اثر نانوذرات روتین بر بیان ژنهای کاسپاز 8، کاسپاز 9، Bax ,Bcl2 , Stat3در سلولهای سرطان دهان (HN5)
The effect of rutin nanoparticles on the expression of Caspase-8, Caspase-9, Stat3, Bax and Bcl2 genes in oral cancer cells (HN5)
مجریان: سیمین شریفی
خلاصه روش اجرا: با توجه به این که عوارض داروهای شیمیایی جهت شیمی درمانی در بیماران سرطانی چشمگیر می باشد و مصرف مواد طبیعی همانند روتین که اثرات ضد سرطانی و ویژگی های ممانعت از ایجاد سرطان را هم داراست، و همچنین اثران چشم گیر داروهای سرطانی در فرم نانوذرات، بر آن شدیم که در این تحقیق اثر ماده ضد سرطانی نانوروتین بر روی سلولهای سرطان دهان مورد بررسی قرار دهیم. به منظور انجام این آزمایشات، سلولهای HN5 (که low passage می باشد) بصورت تک لایه در محیط DMEM با گلوکز بالا حاوی سرم 10% (FBS یا Fetal Bovin Serum) و آنتی بیوتیک کشت داده شده و پس از رسیدن به سطح Confluency ، با نانوروتین تهیه شده در رقتهای مختلف مواجه می شوند. پس از کشت سلولهای سرطان دهان تریت سلولها با نانوروتین، RNA از سلول های مزبور استخراج خواهد شد. با استفاده از 1 میکرو گرم RNA واکنش RT ست می گردد. واکنش در دستگاه ترموسایکلر بر طبق برنامه دمایی خاص آغاز می شود. در ادامه با استفاده از روش Real time-PCR نسخه های ژنهای کاسپاز 8، کاسپاز 9، stat3, bax و bcl-2 بررسی و تعیین مقدار می شود. بطور خلاصه برای هر ژن یک جفت Primer طراحی شده و با استفاده از 10 نانوگرم cDNA ، بافر، پرایمرها، کلرید منیزیم، dNTP’s و آنزیم Tag-Polymerase واکنش PCR آماده می گردد. لازم به توضیح است که برای کنترل تغییرات بین نمونه ای، از Housekeeping Gene ß-Actin استفاده خواهد شد و از نسبت دانسیته ژن مورد نظر بر ß-Actin برای گزارش نتایج استفاده خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 66412 |
| عنوان فارسی طرح | اثر نانوذرات روتین بر بیان ژنهای کاسپاز 8، کاسپاز 9، Bax ,Bcl2 , Stat3در سلولهای سرطان دهان (HN5) |
| عنوان لاتین طرح | The effect of rutin nanoparticles on the expression of Caspase-8, Caspase-9, Stat3, Bax and Bcl2 genes in oral cancer cells (HN5) |
| نوع طرح | گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | اپیدمیولوژی، پیشگیری، تشخیص زودهنگام، درمان و بازتوانی در سرطانهای شایع |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | با توجه به این که عوارض داروهای شیمیایی جهت شیمی درمانی در بیماران سرطانی چشمگیر می باشد و مصرف مواد غذایی طبیعی همانند روتین که اثرات ضد سرطانی و ویژگی های ممانعت از ایجاد سرطان را هم داراست، بر آن شدیم که در این تحقیق اثر ماده ضد سرطانی نانوذرات روتین بر روی سلولهای سرطان دهان مورد بررسی قرار دهیم. در این مطالعه اثر نانوذرات روتین بر روی برخی ژنهای کاسپاز8 ، کاسپاز 9 و stat3, BCL-2, bax مورد بررسی قرار خواهد گرفت. |
| اهداف اختصاصی | بررسی اثر نانوذرات روتین بر بیان ژنهای کاسپاز 8، کاسپاز 9، stat3، Bax و Bcl2 در سلولهای سرطان دهان (HN5) توسط روش RT-Real time PCR |
| چکیده انگلیسی طرح | In order to perform these experiments, HN5 cells (which is low passage) were cultured as monolayers in DMEM medium with high glucose containing 10% serum (FBS or Fetal Bovin Serum) and antibiotics and after will be treated with different concentration of nanorutin. RNA will be extracted from these cells. The RT reaction is set using 1 μg of RNA. The reaction in the thermocycler starts according to a specific temperature program. Then, using Real time-PCR method, the genes of caspase 8, caspase 9, stat3, bax and bcl-2 are examined and quantified. Briefly, a pair of primers is designed for each gene and a PCR reaction is prepared using 10 ng of cDNA, buffer, primers, magnesium chloride, dNTP’s, and Tag-Polymerase enzyme. It should be noted that Housekeeping Gene ß-Actin will be used to control changes between samples, and the density ratio of the gene to ß-Actin will be used to report results. |
| کلمات کلیدی | آپوپتوز (Apoptosis): مرگ برنامه ریزی شده سلول (6) RT- PCR: واکنش زنجیره پلیمراز نسخه برداری معکوس ( Reverse Transcriptase-PCR ) که ابتدا ریبو نوکلئیک اسید (RNA ) توسط آنزیم نسخه بردار معکوس به DNA تبدیل شده و سپس توسط واکنش زنجیره پلیمراز (PCR) به نسخه های فراوان تکثیر می شود (15). Confluency: پوشیده شدن سطح کشت از تک لایه سلولی (16) فراورده هاي دارويي و گياهي |
| ذینفعان نتایج طرح | ذینفعان این طرح در صورت مثبت بودن نتایج مطالعه احتمالا بیماران مبتلا به سرطان دهان خواهند بود. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| سیمین شریفی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| سولماز ملکی دیزج | همکار اصلی |
| سپیده زنونی واحد | همکار اصلی |
| شهریار شاهی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر نانوذرات روتین بر بیان ژنهای کاسپاز 8، کاسپاز 9، Bax ,Bcl2 , Stat3در سلولهای سرطان دهان (HN5) اثر دارد.متن خبر گزارش ها نشان می دهد که روتین پتانسیل خوبی به عنوان یک عامل ضد سرطان دارد. با این حال، روتین به دلیل حلالیت آبی کم، فراهمی زیستی ضعیفی دارد. مطالعه حاضر با هدف تهیه و ارزیابی خواص فیزیکوشیمیایی و همچنین فعالیت ضد سرطانی نانوبلورهای روتین (RNs) انجام شد.RN های تهیه شده دارای میانگین اندازه ذرات 0:16 ± 75 نانومتر و مورفولوژی شبه کروی بودند. روتین هیچ اثر سیتوتوکسیک قابل توجهی بر روی سلول های HN5 تا 2000 میکرومولار نشان نداد. با این حال، RNs یک اثر سیتوتوکسیک IC50 30.51 میکرومولار و 27.34 میکرومولار به ترتیب در زمانهای انکوباسیون 24 و 48 ساعت نشان دادند (P <0.05). RN ها 100 برابر بیشتر از روتین روی سلول های HN5 اثر سیتوتوکسیک داشتند. هیچ اثر سیتوتوکسیک قابل توجهی بر روی HGF1-PI1 تحت تیمار با RN در 24 و 48 ساعت وجود نداشت. بیان mRNA ژن Bcl-2 در حضور RNها در مقایسه با گروه کنترل به طور معنیداری کاهش یافت (P <0.05). افزایش نسبت Bax/Bcl-2 در IC50 RNها در 24 ساعت آشکار شد. نتایج ما تایید می کند که اثر ضد سرطانی RN ها به طور قابل توجهی بیشتر از روتین است. فعال شدن مسیر آپوپتوز وابسته به میتوکندری RNها از طریق مدولاسیون Bcl-2 و Bax رخ داد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
