بررسی اثر سرکوب همزمان بیان ژن های VISTA وCTLA-4 بر مهار رشد و مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه
The effect of VISTA and CTLA-4 genes suppression on growth and migration inhibition in breast cancer cell line
مجریان: بهزاد برادران
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی ژن های VISTA و CTLA-4، بیان مولکول های VISTA و CTLA-4 در رده ی سلولی سرطان سینه مورد هدف قرار گرفته و اثرات آن بر آپوپتوز و مهاجرت سلول های سرطانی ارزیابی گردد. بدین منظور پس از کشت رده های مختلف سلولی سرطان سینه و بررسی میزان بیان ژن های VISTA و CTLA-4 در هر کدام از رده ها، رده ی سلولی مناسب انتخاب می گردد و سپس siRNA اختصاصی ژن های VISTA و CTLA-4به رده ی سلولی مورد نظر از طریق روش الکتروپوریشن منتقل می شود. سپس جهت بررسی اثر سایتوتوکسیک siRNA منتقل شده تست MTT انجام میگیرد. جهت بررسی این سرکوب همزمان ژنی بر میزان آپوپتوز سلول های سرطانی رنگ آمیزی مخصوص و سپس ارزیابی فلوسایتومتری انجام می شود. همچنین جهت بررسی اثر سرکوب همزمان ژن های VISTA و CTLA-4 بر میزان مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه از تست wound healing assay استفاده می گردد. همچنین بیان ژن های دخیل در آپوپتوز و مهاجرت سلولی به روش RT-PCR مورد بررسی قرار می گیرد. در نهایت رده سلولی سرطان سینه که با siRNA های اختصاصی ترانسفکت شده اند را با سلول های T کشت همزمان میدهیم تا اثر این سرکوب را بر فعال شدن لنفوسیت های T بررسی کنیم.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 65527 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر سرکوب همزمان بیان ژن های VISTA وCTLA-4 بر مهار رشد و مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه |
| عنوان لاتین طرح | The effect of VISTA and CTLA-4 genes suppression on growth and migration inhibition in breast cancer cell line |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | روش های رایجی که جهت درمان سرطان سینه مورد استفاده قرار می گیرند، داراری عوارضی همچون عود مجدد سرطان، متاستاز، غیر اختصاصی بودن دارو و همچنین مقاومت به دارو می باشند. در میان روش های نوینی که جهت درمان این بیماری استفاده می شود، تعدیل و تنظیم بیان ژن در سلول های سرطانی با استفاده از (siRNA) small interfering RNA از جمله روش های ژن درمانی مهم می باشد. VISTA یک پروتئین غشا گذر تیپ یک بوده که بر سطح سلول های سرطانی بیان می شود و در محیط مهاری توموری می تواند موجب تنظیم منفی سیستم ایمنی گشته و عملکرد سلول های ایمنی را کاهش دهد. بنابراین بلاک کردن این پروتئین در سلول سرطانی میتواند به حفظ عملکرد سیستم ایمنی در محیط توموری کمک کند. CTLA-4 نیز یک مولکول مهاری تنظیم کننده ی سیستم ایمنی است که در فرار کردن سلول سرطانی از سیستم ایمنی نقش دارد. لذا در این مطالعه هدف آن است که با استفاده از siRNA اختصاصی ژن های VISTA و CTLA-4 بیان این مولکول ها بر سطح سلول های سرطان سینه که از بانک سلولی انستیتو پاستور تهیه شده است را مورد هدف قرار داده و تاثیر این سرکوب همزمان بر رشد و مهاجرت و آپوپتوز سلول های سرطانی ارزیابی گردد. |
| اهداف اختصاصی |
ارزیابی میزان سایتوتوکسیسیتی siRNA انتقال یافته بر رده ی سلولی سرطان سینه به روش MTT -بررسی سرکوب با siRNA اختصاصی ژن های VISTA و CTLA-4 در القای آپوپتوز در رده ی سلولی سرطان سینه به روش فلوسایتومتری -بررسی اثر سرکوب ژن های VISTA و CTLA-4 با siRNA اختصاصی بر میزان مهار مهاجرت رده ی سلولی سرطان سینه به روش wound healing assay -بررسی اثر سرکوب ژن های VISTA و CTLA-4 با siRNA اختصاصی بر میزان تغییر بیان ژن های دخیل در آپوپتوز و مهاجرت سلولی به روش RT-PCR -بررسی اثر سرکوب همزمان ژن های VISTA و CTLA4 در فعال نمودن سلول های T |
| چکیده انگلیسی طرح | Breast carcinoma remains a complex heterogeneous disorder, being the most frequent malignant disease in women worldwide. VISTA, a novel checkpoint regulator is a type I transmembrane protein that negatively regulate the immune system. Blocking this novel immune checkpoint can enhance the efficacy of cancer treatment. CTLA-4 is an inhibitory immune checkpoint that express in immune cells and tumor cells. Among all new therapies using small interfering RNA (siRNA) for silencing genes is a promising approach. In this study we examine the VISTA and CTLA-4 genes expression on different breast cancer cell lines and suppress the VISTA and CTLA-4 genes by siRNA then analyse the effect of this suppression on growth and migration inhibition in breast cancer cell line. |
| کلمات کلیدی | Breast cancer: تومور بدخیم سرطان سینه که با ایجاد و توسعه سلول های سرطانی در بافت سینه همراه است. VISTA: V-domain Ig suppressor of T cell activation، مولکول تنظیمی سیستم ایمنی بوده که به شکل منفی سیستم ایمنی را تنظیم می کند. CTLA-4: Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4، مولکول تنظیمی سیستم ایمنی بوده که به شکل منفی سیستم ایمنی را تنظیم می کند. siRNA (RNA های کوچک تداخل گر): RNA دو رشتهای به طول تقریبی 20 نوکلئوتید که توسط آنزیم Dicer تولید می شوند. Electroporation : روشی جهت انتقال ژن که با استفاده از ایجاد میدان الکتریکی، نفوذ پذیری غشای سلول افزایش یافته و siRNA مورد نظر انتقال می یابد. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران مبتلا به سرطان سینه |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| بهزاد برادران | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| توحید کاظمی | مشاور |
| امیر علی مختارزاده | مشاور |
| نگار حسین خانی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| افشین درخشانی | همکار اصلی |
| الهام باغبانی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر سرکوب همزمان ژن های CTLA-4 وVISTA توسط siRNA اختصاصی ژن های نامبرده می تواند موجب کاهش توانایی مهاجرت، افزایش میزان آپوپتوز سلول های سرطانی سینه گردد.متن خبر سرطان سینه به عنوان شایع ترین بدخیمی در جمعیت زنان شناخته می باشد. بیان بالای ژن های ایمیون چک پوینت های VISTA و CTLA-4 توسط سلول های سرطانی سینه منجر به ایجاد محیط مهاری توسط سلول های توموری گشته و منجر به کاهش توانایی سیستم ایمنی در سرکوب تومور می گردد. هدف از این مطالعه بررسی اثر سرکوب همزمان ژن های VISTA و CTLA-4 توسط siRNA اختصاصی بوده و تاثیر این سرکوب بر رشد و مهاجرت و آپوپتوز سلول های سرطانی MCF-7 سنجیده شد. در این مطالعه رده سلولی با بیان مناسب از VISTA و CTLA-4 انتخاب و ارزیابی اثر siRNA اختصاصی بر رده ی سلولی MCF-7 انجام گرفت. نتایج حاصل از آزمایشات نشان داد که سرکوب همزمان ژن های VISTA و CTLA-4 می تواند منجر به افزایش میزان آپوپتوز، کاهش رشد و توانایی مهاجرت سلول های سرطانی سینه گردد. بنابراین سرکوب همزمان ژن های VISTA و CTLA-4 می تواند رویکرد درمانی موثر در درمان سرطان سینه باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
