تهیه ی آنتی بادی تک زنجیره ای ضد EGFR متصل به اگزو توکسین PE-40 و ارزیابی اثر آن روی سلولهای سرطانی بیان کننده ی EGFR
Expression and Evaluation of HuscFv Antibody -PE40 Immunotoxin for Target Therapy of EGFR-Overexpressing Cancers
مجریان: صفر فرج نیا , نصرت اله ضرغامی
خلاصه روش اجرا: هدف مطالعه حاضر تهیه ایمونوتوکسین متشکل از آنتی بادی تک زنجیره ای انسانی ضد EGFR و قطعه PE40 اگزوتوکسین سدوموناس می باشد. برای این منظور ژن مربوط به ScFv انسانی شده ی ضد EGFR از طریق PCR تکثیر شده در وکتور بیانی کلون می شود . سپس ژن PE-40 از طریق PCR تکثیر و پایین دست ژن ScFv کلون می شود و در باکتری Ecoli ترانسفرم می شود و بیان پروتئین با افزودن القا کننده ، القا می شود. پروتئین نوترکیب تخلیص شده و اثر توکسیک آن بر روی سلولهای تومرال A431 که میزان بیان بالایی از EGFR را دارند بررسی می گردد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 65898 |
| عنوان فارسی طرح | تهیه ی آنتی بادی تک زنجیره ای ضد EGFR متصل به اگزو توکسین PE-40 و ارزیابی اثر آن روی سلولهای سرطانی بیان کننده ی EGFR |
| عنوان لاتین طرح | Expression and Evaluation of HuscFv Antibody -PE40 Immunotoxin for Target Therapy of EGFR-Overexpressing Cancers |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مطالعات سلولی- مولکولی و ایمونولوژیک در زمینــه تولید واکسن |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | Background: Epidermal growth factor receptor (EGFR) plays an important role in the progression and tumorigenesis of the various cancers. In this regards, anti-EGFR antibodies are valuable approved therapeutics for the EGFR over-expressing cancers. However, the occurrence of mutations in the EGFR and/or KRAS genes; a common phenomenon which is seen in many cancers, lead to the resistance to the EGFR-directed antibodies. EGFR based immunotoxins are capable of overcoming this limitation by directing the toxin moieties to the cancer cells resulting in cell death. Objectives: In the present study, a novel immunotoxin consisting of the truncated Pseudomonas exotoxin A (PE-40) and anti-EGFR huscFv was developed and evaluated for the induction of cell death in EGFR positive A431tumoral cells. Materials and Methods: PE-40 fragment of the exotoxin A was amplified by using PCR and ligated to pET22b-huscFv. The reaction was confirmed by PCR and restriction digestion. The immunotoxin was expressed in E. coli BL21 (plysS) and then was purified by Ni-NTA affinity column. Subsequently, the toxicity of the purified immunotoxin was evaluated on EGFR over-expressing epidermoid carcinoma of skin, A431 cell line. Results: PCR and restriction digestion experiments have verified the integrity of the immunotoxin construct. Purification by affinity column resulted in a highly purified recombinant immunotoxin. MTT assay revealed the growth inhibitory effect of the huscFv-PE40 immunotoxin on EGFR-over-expressing A431 cells with an IC50 value of 250 ng.mL-1. Conclusion: In conclusion, the results indicated that the immunotoxin developed in this study has a high toxicity on the EGFR-over-expressing tumor cells and could be considered as a promising candidate for the treatment of the EGFR positive |
| اهداف اختصاصی | : طراحی توالی اسید آمینه ای و نوکلئوتیدی ناحیه ی متغیر آنتی بادی ضد گیرنده ی فاکتور رشد اپیدرمی (EGFR) -کلون و بیان توالی کد کننده فیوژن پروتئین حاوی اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا و آنتی بادی تک زنجیره ضد EGFRدر E.coli و تخلیص پروتئین به دست آمده. -توانایی فیوژن پروتئین تهیه شده در القا مرگ در سلولهای تومورال بیان کننده ی EGFR. |
| چکیده انگلیسی طرح | Background: Epidermal growth factor receptor (EGFR) plays an important role in the progression and tumorigenesis of the various cancers. In this regards, anti-EGFR antibodies are valuable approved therapeutics for the EGFR over-expressing cancers. However, the occurrence of mutations in the EGFR and/or KRAS genes; a common phenomenon which is seen in many cancers, lead to the resistance to the EGFR-directed antibodies. EGFR based immunotoxins are capable of overcoming this limitation by directing the toxin moieties to the cancer cells resulting in cell death. Objectives: In the present study, a novel immunotoxin consisting of the truncated Pseudomonas exotoxin A (PE-40) and anti-EGFR huscFv was developed and evaluated for the induction of cell death in EGFR positive A431tumoral cells. Materials and Methods: PE-40 fragment of the exotoxin A was amplified by using PCR and ligated to pET22b-huscFv. The reaction was confirmed by PCR and restriction digestion. The immunotoxin was expressed in E. coli BL21 (plysS) and then was purified by Ni-NTA affinity column. Subsequently, the toxicity of the purified immunotoxin was evaluated on EGFR over-expressing epidermoid carcinoma of skin, A431 cell line. Results: PCR and restriction digestion experiments have verified the integrity of the immunotoxin construct. Purification by affinity column resulted in a highly purified recombinant immunotoxin. MTT assay revealed the growth inhibitory effect of the huscFv-PE40 immunotoxin on EGFR-over-expressing A431 cells with an IC50 value of 250 ng.mL-1. Conclusion: In conclusion, the results indicated that the immunotoxin developed in this study has a high toxicity on the EGFR-over-expressing tumor cells and could be considered as a promising candidate for the treatment of the EGFR positive |
| کلمات کلیدی | EGFR=Epidermal growth factor receptor PE-40=Truncated pseudomonas exotoxinA- |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| صفر فرج نیا | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| نصرت اله ضرغامی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| شیوا عهدی خسروشاهی | همکار اصلی |
| هادی فرج نیا | همکار اصلی |
| دیانوش فلاحتگر | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر ایمونوتوکسین متشکل از آنتی بادی تک زنجیره ای ضد EGFR متصل به اگزو توکسین PE-40 می تواند باعث مرگ سلولهای سرطانی بیان کننده EGFR شود.متن خبر آنتی بادیهای مونوکلونال ضد EGFR یکی از راهکارهای درمانی برای سرطانها مختلف از جمله سرطان کلولرکتال و سر و گردن می باشد اما وقوع موتاسیون در
K-ras باعث بی اثر شدن این روش درمانی میگردد. ایمونوتوکسینها با اثر درمانی مستقیم روی سلولهای سرطانی می تواند اثر موتاسیون در K-ras با خنثی کنند. در مطالعه حاضر آنتی بادی تک زنجیره ای ضد EGFR بصورت مولکولی به اگزوتوکسین PE-40 سدوموناس متصل گردیده و ایمونوتوکسین ضد EGFR تهیه شد. بررسی اثر این ایمونوتوکسین روی سلولهای سرطانی A431 نشان داد که این ایمونوتوکسین اثر کشندگی بالایی روی این سلولهای سرطانی بیان کننده EGFR دارد. با توجه به نتایج بدست آمده ارزیابی اثر این ایمونوتوکسین در مدل حیوانی تومور پیشنهاد میگردد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
