسط تکنیکهای تصویربرداری، وسترن بلات و DLS تایید استخراج میگردند. دوز تزریقی اگزوزومها با کیت سنجش پروتئین سنجیده و محاسبه میگردد و سپس اگزوزومها با رنگهای چربی دوست (Dil/Dio) لیبلگذاری میشوند و بصورت داخل وریدی به رتهای گروه آزمایش بصورت تک دوز با 3 بار تزریق به فاصله 3 ساعت از هم تزریق میشوند. یک روز پس از تزریق آخر رتها بیهوش و تشریح میگردند و بافتهای مربوط به ارگانهای انتخابی نمونهبرداری میشوند و میزان ورود و جذب اگزوزومهای انسانی به داخل سلولهای بدن رتها با تکینک ایمونوفلورسنت مورد ارزیابی قرار میگیرند. نتایج و دادههای کمی و کیفی بهدست آمده از آزمایشات انجام گرفته در طول کل دوره طرح در قالب مقایسه گروههای آزمایشی بصورت چشمی یا توسط نرم افزار آماری GraphPad Prism تحلیل خواهند شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 68246 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی جذب داخل سلولی اگزوزومهای آلوژنیک (بین گونهای) در اندامهای مختلف موش صحرایی (رت) |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of the cellular uptake of allogeneic exosomes in different organs of a rat |
| نوع طرح | گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | پسادکتری |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | در دههی اخیر درمانهای بر پایه فراوردههای سلولی بدون دخالت خود سلول (cell-free therapy) بهعنوان یک گزینه درمانی مؤثر و جایگزین برای درمان اکثر بیماریها و ناهنجاریها معرفی شدهاند. نتایج حاصل از اکثر مطالعات انجامگرفته در دهه اخیر نشان داده است که سلولها قادر به تولید و آزادسازی یکسری وزیکولهای خارج سلولی از جمله اگزوزومها که بهعنوان یکی از فراوردههای سلولی محتوی بسیاری از مولکولهای زیستی فعال نظیر انواع اسیدهای نوکلئیک، لیپیدها و پروتئینها، فاکتورهای رشد بوده که بهطور افقی بین سلولها انتقال یافته و در دامنه وسیعی از فعالیتها از جمله تحریک یا مهار سلول هدف نقش دارند. در کنار مطالعات و کارآزماییهای بالینی بین گونهای مختلفی در مورد نقش درمانی اگزوزومها بر درمان و بازسازی ناهنجاری های بافتی مختلف، مطالعه ای تایید ورود داخل سلول ارگانهای مختلف اگزوزومهای آلوژنیک (بین گونهای) را ردیابی و مورد بررسی قرار ندادهاند و همچنین مسیر مکانیسم اعمال اثر اگزوزومها از طریق اثرات پاراکرین یا ورود مستقیم اگزوزومها به داخل سلول هدف را مشخص نکردهاند. از این رو، امید است نتایج این مطالعه بتواند بهعنوان راهگشایی برای مطالعات بعدی در جهت استفاده از این ترکیبات بین گونه ای و اطمینان از جذب سلولی اگزوزومها بدون بروز واکنشهای ایمنی ناخواسته در بخش پزشکی و درمان مورد استفاده قرار گیرد. |
| اهداف اختصاصی | استخراج و تایید جداسازی اگزوزوم‌های مستخرج از رده سلولی انسانی -Label گذاری اگزوزوم‌های انسانی استخراج شده و تزریق داخل وریدی به رت و ارزیابی میزان جذب و ردیابی داخل سلولی اگزوزوم‌های تزریقی داخل سلول‌ ارگان‌های حیاتی بدن رت |
| چکیده انگلیسی طرح | In the last decade, cell-free therapies based on cellular products have been introduced as an effective and alternative treatment option for the treatment of most diseases and disorders. The results of most studies in the last decade have shown that cells are able to produce and release a number of extracellular vesicles, including exosomes, which as a cellular product contain many biologically active molecules such as nucleic acids, lipids and growth proteins. Which are transmitted horizontally between cells and are involved in a wide range of activities, including stimulation or inhibition of the target cell. In addition to studies and clinical trials between different species on the therapeutic role of exosomes on the treatment and regeneration of various tissue abnormalities, a study confirming the entry into the cell of various organs of allogeneic exosomes (between species) has not been tracked and examined. Exosomes are not identified by paracrine effects or by direct entry of exosomes into the target cell. Therefore, it is hoped that the results of this study can be used as a guide for further studies to use these interspecific compounds and ensure the cellular uptake of exosomes without adverse immune reactions in medicine and treatment. 16 adult male Wistar rats, about 6 to 8 weeks old and weighing 160 to 200 grams, will be purchased. After keeping the animals for one week before the start of the experiment to adapt to the existing conditions, the rats will be randomly divided into control and experimental groups. After culturing and proliferating human cells in vitro, the exosomes were extracted by ultracentrifugation and then extracted by imaging, Western blotting, and DLS confirmation techniques. The injection dose of exosomes is measured and calculated with a protein assay kit, and then the exosomes are labeled with lipophilic dyes (Dil / Dio) and injected intravenously into rats of the experimental group as a single dose with 3 injections 3 hours apart. One day after the last injection, the rats are anesthetized and dissected, and the tissues of the selected organs are sampled, and the rate of entry and absorption of human exosomes into the cells of the rats is assessed by immunofluorescence technique. The results and quantitative and qualitative data obtained from the experiments performed during the whole design period will be analyzed visually by comparing the experimental groups or by GraphPad Prism statistical software. |
| کلمات کلیدی | اگزوزوم (Exosome): یکی از انواع وزیکولهای خارج سلولی مترشحه از انواع سلولها می باشد که مولکولهای زیستی فعال محتوی خود را بطور افقی بین سلولها انتقال و و دامنه وسیعی از فعالیتها را در سلول پذیرنده انجام میدهد. پیوند آلوژنیک (Allogeneic): پیوند سلول یا بافت از یک فرد یا گونه غیره خودی. |
| ذینفعان نتایج طرح | با پیشرفت سریع علم و فناوری، تمرکز فزاینده ای روی عوامل درمانی چند منظوره وجود دارد که می توانند سرطان و بسیاری از بیماریها را در داخل بدن درمان کنند. به تازگی، استفاده از اگزوزمها به عنوان دارویی غیر سمی و کارامد راهکار جدیدی برای درمان برخی از بیماریها را باز میکند، چراکه در کنار دارا بودن ظرفیت ترمیم/بازسازی، ضد التهاب و تعدیل سیستم ایمنی، فاقد محدودیتهای موجود در درمانهای برپایه سلولی میباشند. آنالیز توزیع زیستی اگزوزومها بویژه اگزوزومهای آلوژنیک (بین گونهای) در بدن و میزان جذب آنها داخل سلولها در شرایط in vivo، یک گام اساسی برای تعیین دوز درمانی و پیشبینی عوارض جانبی احتمالی اگزوزومها است. با این حال، این به دلیل اندازه کوچک اگزووزمها در حد نانو و ماهیت پیچیده ترکیب آنها این مبحث بسیار چالش برانگیز است. علاوه بر این، روشهای برچسب گذاری و روشهای تحلیلی توسط ویژگیهای اگزوزومهای تولید شده توسط سلولهای زنده محدود میشوند. انتظار میرود که مطالعات بیشتر و پیشرفت در روشها جهت ارائه راه حلهای ارزیابی مناسب برای درمانهای اگزوزومی با کیفیت بالا در آینده نزدیک لازم میباشد. انجام مطالعات بیشتر جهت ردیابی جذب اگزوزومهای آلوژنیک توسط بافتهای مختلف بدن برای بهبود این سیستم جذب اگزوزومی و تحویل دارو و حاملهای زیستی بر پایه اگزوزوم میتوانند کمک کننده باشند. در صورت مثبت بودن نتایج این مطالعه این اطمینان را میتوان پیدا کرد که استخراج اگزوزومها از گونهها و سلولهای مربوط به گونههای مختلف جانوری هیچ مشکلی از لحاظ ایمنی و تاثیر درمانی بر گونه متفاوت هدف ایجاد نخواهد کردو دست محققان و دانشمندان را در زمینه گسترش مطالعات بالینی مختلف باز خواهد گذاشت. بنابراین، ذینفعان اصلی این طرح محققان، دانشمندان و جامعه تحقیقاتی در زمینه کارآزماییهای بالینی تحقیقاتی بر روی اگزوزومها میباشند. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حلیمه مبارک | همکار اصلی |
| رضا رهبرقاضی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| مهدی مهدی پور | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر تزریق اگزوزوم های غیر گونه ایی در رت باعث به دام افتادن و حذف آن ها در اندام های سیستم ایمنی می شود.متن خبر استفاده از اگزوزوم ها در سال های اخیر برای درمان بیماریهای مختلف رواج یافته است. هنوز اطلاع کافی در خصوص تزریق اگزوزوم های بین گونه ایی در موجودات مختلف به درستی وجود ندارد. بر اساس نتایج این مطالعه مشخص شد که تزریق اگزوزوم های انسانی در رت ها باعث حذف انها در اندام های حیاتی مانند طحال، ریه، و کبد می شود. میزان تجمع موضعی اگزوزوم های سلول های سرطانی نسبت به اگزوزوم های سالم در این اندام ها بیشتر بود. نتایج این مطالعه حاکی از نقش سیستم ایمنی در حذف اگزوزوم ها با منشاء سلول سرطانی و سلول های سالم در اندام های حیاتی است. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر تزریق وریدی اگزوزوم های انسانی در رت ها موجب احتباس آنها در اندام های حیاتی می شود.متن خبر استفاده از اگزوزوم ها با منشاء آلوژنیک و ژنوژنیک در سال های اخیر برای درمان بیماریهای مختلف رواج یافته است. هنوز اطلاع کافی در خصوص روش های تزریق مناسب اگزوزوم ها در بین گونه های مختلف معرفی نشده است. بر اساس نتایج این مطالعه مشخص شد که تزریق اگزوزوم های انسانی در رت ها باعث تجمع و حذف آنها در اندام های حیاتی مانند طحال، ریه، و کبد می شود. بر اساس نتایج این مطالعه، میزان تجمع موضعی اگزوزوم ها با منشاء سلول های سرطانی نسبت به اگزوزوم های با منشاء سلول های سالم در این اندام ها بیشتر بود. نتایج این مطالعه حاکی از نقش سلول ها و بافت های مربوط به سیستم ایمنی در حذف اگزوزوم ها به دنبال تزریق وریدی دارد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر تزریق اگزوزومهای سلول های سالم و سرطانی انسانی در رت موجب تجمع در بافت های سیتم ایمنی می شود.متن خبر استفاده از اگزوزوم ها در سال های اخیر برای درمان بیماریهای مختلف رواج یافته است. هنوز اطلاع کافی در خصوص روش تزریق مناسب اگزوزوم ها در موجودات مختلف به درستی معرفی نشده است. بر اساس نتایج این مطالعه مشخص شد که تزریق اگزوزوم های انسانی در رت ها باعث حذف انها در اندام های حیاتی مانند طحال، ریه، و کبد می شود. میزان تجمع موضعی اگزوزوم های سلول های سرطانی نسبت به اگزوزوم های سالم در این اندام ها بیشتر بود. نتایج این مطالعه حاکی از نقش سیستم ایمنی در حذف اگزوزوم ها با منشاء سلول سرطانی و سلول های سالم در اندام های حیاتی است. |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر تزریق اگزوزومهای سلول های سالم و سرطانی انسانی در رت موجب تجمع در بافت های سیتم ایمنی می شود.متن خبر استفاده از اگزوزوم ها در سال های اخیر برای درمان بیماریهای مختلف رواج یافته است. هنوز اطلاع کافی در خصوص تزریق اگزوزوم های بین گونه ایی در موجودات مختلف به درستی وجود ندارد. بر اساس نتایج این مطالعه مشخص شد که تزریق اگزوزوم های انسانی در رت ها باعث حذف انها در اندام های حیاتی مانند طحال، ریه، و کبد می شود. میزان تجمع موضعی اگزوزوم های سلول های سرطانی نسبت به اگزوزوم های سالم در این اندام ها بیشتر بود. نتایج این مطالعه حاکی از نقش سیستم ایمنی در حذف اگزوزوم ها با منشاء سلول سرطانی و سلول های سالم در اندام های حیاتی است. |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
