بررسی نقش واکنش غیراشباع سازی اسیدهای چرب در آسیلاسیون سلولی و پیام رسانی وابسته به Wnt
Investigating the role of fatty acid unsaturation in cellular acylation and Wnt-dependent signaling
مجریان: مسعود دارابی امین
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه که بصورت in vitro است و در آن سلولهای بنیادی جنینی انسانی (HESCs) رده ی Royan H5 که از پژوهشگاه رویان تهیه شده اند روی سلولهای فیبروبلاست جنینی موش (MEF) به عنوان یک لایه مغذی کشت داده می شوند و بعد از 24 ساعت از کشت سلولها روی پلیت، سلولها با مهارکننده های اختصاصی Porcn و SCD1، تیمار می شوند. بعد از استخراج RNA و سنتز cDNA طبق پروتکل مربوطه بیان ژن های شاخص بنیادینگی (OCT4,SOX2) و بیان ژن های هدف مسیر سیگنالینگ Wnt شامل c-Myc,Axin-2 با استفاده از روش qRT-PCR سنجیده می شوند. از سوپ محیط کشت سلولی برای آزمایش های recovery از اثر مهار کننده استفاده خواهد شد. میزان زنده مانی سلولی با روش MTT و تکثیر سلولهای بنیادی جنینی با روش Brdu و با استفاده از کیت الایزا سنجش می شود. برای سنجش میزان تمایز سلولهای بنیادی جنینی، بیان نشانگرهای سطحی لایه های اندودرمی، مزودرمی و اکتودرمی (CXCR4،KDR،SSEA-3) با استفاده از فلوسایتومتری تعیین می شوند. برای آنالیز نتایج بدست آمده از نرم افزار SPSS و برای بررسی تفاوت بین میانگین داده ها در دو گروه مستقل از آزمون آماری independent sample t- test استفاده خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 65430 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی نقش واکنش غیراشباع سازی اسیدهای چرب در آسیلاسیون سلولی و پیام رسانی وابسته به Wnt |
| عنوان لاتین طرح | Investigating the role of fatty acid unsaturation in cellular acylation and Wnt-dependent signaling |
| نوع طرح | گرنت - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | The dependence of acylation on the unsaturation of fatty acids in stem cells has not been studied. The results of this study help to understand the lipid-mediated mechanisms in self-renewal and differentiation of stem cells for further research in the field of cell therapy and regenerative medicine. |
| اهداف اختصاصی | To determine the effect of combined Porcn and SCD1 inhibitor treatment on human embryonic stem cells viability and proliferation -To determine the effect of combined Porcn and SCD1 inhibitor treatment on human embryonic stem cells pluripotency and differentiation markers -To determine the effect of combined Porcn and SCD1 inhibitor treatment on Wnt signaling target genes of human embryonic stem cells |
| چکیده انگلیسی طرح | In this in vitro study, Royan H5-class human embryonic stem cells (HESCs) from Royan Research Institute will be cultured on mice embryonic fibroblast cells (MEF) as a nutrient layer, and after 24 hours of cell culture on the plate, the cells will be treated with specific Porcn and SCD1 inhibitors. After RNA extraction and cDNA synthesis, according to the relevant protocol, expression of stemness marker genes (OCT4, SOX2) and expression of Wnt signaling pathway target genes, c-Myc and Axin-2, will be measured using qRT-PCR method. Cellular conditioned medium will be used as a in recovery tests. Cell viability will be measured by MTT method and embryonic stem cell proliferation will be measured by Brdu method using ELISA kit. To measure the differentiation of embryonic stem cells, the expression of surface markers of endodermal, mesodermal and ectodermal layers (CXCR4, KDR, SSEA-3) will be determined using flow cytometry. An independent sample t-test will be used to analyze the results obtained from SPSS software and to investigate the difference between the mean data in the two independent groups. |
| کلمات کلیدی | Self-renewal: Stem cell's ability to produce more stem cells in an in vitro environment and the ability to perform a number of cell division cycles while maintaining an undifferentiated state. Pluripotency: The innate ability of a stem cell to differentiate into one or more specialized cell types. Embryonic stem cells (ESCs): These cells are pluripotent stem cells with unique characteristics of pluripotency and self-renewal. They can be infinitely divided in in vitro conditions, while retaining their capacity to produce all types of cells of an adult organism. Acylation: Acylation is defined as the binding of covalent lipids to proteins and is one of the post-translational changes and is essential for the activity, secretion and transport of proteins involved in cell development. There are several known type of acylation in eukaryotic cells, which includes n-myristolation, s and n-palmitoylation, and o-acylation with unsaturated fatty acids. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مسعود دارابی امین | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| اشکان کلانتری چروده | دانشجوی مالک پایان نامه |
| امیر مهدی زاده حقیقی | همکار اصلی |
| حجت اله نوزاد چروده | همکار اصلی |
| رضا رهبرقاضی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر واکنش متابولیک غیراشباع سازی اسیدهای چرب در سلول های بنیادی پرتوان القایی انسانی منجر به تغییر آسیلاسیون سلولی و پیام رسانی سلولی می شودمتن خبر سلول های بنیادی قابلیت تبدیل به سلول های عملکردی بالغ را دارند به همین دلیل کاربرد وسیعی در پزشکی بازساختی و کشف دارو خواهند داشت. اسیدهای چرب علاوه براینکه منابع مهمی از انرژی سلولی محسوب می شوند، نقش های ساختاری مهمی در بیومولکولها ایفا می کنند. قابل توجه است که اتصال اسیدهای چرب تک غیراشباع به پروتئین ها از طریق ایجاد شکل فعال پروتئین ها در تنظیم پیام رسانی سلولی نقش دارد. در این مطالعه، میزان اتصال شکل غیراشباع اسیدهای چرب با یک روش مبتنی بر تصویربرداری ارزیابی شد. بر اساس نتایج، با اینکه حالت غیراشباع اسیدهای چرب سهم مهمی از اسیدهای چرب متصل به پروتئین ها را تشکیل نمی دهند، اختلال در تولید آنها منجر به تغییر در پیام رسانی سلولی شد. علاوه بر این، اتصال اسیدهای چرب غیراشباع وابسته به یک آنزیم بود که مهار آن منجر به کاهش زنده مانی سلولی و تکثیر سلولی و مسیر پیام رسانی مرتبط با آنها شد. مهار این آنزیم همچنین باعث هدایت سلول های بنیادی به سمت تمایز به سلول های پیش ساز پوستی و عصبی شد. بنابراین، تغییر در دسترسی سلول ها به اسیدهای چرب تک غیراشباع میتواند قابلیت تکثیر و تمایز سلول های بنیادی را تحت تاثیر قرار دهد. از این استراتژی می توان در پزشکی بازساخت استفاده نمود. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
