بررسی اثر ترکیبی ایمونوتراپی با DC های پالس شده با لیزات تومور سینه و مهار کننده CTLA-4 بر روی پاسخ سلول های T
Investigation of the combined effect of immunotherapy with DCs pulsed with Breast tumor cell lysates and CTLA-4 inhibitor on T cell response
مجریان: بهزاد برادران , داریوش شانه بندی
خلاصه روش اجرا: استفاده از روش های متدوال به منظور درمان سرطان سینه با محدودیت هایی از قبیل بروز عوارض جانبی جدی، وجود مقاومت دارویی، غیر اختصاصی بودن دارو و عود سرطان در نواحی دور دست همراه است. سلول های دندریتیک جدا شده از بیماران مبتلا به سرطان سینه میتوانند در شرایط آزمایشگاهی با آنتی ژن های تومور مورد نظر فعال شوند و پس از فعال شدن مجددا به بیماران تزریق گردند تا پاسخ های ایمنی را فعال یا تقویت کنند. این روش بطور موثری پاسخ های سایتوتوکسیک را در برابر آنتی ژن های توموری آغاز می کند. CTLA-4 یکی از گیرنده های مهاری موجود بر روی دندریتیک سل های مشتق از مونوسیت ها(mDC)می باشد که در ریز محیط تومور باعث اختلال عملکردی این سلول ها میشود. لذا میتوان با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال یا siRNA میزان بیان آنرا کاهش داد و عملکرد این دندریتیک سل ها را تاحدودی بهبود بخشید. siRNAها مولکول های RNA دو رشته ای هستند که قادرند با اتصال به mRNA هدف بیان آن را مهار کنند. در این مطالعه هدف آن است که سلول های دندریتیک را با لیزات تومور سینه پالس کرده و با استفاده از مهار کننده های CTLA-4، بیان این گیرنده را روی دندریتیک سل های مشتق از مونوسیت ها مهارکرده و سپس تاثیر این مهار را بر روی لنفوسیت هایT بررسی کنیم. برای رسیدن به این هدف، ابتدا PBMC ها را با استفاده از محلول فایکول از خون محیطی جدا می کنیم. سپس مونوسیت ها را بوسیله خاصیت چسبندگی آنها به سطوح پلی استایرن، از PBMC جداکرده و با استفاده از سایتوکاین هایی مثل GM-CSF و IL-4 دندریتیک سل های مشتق از مونوسیت(mDCs) را تولید می کنیم. پس از فنوتایپینگ دندریتیک سل ها، در مرحله بعدی سلول های دندریتیک را با لیزات تومور سینه پالس کرده و CTLA-4 را در سطح آن ها با استفاده از siRNA یا آنتی بادی مونوکلونال مهار می کنیم. در گام بعدی با استفاده از فلوسایتومتری یا qRT-PCR میزان بیان CTLA-4 آن ها را اندازه گیری می کنیم. در نهایت سلول های T جداشده از PBMC با روش MACS را، با چنینmDC هایی کشت میدهیم و میزان تکثیر لنفوسیت های T را با روش فلوسایتومتری و میزان تولید سایتوکاین ها توسط آن ها را با روش الایزا بررسی میکنیم.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 66131 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر ترکیبی ایمونوتراپی با DC های پالس شده با لیزات تومور سینه و مهار کننده CTLA-4 بر روی پاسخ سلول های T |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of the combined effect of immunotherapy with DCs pulsed with Breast tumor cell lysates and CTLA-4 inhibitor on T cell response |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | امروزه مطالعات گسترده ای جهت درمان و کنترل روند بیماری سرطان سینه انجام میگیرد. در مطالعات انجام گرفته شواهد محکمی دال بر مهار ایمیونوچک پوینت ها و کنترل سرطان سینه نشان داده شده است. یکی از مهم ترین ایمیونوچک پوینت ها در کنترل پاسخ های مرتبط با لنفوسیت هایT، CTLA-4 میباشد که در دندریتیک سل های مرتشحه به محیط تومور به میزان بالایی بیان شده و در عملکرد صحیح این سلول ها اختلال ایجاد میکند و مانع از عرضه مناسب آنتی ژن توسط این سلول ها به لنفوسیت های T میگردد. لیزات سلول های سرطانی یکی از مناسب ترین منابع جهت پالس کردن آنتی ژن های توموری به دندریتیک سل ها و القای پاسخ های اختصاصی لنفوسیت های T میباشد. در این مطالعه اثر ترکیبی مهار CTLA-4 در کنار ایمونوتراپی با دندریتیک سل های پالس شده با لیزات تومور سینه را، بر میزان پاسخ های مرتبط با لنفوسیت های T بررسی خواهیم کرد. |
| اهداف اختصاصی | تولید سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت های انسانی (mDCs) از مونوسیت های خون محیطی و پالس کردن سلول های القا شده با لیزات تومور سینه -بررسی میزان بیان سطحی CTLA-4 در سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت های انسانی پس از مهار آن با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال یا siRNA به روش فلوسایتومتری یا qRT-PCR -بررسی اثر همکشتی mDC های پالس شده با لیزات تومور سینه پس از مهار CTLA-4 بیان شده روی آن ها با سلول هایT در میزان تکثیر این لنفوسیت ها به روش فلوسایتومتری -بررسی اثر mDC های پالس شده با لیزات تومور سینه پس از مهار CTLA-4 سطح این سلول ها در میزان تولید سایتوکاین از لنفوسیت های T به روش الایزا |
| چکیده انگلیسی طرح | The use of conventional methods to treat breast cancer is associated with limitations such as the occurrence of serious side effects, drug resistance, non-specificity of the drug, and cancer recurrence in distant sites. Isolated dendritic cells from patients with breast cancer can be activated in vitro with the desired tumor antigens and re-injected into patients after activation to initiate or enhance immune responses. This method effectively begins cytotoxic responses to tumor antigens. CTLA-4 is one of the inhibitory receptors on monocyte-derived dendritic cells (mDCs) that disrupt the function of these cells in the microenvironment of the tumor. Therefore, using monoclonal antibody or siRNA can reduce its expression and improve the function of these dendritic cells to some extent. siRNA molecules are double-stranded RNA that can bind to target mRNA to inhibit its expression. This study aimed to pulse dendritic cells with colorectal tumor lysates and inhibit the expression of this receptor on monocyte-derived dendritic cells using CTLA-4 inhibitors and then evaluate the effect of this inhibition on T lymphocytes. To achieve this goal, we first separate the PBMCs from the peripheral blood using the ficoll solution. Monocytes are then isolated from PBMCs due to their adhesion to polystyrene surfaces, and monocyte-derived dendritic cells (mDCs) are produced using cytokines such as GM-CSF and IL-4. After phenotyping the dendritic cells, the next step is to pulse the dendritic cells with tumor breast lysis and inhibit CTLA-4 on their surface using siRNA or monoclonal antibody. In the next step, we measure their CTLA-4 expression using flow cytometry or qRT-PCR. Finally, T cells isolated from PBMC were cultured by the MACS method with such mDCs and the rate of T lymphocyte proliferation was determined by flow cytometry and the amount of cytokine production by them through ELISA method. |
| کلمات کلیدی | سرطان سینه : نوعی از سرطان که به علت رشد کنترل نشده سلول های بدخیم در سینه ایجاد می شود. سلول های دندریتیک مشتق از مونوسیت ها(mDCs): سلول هایی هستند که در انسان، تحت شرایط التهابی، از مونوسیت هایی که CD14 را به میزان بالایی بیان میکنند، متمایز میشوند. CTLA-4 : نوعی پروتئین ترانس ممبران نوع یک، از سوپر خانواده ایمونوگلوبولین ها میباشد که نقش مهمی در تنظیم منفی پاسخ های ایمنی وابسطه به سلول های T دارد. RNA های کوچک تداخل گر(siRNA): RNA های کوچکی به طول حدود 25-20 نوکلئوتید هستند که با اتصال به قسمت 3ˊ-UTR انتهای mRNA باعث مهار ترجمه و تجزیه آن می شوند. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمد بخشی وند | دانشجوی مالک پایان نامه |
| بهزاد برادران | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| داریوش شانه بندی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| فرهاد جدیدی نیارق | مشاور |
| لیلی عاقبتی | مشاور |
| سیامک صندوقچیان | مشاور |
| زهرا اسدزاده | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر مهار بیان CTLA-4 در mDC ها به طور قابلتوجهی بلوغ و فعالیت تحریکی آنها را در سرطان سینه بهبود بخشید.متن خبر سلول های دندریتیک جدا شده از بیماران مبتلا به سرطان سینه میتوانند در شرایط آزمایشگاهی با آنتی ژن های تومور مورد نظر فعال شوند و پس از فعال شدن مجددا به بیماران تزریق گردند تا پاسخ های ایمنی را فعال یا تقویت کنند. این روش بطور موثری پاسخ های سایتوتوکسیک را در برابر آنتی ژن های توموری آغاز می کند.
CTLA-4 یکی از گیرنده های مهاری موجود بر روی دندریتیک سل های مشتق از مونوسیت ها(mDC)می باشد که در ریز محیط تومور باعث اختلال عملکردی این سلول ها میشود. در این مطالعه هدف آن است که سلول های دندریتیک را با لیزات تومور سینه پالس کرده و با استفاده از مهار کننده های CTLA-4، بیان این گیرنده را روی دندریتیک سل های مشتق از مونوسیت ها مهارکرده و سپس تاثیر این مهار بر روی لنفوسیت هایT بررسی شود.
مهار بیان CTLA-4 در mDC ها به طور قابلتوجهی بلوغ و فعالیت تحریکی آنها را بهبود بخشید. CTLA-4 silenced mDCs ظرفیت بالاتری برای تحریک تکثیر سلول های T CD3 نسبت به mDC ها داشتند. co-culture سلول های T اتولوگ و CTLA-4 silenced mDC ها منجر به تولید سطوح بیشتری از IFN-γ و IL-4 از سلول های T نسبت به همکشتی سلول های T/mDCs شد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
