بررسی فرسودگی لنفوسیت های T helper خون محیطی بیماران دریافت کننده آلوگرافت کلیه
Evaluation of the exhaustion of T helper lymphocytes in peripheral blood of kidney allograft-receiving patients
مجریان: محمد رضا اردلان , سپیده زنونی واحد
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه 25 بیمار پیوندی با سطح کراتینین بالای 2 و 25 بیمار پیوندی با سطح کراتینین زیر 2 با معیارهای ورود و خروج زیر وارد مطالعه می گردند: معیار ورود: - دریافت آلوگرافت کلیه حداقل طی 6-12 ماه اخیر - دریافت رژیم ایمونوساپرسیو استاندارد معیارهای خروج: - ابتلا به عفونت های مزمن - ابتلا بیماری های خودایمنی و التهابی - سابقه بدخیمی - سابقه آلرژی 10 میلی لیتر خون محیطی از افراد شرکت کننده در مطالعه دریافت شده، 5 میلی لیتر این خون برای جداسازی سرم در دور 300 RCF به مدت 10 دقیقه سانتریفوژ شده و سرم جداسازی می گردد. این سرم تا زمان آنالیز در فریزر منفی 70 درجه سانتیگراد نگهداری می گردد. به منظور بررسی مارکرهای PD-1 و TIGIT بر روی سلول های TCD4+ و TCD8+، خون هپارینه دریافت شده از دریافت کنندگان پیوند بصورت لوله های زیر بصورت فلوسایتومتری 3 رنگ برای هرکدام از مارکرهای PD-1 و TIGIT، رنگ آمیزی می گردد. مارکر PD-1: 1- لوله ایزوتایپ کنترل برای مارکر PD-1؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ PD-1-percp-Cy5 2- لوله compesation 1؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی تست CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ PD-1-percp-Cy5 3- لوله compesation 2؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی تست CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ PD-1-percp-Cy5 4- لوله compesation 3؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی تست PD-1-percp-Cy5 5- لوله تست؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی تست CD8-FITC، آنتی بادی تست CD4-PE و آنتی بادی تست PD-1-percp-Cy5 مارکر TIGIT: 1- لوله ایزوتایپ کنترل برای مارکر TIGIT؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ TIGIT-percp-Cy5 2- لوله compesation 1؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی تست CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ TIGIT-percp-Cy5 3- لوله compesation 2؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی تست CD4-PE و آنتی بادی ایزوتایپ TIGIT-percp-Cy5 4- لوله compesation 3؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی ایزوتایپ CD8-FITC، آنتی بادی ایزوتایپ CD4-PE و آنتی بادی تست TIGIT-percp-Cy5 5- لوله تست؛ حاوی 100 میکرولیتر خون، آنتی بادی تست CD8-FITC، آنتی بادی تست CD4-PE و آنتی بادی تست TIGIT-percp-Cy5 برای هر نمونه بالینی تمامی لوله های فوق آماده شده و آنتی بادی های اضافه شده به مدت 1 ساعت در دمای 4 درجه سانتیگراد انکوبه می گردد. سپس در دور 300 RCF سانتریفوژ شده و مایع روئی دور ریخته می شود. رسوب سلولی قبل از آنالیز فلوسایتومتری بوسیله محلول لیز RBC، RBCs نمونه خونی از بین می رود و بوسیله دستگاه فلوسایتومتری با توجه به کنترل های موجود خوانش می گردد. درصد و MFI مارکرهای PD-1 و TIGIT بر روی سلول های TCD4+ و TCD8+ خوانش می گردد. سطح سرمی کراتینین و BUN نمونه های دریافت شده بوسیله کیت های کالریمتریک تجاری اندازه گیری می گردد. ارتباط بیان مارکرهای موردمطالعه و سطح سایتوکاین ها با سطح کراتینین و BUN بیماران مورد مطالعه از طریق آزمون همبستگی تعیین خواهد گردید.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 67256 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی فرسودگی لنفوسیت های T helper خون محیطی بیماران دریافت کننده آلوگرافت کلیه |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of the exhaustion of T helper lymphocytes in peripheral blood of kidney allograft-receiving patients |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | غربالگری و پایش روند بیماریهای غیرواگیر با تاکید بر بیماریهای کلیوی |
| نوع مطالعه | بررسی مقطعی ( Cross Sectional) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دستیار تخصصی بالینی (رزیدنتی) |
| مدت اجرا - ماه | 9 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | در مطالعات حیوانی، شواهد متعددی مبنی بر اهمیت مولکول های مهاری در پذیرش انواع پیوند وجود دارد. با این وجود مطالعات انسانی در این زمینه محدود بوده و تعیین اهمیت نسبی هرکدام از مولکول های مهاری در تعدیل پاسخ ایمنی آلوژنیک در انسان از اهمیت بالایی برخوردار است. مسیر PD-L1/PD-1 یکی از مسیرهای مهم تنظیمی می باشد که برخلاف CTLA4 قابلیت تاثیرگذاری بر سلولهای T effector را داشته و می تواند سیگنال مهاری خود را علاوه بر گیرنده PD-1، از مسیر CD28 نیز اعمال کند. در مدل های حیوانی، مهار این مسیر باعث رد حاد آلوگرافت ریه می شود. همچنین پیوند آیلت پانکراس از دهنده های PD-L1-/- از بقای کمتری نسبت به آیلت های طبیعی برخوردار بوده است. مولکول T cell Immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT) یک مولکول کمک مهاری بیان شونده بر روی سلول های T و NK است که لیگاند اصلی آن مولکول CD155 (Polio Virus Receptor) می باشد. سیگنالینگ این مولکول یک تنظیم کننده منفی عملکرد لنفوسیت های T می باشد و از طریق غیر فعال سازی سیگنالینگ های فعال سلولی و تاثیر بر متابولیسم سلولی، موجب فرسودگی پاسخ های ایمنی می گردد. هرچند مولکول های مهاری دیگری از جمله PD-1 بیشتر مورد توجه مطالعات بوده اند، برخی مطالعات احتمال می دهند این مسیر سیگنالینگ تاثیر بیشتری بر انواع پاسخ های ایمنی دارد. مطالعاتی حاکی از تاثیر احتمالی بیان این مولکول بر تولرانس علیه پیوند آلوژنیک می باشد. با توجه به اهمیت مولکول های ذکر شده در تولرانس بر علیه آلوگرافت ها و نیز مشخص نبودن نقش این مولکول ها در موارد انسانی ایجاد تولرانس نسبت به آلوگرافت کلیه، هدف این مطالعه تعیین ارتباط احتمالی بیان مولکول های ذکر شده در لنفوسیت های T خون محیطی بیماران پیوندی با عملکرد کلیه پیوندی می باشد. همچنین ارتباط ایمونولوژیک تفاوت های نسبی مشاهده شده در پذیرش آلوگرافت کلیه در دریافت کنندگان مختلف بررسی خواهد گردید. |
| اهداف اختصاصی | تعیین درصد سلول های TCD4+, PD-1hi خون محیطی افراد دریافت کننده آلوگرافت کلیه -تعیین درصد سلول های TCD4+, TIGIT+ خون محیطی افراد دریافت کننده آلوگرافت کلیه -تعیین ارتباط بیان مارکرهای PD-1 و TIGIT با سطوح کراتینین و BUN سرم -تعیین ارتباط مارکرهای مولکولی بررسی شده با درصد PRA و قبل از پیوند |
| چکیده انگلیسی طرح | Kidney transplantation is the most promising treatment for most of the end-stage renal diseases (ESRDs). Alloreactive immune responses however remain as a serious obstacle ahead of long-term survival of kidney allografts. Regarding that immune responses could take place at earlier time points prior to establishment of kidney injury, monitoring the status of immune system against allograft might help the better management of alloreactive immune responses. Thus, introducing the liable markers of immune system status against allografts is of high importance. Immune system harnesses multiple mechanisms to keep homeostasis and anergy that the immune inhibitory molecules are one the important game players. Lymphocyte co-inhibitory molecules constitute a large group of immunomodulatory molecules affecting the various aspects of immune responses. These molecules were first described in chronic immune responses such as viral infections and malignancies. The expression of a series of these molecules is associated with exhaustion of immune cells and their un-responsiveness. The importance of these molecules in allo-transplantation has also been documented. T cell exhaustion is probably associated to lower alloreaction and fair prognosis. Programmed cell death receptor-1 (PD-1) and T cell immunoreceptor with Immunoglobulin and ITIM domains (TIGIT) are two notable members of lymphocyte co-inhibitory molecules that can cause to metabolic changes and exhaustion of T cells that make them unresponsive. It was not well defined whether the expressions of these molecules on T cells of graft-receiving patients could reflect the tolerance against allografts or not. The aim of the present study is to evaluate the expression of PD-1 and TIGIT on T helper lymphocytes of kidney allograft-bearing patients. |
| کلمات کلیدی | فرسودگی پاسخ ایمنی (exhaustion): حالتی در سلول های ایمنی که معمولا در اثر مواجهه طولانی مدت با آنتی ژن ایجاد شده و می تواند به تولرانس علیه آلوگرافت کمک کند. PD-1: یک گیرنده مهاری بیان شده توسط سلول های T و NK cell به منظور تنظیم پاسخ ایمنی TIGIT: یک گیرنده مهاری بیان شده توسط سلول های T و NK cell به منظور تنظیم پاسخ ایمنی تولرانس ایمونولوژیک: بی پاسخی و تحمل سیستم ایمنی نسبت به آنتی ژن بیگانه |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران دریافت کننده پیوند کلیه |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمد رضا اردلان | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| سپیده زنونی واحد | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| مریم کرجی بانی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| علیرضا مردمی | همکار اصلی |
| سیده مینا حجازیان | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر بیماران پس از پیوند کلیه درصد بالاتری از سلول های T helperبیان کننده ( PD-1 (CD4 , PD-1در خون محیطی داشتند.متن خبر مولکول T cell Immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT) یک مولکول کمک مهاری بیان شونده بر روی سلول های T و NK است که لیگاند اصلی آن مولکول CD155 می باشد. سیگنالینگ این مولکول یک تنظیم کننده منفی عملکرد لنفوسیت های T می باشد و از طریق غیر فعال سازی سیگنالینگ های فعال سلولی و تاثیر بر متابولیسم سلولی، موجب فرسودگی پاسخ های ایمنی می گردد. با توجه به مشخص نبودن نقش این مولکول ها در موارد انسانی ایجاد تولرانس نسبت به آلوگرافت کلیه، هدف این مطالعه تعیین ارتباط بیان این مولکول هادر لنفوسیت های T خون محیطی بیماران پیوندی بود. نتایج حاکی از آن بود که بیماران پیوندی با کراتینین سرمی زیر 2 میلی گرم بر دسی لیتر که بطور میانگین بالاتر از 130 ماه از زمان پیوند کلیه آنان سپری شده بود در مقایسه با بیماران با کراتینین سرمی بالای 2، تفاوتی از لحاظ درصد سلول های T helper نداشتند ولی درصد بالاتری از سلول های T helper بیان کننده PD-1 (CD4 , PD-1 ) در خون محیطی داشتند. توصیه می شود علاوه بر انجام مطالعات آتی با رفع محدودیت های این مطالعه، بررسی فرسودگی سلول T در بیماران پس از انجام پیوند کلیه برای دستیابی به نتایج درمانی بهتر انجام شود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
