بررسی فیتو شیمیایی وارزیابی اثرات سمیت عمومی و آنتی اکسیدانی (Vent.) Link Zosimia absinthifolia

مجریان: فریبا حشمتی افشار , لاله خدائی

خلاصه روش اجرا: نمونه گیاهان مورد مطالعه در این طرح در انتهای فصل رویشی از رویشگاههای طبیعی جمع آوری خواهند شد. برای انجام روش ماسراسیون گیاه خرد شده را در ظرفی که از جنس مناسب باشد ( شیشه، استیل، چینی و غیره ) داخل نموده و مقدار ذکر شده از حلال مناسب را بر روی آن می ریزیم. برای اینکه از تغییرات شیمیایی، در اثر فعل و انفعالات شیمیایی حاصل از تابش نور بر روی مواد متشکله گیاهی، جلوگیری شود عمل عصاره گیری را در مکانی که از تابش مستقیم خورشید محفوظ است، انجام و با محکم کردن درب ظرف عصاره گیری از تبخیر حلال جلوگیری می نماییم. عمل عصاره گیری را ضمن تکان دادن و یا همزدن مکرر 5 روز تمام در حرارت اتاق ادامه داده و بعد از این زمان که تعادل غلظت مواد موجود در حلال و بافت گیاهی برقرار گردیده است، عمل عصاره گیری را خاتمه داده و سپس عصاره حاصل را صاف نموده و باقیمانده گیاهی را با دستگاه پرس تحت فشار قرار میدهیم. در خاتمه عصاره ها را با هم مخلوط و جهت ته نشین شدن رسوبات و کدورت حاصل 5 روز تمام در حرارت کمتر از 15 درجه سانتی گراد نگهداری نموده و سپس با احتیاط از تبخیر شدن حلال آن را صاف و در صورت لزوم براساس میزان مواد موثره، عصاره را تنظیم می نماییم. از مزایای روش ماسراسیون این است که این روش بدون به کار بردن دستگاه ها و ابزار های پیچیده و در یک محیط کار محدود قابل انجام بوده و با به کار بردن حلال های یکنواخت می توان به کمک این روش عصاره هایی با میزان مواد موثره یکنواخت به دست آورد. از معایب این روش، زمان طولانی انجام عصاره گیری می باشد که می تواند موجب از بین رفتن مواد دارویی در باقیمانده گیاهی گردد. روش ماسراسیون را باید هنگامی به کار برد که گیاه مورد عصاره گیری دارای مقدار کم یا فاقد مواد غیر محلول سلولی باشد. .باقیمانده خشک عصاره ها به روش کروماتوگرافی ستونی ( فراکسیون های حاصله از عصاره های قطبی) و TLC ( فراکسیون های حاصله از عصاره های نیمه قطبی و غیر قطبی)شناسایی میشوند. خالص سازی و جداسازی ترکیبات موجود در فراکسیون ها با استفاده از ستون های سیلیکاژل انجام می گیرد. با روش های مختلف اسپکتروسکوپی ( UV) ساختار شیمیایی ترکیبات خالص شده تعیین می گردد. استخراج اسانس ار دستگاه کلونجر و به روش تقطیر با آب انجام خواهد گرفت. خواص بیواکتیویته عصاره ها وفراکسیونهای در صورت امکان با انواع تستهای آنتی اکسیدان و جنرال توکسیسیته بررسی خواهد شد. بدین ترتیب که برای انجام تست آنتی اکسیدان ( از نوع روبشگری رادیکالهای آزاد )از ماده 2و2-دی فنیل -1-پیکریل هیدرازیل DPPH استفاده خواهد شد و اثر غلظت های مختلف عصاره ها و فراکسیونهای مختلف بر محلول 08/0 میلی گرم بر میلی لیتر این ماده در 517 نانومتر انداره گیری خواهد شد. فراکسیونها در یکی از حلالهای متانول یا کلروفرم حل و محلول های 1 میلی گرم در میلی لیتر تهیه خواهد گردید . سپس رقت های 1-10×5 ، 1-10×2.5 ،-10×1.25 ، 2-10×6.25 ،2-10×3.13 ،2-10×1.56 میلی گرم بر میلی لیتر از این محلول ها تهیه خواهد شد. 5 میلی لیتر از محلول های رقیق شده فوق با 5 میلی لیتر از محلول DPPH مخلوط و پس از 30 دقیقه ، جذب محلول ها در طول موج 517 نانومتر اندازه گیری خواهد گردید. از واکنش مشابه بر روی کرستین به عنوان کنترل مثبت استفاده خواهد شد. ارزیابی سمیت کلی فراکسیونها به روش Brine shrimp lethality assay انجام خواهد شد.تخمهای Artemia selina در فلاسکهای دارای 300 میلی لیتر آب دریای مصنوعی و مجهز به دمنده هوا در دمای 29 تا 30 درجه سانتیگراد پس از 48 ساعت تبدیل به لارو خواهند شد. با تهیه محلول 1 میلیگرم در لیتر از از هر یک از فراکسیونها در حلال DMSO و رقیق سازی زنجیره ای، 7 غلظت مختلف به دست خواهد آمد.پس از مجاورت 24 ساعته با 10 لارو موجود در 10 میلی لیتر آب دریای مصنوعی،درصد لاروهای زنده محاسبه خواهد شد.به عنوان کنترل مثبت، از پودو فیلوتوکسین استفاده خواهد شد.