بررسی فراوانی گونه‌های کاندیدا دربیماران نوتروپنی مراجعه کننده به بیمارستان شهید قاضی وابسته به دانشگاه علوم پزشکی تبریز و الگوی حساسیت دارویی آن‌ها نسبت به کاسپوفانژین و وریکونازول

مجریان: صنم نامی , مرتضی رئیسی

خلاصه روش اجرا: در این طرح گونه‌های کاندیدا طی یک سال (که براساس مطالعات قبلی در ایران 50 نمونه در نظر گرفته شده است.) از بیماران نوتروپنی بستری در بیمارستان شهید قاضی آذربایجان شرقی جدا خواهد شد و به روش‌های میکروسکوپی و مولکولی تعیین هویت گشته و حساسیت آن‌ها نسبت به کاسپوفانژین و وریکونازول مشخص می‌گردد. برای تعیین گونه‌های کاندیدا ابتدا نمونه گیری از دهان، خون و ادرار بیماران نوتروپنی انجام می‌گیرد. به منظور نمونه گیری از ضایعات دهانی با استفاده از سواب آغشته با آب مقطر استریل یا نرمال سالین از نواحی آلوده برداشت شده و به آزمایشگاه قارچ شناسی دانشکده پزشکی انتقال میابد. برای نمونه گیری از خون از BACTEC Myco/F Lytic culture استفاده شده که 5-10 سی سی از خون بیمار وارد محیط کشت شده و به منظور انکوباسیون به انکوباتور منتقل می‌گردد. برای نمونه گیری از ادرار از ادرار میانی صبح گاهی بیماران استفاده شده و پس از سانتریفوژ ، رسوب حاصل در محیط کشت SDA کشت داده خواهد شد.بعد از نمونه گیری از بیماران، به منظور تعیین گونه‌های کاندیدا از روش‌های افتراقی بیوشیمیایی، میکروسکوپی و کشت استفاده می‌گردد. ابتدا تمام گونه‌ها با استفاده از روش مرسوم (از جمله مورفولوژی میکروسکوپی و ماکروسکوپی، تشکیل لوله زایا، جذب کربوهیدرات، تخمیر کربوهیدرات و آزمایش اوره‌آز) شناسایی می‌شوند. و در ادامه برای بررسی خلوص و غربالگری کلنی‌های کاندیدا از محیط کشت کروم آگارکاندیدا ساخت کشور فرانسه(CHROMagar, France) استفاده می‌شود.برای تعیین MIC هر یک از ایزوله‌های فوق نسبت به داروی وریکونازول و کاسپوفانژین به طریق in vitro و با استفاده از روشBroth microdilution و بر اساس پروتوکل استاندارد CLSI M27-A3/S4 انجام می‌گیرد[11]. پس از استخراج DNA ایزوله‌های کاندیدا، با استفاده از پرایمرهای ، ITS1 و ITS4 ، مناطق rDNA ITS1-5.8S-ITS2 را به روش PCR تکثیر کرده و پس از تایید تشکیل باندهای مورد انتظار، با استفاده از آنزیم‌های محدود کننده‌ی MspI با روش PCR-RFLP اقدام به تعیین گونه به روش مولکولار می‌کنیم.