بررسی اثر siRNA در بیان انکوپروتئین E6 ویروس پاپیلومای HPV16 بر تکثیر، تهاجم و مرگ سلولی در سلول های سرطانی CaSKi
Investigating the role of the siRNA on the expression of HPV16 E6 oncoprotein on the proliferation and cell cycle progression of CaSKi
مجریان: حسین بنازاده باغی , بهزاد برادران
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه، به منظور بررسی اثر سایتوتوکسیک مولکولهای siRNA روی سلولها و همچنین تعیین غلظت ایده آل ترانسفکشن از آزمایش MTT استفاده میگردد. سلولهای ترانسفکت شده با غلظت های مختلف siRNA، در پلیتهای 96 چاهکی کشت داده می شوند. به منظور بررسی اثربخشی روش ترانسفکت یا الکتروپوریشن در ورود siRNA به درون سلول ازScrambled siRNA جهت تعیین اختصاصی بودن siRNA استفاده خواهد شد. پس از 24 ساعت از انکوباسیون، محیط کشت جدید حاوی MTT، به سلولها افزوده شده و پس از افزودن بافرها و محلولهای مناسب جذب نوری در 570 نانومتر خوانده میشود؛ تا میزان مرگ و میر سلول ها مورد بررسی قرار گیرد. همچنین برای بررسی میزان سرکوب بیان ژنهایHPV E6 از روش qRT- PCR استفاده میشود. بدین منظور پس از مدت زمان کافی از ترانسفکشن سلولی توسط siRNA، RNAی کل سلولی (Total RNA) توسط معرف TRIZOL استخراج شده و پس از سنتز cDNA با روش SYBER Green quantitative PCR میزان بیان ژنها بررسی میگردد. در نهایت برای بررسی مهار مهاجرت، از روشWound Healing Assay استفاده می شود. بدین منظور زمانی که سلول¬های ترانسفکت شده به کف پلیت چسبیده و به تراکم 80 درصد رسیدند با استفاده از نوک سر سمپلر خراشی در وسط لایه سلولی کف پلیت ایجاد کرده و سلول های جدا شده به همراه محیط کشت قدیمی به آرامی از چاهک ها خارج شده و پس از شستشو با PBS، محیط کشت جدید به چاهک ها اضافه می شود و یک چاهک هم به عنوان کنترل بدون اضافه کردن تیمار در نظر می گیریم. نتایج چاهک ها را با میکروسکوپ عکس برداری کرده و مهاجرت سلول ها از لبه شکاف به محل شکاف در نمونه های تیمار شده را با نمونه های کنترل مقایسه می کنیم. آنالیز آماری با استفاده از آزمون Student t- Test و توسط نرم افزار GraphPad Prism انجام خواهد گرفت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 66453 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر siRNA در بیان انکوپروتئین E6 ویروس پاپیلومای HPV16 بر تکثیر، تهاجم و مرگ سلولی در سلول های سرطانی CaSKi |
| عنوان لاتین طرح | Investigating the role of the siRNA on the expression of HPV16 E6 oncoprotein on the proliferation and cell cycle progression of CaSKi |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | اپیدمیولوژی، پیشگیری، تشخیص زودهنگام، درمان و بازتوانی در سرطانهای شایع |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | از روش هایی که برای درمان سرطان دهانه رحم بکار می رود؛ می توان به داروهای مورد استفاده در شیمی درمانی، جراحی، رادیوتراپی و ایمونوتراپی اشاره کرد، که از جمله ی معایب آن¬ها عود مجدد بیماری، سایتوتوکسیک بودن روی سلول¬های غیرسرطانی، هزینه بالای درمان و عوارض جانبی آنهاست. با توجه به معایب ذکر شده و همچنین مزایای بکارگیری siRNA ها ، و از آنجایی که موارد یافت شده ناشی از سرطان دهانه رحم بیشتر مرتبط با ویروس HPV16 بوده و با توجه به عملکرد مهم آنکوپروتئین E6 در فرآیند ترانسفورماسیون سلول های آلوده به ویروس HPV، این مطالعه با هدف بررسی عملکرد siRNA بر مهار بیان ژن HPV E6 در سلول های CaSKi و تاثیر این مهار بر بیان ژن های مسئول آپوپتوز، تهاجم سلولی و چرخه ی سلولی در سلول های آلوده به ویروس برای اولین بار انجام خواهد شد؛ تا هدفی برای درمان سرطان دهانه ی رحم ناشی از ویروس HPV16 قرار گیرد. |
| اهداف اختصاصی | بررسی اثر سایتوتوکسیک سرکوب mRNA E6 توسط siRNA اختصاصی در رده ی سلولی CaSki به روش MTT assay و ژن های آپوپتوزی BAX و BCL2 -Transfection رده ی سلولی CaSKi دارای ژنوم HPV با siRNA و بررسی تهاجم سلولی با روش wound healing assay -Transfection رده ی سلولی CaSKi دارای ژنوم HPV-16 با siRNA و بررسی ژن های وابسته به تهاجم سلولی (MMPs) و تکثیر سلولی (vimentin و فاکتور های رشد( |
| چکیده انگلیسی طرح | In this study, MTT assay is used to evaluate the cytotoxic effect of siRNA molecules on cells and also to determine the ideal concentration of transfection. Transfected cells with different concentrations of siRNA are cultured in 96-well plates. Scrambled siRNA will be used to determine the specificity of siRNA in order to evaluate the effectiveness of the transfection method or electroporation in the entry of siRNA into the cell. After 24 hours of incubation, a new culture medium containing MTT is added to the cells and after adding buffers and suitable light absorption solutions is read at 570 nm; To examine cell mortality. The qRT-PCR method is also used to evaluate the suppression of HPV E6 gene expression. For this purpose, after sufficient time of cell transfection by siRNA, Total RNA is extracted by TRIZOL reagent and after cDNA synthesis, the expression of genes is checked by SYBER Green quantitative PCR. Finally, the Wound Healing Assay method is used to investigate migration inhibition. For this purpose, when the transfected cells adhere to the bottom of the plate and reach a density of 80%, using the tip of the sampler, make a scratch in the middle of the cell layer of the bottom plate and the isolated cells with the old culture medium gently come out of the wells. After washing with PBS, a new culture medium is added to the wells and a well is considered as a control without adding treatment. The results of the wells photograph by the microscope; And we compare the migration of cells from the edge of the gap to the site of the gap in the treated samples with the control samples. Statistical analysis will be performed using Student t-Test and GraphPad Prism software |
| کلمات کلیدی | پروتئین های E ویروسی: پروتئین هایی که ویروس در فاز اولیه ی آلوده کردن سلول شروع به ساخت آنها می کند. پروتئین های L ویروسی: پروتئین هایی که ویروس در فاز تأخیری آلوده کردن سلول شروع به ساخت آنها می کند. ترانسفورماسیون: فرآیند تغییر شکل و تغییر مسیر های متابولیکی سلول در جهت بدخیم شدن را گویند. موتاسیون: فرآیند جهش در ژن را گویند. P53 و pRb: نوعی از پروتئین های سرکوب کننده ی تومور زایی در چرخه ی سلولی هستند. Transfection: انتقال یک ژن خاص به درون سلول بواسطه ی وکتور را گویند. CaSki: رده های سلولی سرطان دهانه ی رحم که دارای ژنوم ویروس پاپیلومای انسانی هستند و همچنین رو نوشت های پروتئین HPV E5 در آن ها موجود می باشد. knock down : اختلال ژنتیکی در سطح DNA، RNA و یا پروتئین، که میزان عملکرد پروتئین را کاهش می¬دهد. Dlg : برای گردهمایی نرمال اتصالات سلولی مورد نیاز است. MAGI-1 : پروتئین کدگذاری شده توسط این ژن ، عضو خانواده هموژن گوانیلات کیناز مرتبط با غشایی است. (membran associated guanylate kinas ) |
| ذینفعان نتایج طرح | طرح مورد نظر فاقد ذینفعان طرح میباشد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حسین بنازاده باغی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| بهزاد برادران | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| امیر علی مختارزاده | مشاور |
| وحدت پورطهماسبی | مشاور |
| پریسا شیری آقباش | دانشجوی مالک پایان نامه |
| نیما همت | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر درمان ترکیبی E6 ویروس در سرطان دهانه رحم موثر است.متن خبر با توجه به اینکه تقریبا تمام موارد گزارش شده از سرطان دهانه رحم مرتبط با ویروس پاپیلومای انسانی است، این سرطان به عنوان چهارمین سرطان شایع در بین زنان در سراسر جهان میباشد. بنابراین ارائه راهبردی مناسب جهت پیشگیری، تشخیص و درمان ضروری میباشد. از سوی دیگر، داروهای شیمی درمانی به دلیل عدم اختصاصیت منجر به افزایش مقاومت دارویی و سمیت سیستمیک می گردند؛ در نتیجه، ژن درمانی با داروهای ضد سرطان یک روش درمانی موثر میباشد. به عبارت دیگر، درمان ترکیبی منجر به افزایش قابل توجه اثربخشی درمان در مقایسه با تک درمانی می شود. در این راستا، مطالعه ما نشان داد که درمان ترکیبی داروی اگزالیپلاتین و siRNA به طور جالب توجهی تنها بافت توموری را هدف قرار می دهد و متعاقبا آسیب به بافت طبیعی و پیشرفت بدخیمی کاهش می یابد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
