بررسی اثر اگزوزوم های غنی شده با اوبتیکولیک اسید بر روی فیبروز کبدی در شرایط برون تنی و درون تنی
A Functional in vitro and in vivo Study of Enriched MSc-Drived Exosome with Obeticholic acid in Suppression of Liver Fibrogenesis
مجریان: عفت علیزاده , کاوه بقایی
خلاصه روش اجرا: ابتدا اثر اگزوزوم های مستخرج از سلولهای بنیادی وارتون ژلی/بافت چربی و همچنین اثر توام آن با داروی اوبتیکولیک اسید بر روی تکثیر سلولهای ستاره ای کبد در محیط in vitro مورد بررسی قرار می گیرد. سپس سلولهای ستاره ای کبد با اگزوزوم حاوی دارو و اگزوزوم به تنهایی تحت تیمار قرار می گیرد و فعالیت انها به وسیله بررسی میزان بیان α-SMA مورد ارزیابی قرار می گیرد. ایجاد مدل فیبروز کبدی در رت/موش به روش انسداد مجاری صفراوی Bile duct ligation یا روش تزریق CCL4 ایجاد می شود. تیمار مدل ها از طریق تزریق وریدی با استفاده از اگزوزم به تنهایی، اگزوزوم لود شده با PBS ، اگزوزوم حامل دارو و دارو به تنهایی انجام می گیرد. گروه کنترل شامل رت های سالم و بدون فیبروز کبدی، گروه sham شامل حیوان های فیبروز شده بدون تزریق اگزوزوم و حیوان های فیبروز شده و تزریق اگزوزوم حاوی PBS می باشد. گروه تیمار 1 شامل رت های فیبروز و تیمار شده به وسیله اگزوزوم و گروه تیمار 2 شامل رت یا موش های فیبروز و تیمار شده به وسیله اگزوزوم حامل دارو و گروه تیمار شده با دارو است. بعد از اتمام زمان تیمار مطالعات سرولوژیکی، ملکولی، پروتئینی و هیستوپاتولوژیکی انجام می گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 65016 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر اگزوزوم های غنی شده با اوبتیکولیک اسید بر روی فیبروز کبدی در شرایط برون تنی و درون تنی |
| عنوان لاتین طرح | A Functional in vitro and in vivo Study of Enriched MSc-Drived Exosome with Obeticholic acid in Suppression of Liver Fibrogenesis |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | نانوفیبرها، نانوذرات و اسکافولدها (در طب بازساختی، مهندسی بافت و دارورسانی) |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | بیماری فیبروز کبدی در صورت پیشرفت می تواند زمینه ساز ابتلا به سیروز کبدی و در نهایت سرطان کبد شود و تاکنون روش درمانی تایید شده ای برای این بیماری گزارش نشده است. بنابراین ، یک نیاز بالینی ضروری برای ایجاد یک راهکار درمانی مؤثر جهت کاهش روند پیشرفت بیماری و درمان آن اجتناب ناپذیر است. گیرنده X فارنزوئید یا (FXR) Farnesoid X receptor که یک فاکتور رونویسی واکنش دهنده به اسیدهای صفراوی است و یک تنظیم کننده مهم متابولیک و محافظ کبد است و نقش اساسی در کنترل هموستاز اسیدهای صفراوی دارد و اخیراً مشخص شده که با پیشرفت فیبروز کبدی در ارتباط است. به دلیل نقش مهم بیولوژیکی ، FXR به عنوان یک هدف دارویی برای اختلالات شدید کبدی و بیماریهای متابولیک مورد توجه قرار گرفته است و به عنوان یک هدف درمانی بالقوه مورد پذیرش است. در رده اگونیست های FXR، اسید اوبتیکولیک (OCA) Obeticholic acid تاثیرات بالقوه ای در فعال سازی FXR در بیماری های استئاتوهپاتیت غیر الکلی ، کلانژیت صفراوی اولیه و دیابت نشان داده است. اخیراً هم اوبتیکولیک اسید توسط سازمان غذا و داروی فدرال آمریکا برای درمان کلانژیت صفراوی اولیه تأیید شده است و در حال حاضرهم در بیماری های استئاتوهپاتیت غیر الکلی و کبد چرب غیر الکلی در مراحل کارآزمایی بالینی است. تاکنون از بسیاری از سیستم های نانوذرات جهت انتقال مواد دارویی برای فیبروز کبدی استفاده شده ولی تاکنون تحقیقی مبنی بر استفاده از اگزوزوم به عنوان نانوحامل های طبیعی جهت رسانش دارو به بافت مذکور انجام نشده است. لذا توسعه استراتژی های مطلوب جهت رسانش دارو به بافت هدف توام با کمترین میزان پخش در سایت های غیر هدف لازم و ضروری به نظر می رسد. به همین منظور در مطالعه حاضر بر آن شدیم که ضمن تمرکز بر راندمان انتقال، داروی اوبتیکولیک اسید را با استفاده از اگزوزوم با دوز کمتر توام با کارآیی بالاتر و بالتبع اثرات جانبی کمتر به بافت هدف برسانیم. |
| اهداف اختصاصی | جداسازی سلولهای مزانشیمی و تایید آن -جداسازی اگزوزوم از سلول و تایید آن و نشاندار کردن آن -انکپسوله کردن دارو در اگزوزوم -بررسی میزان تکثیر سلول ستاره ای کبد انسانی/موشی (اختیاری) بعد از تزریق اگزوزوم حامل اوبتیکولیک اسید -ارزیابی میزان بیان پروتئین α-SMA در سلولهای ستاره ای کبد موشی/انسانی -آماده سازی مدل فیبروز کبدی و تایید آن -بررسی هیستوپاتولوژیکی بافت کبد بعد از تیمار (گروه کنترل: رت/موش های سالم و بدون فیبروز گروه شم: حیوان های فیبروز شده بدون تیمار و نمونه های فیبروزه تیمار شده با اگزوزوم حاوی PBS گروه های تیمار1 : نمونه های فیبروز شده و تیمار شده با اگزوزوم به تنهایی وگروه تیمار 2: نمونه های فیبروز شده و تیمار شده با اگزوزوم حامل اوبتیکولیک اسید ) بررسی های ملکولی ژن های فیبروتیک بعد از تیمارحیوان ارزیابی سرولوژیکی آنزیم های AST، ALT و ALP سنجش وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی α-SMA |
| چکیده انگلیسی طرح | Liver fibrosis can progress to liver cirrhosis and eventually liver cancer if it progresses, and there has been no approved treatment for this disease. Therefore, an urgent clinical need to develop an effective therapeutic strategy to reduce the progression and treatment of the disease is inevitable. Farnesoid X receptor (FXR) or Farnesoid X receptor, which is a transcription factor responsive to bile acids, an important metabolic regulator and liver protector, plays an essential role in controlling bile acid homeostasis and has recently been shown to be associated with the progression of hepatic fibrosis. Because of its important biological role, FXR has been considered as a therapeutic target for severe liver disorders and metabolic diseases and has been accepted as a potential therapeutic target. In the FXR agonist class, Obeticholic acid (OCA) has been shown to have potential effects on FXR activation in non-alcoholic steatohepatitis, primary biliary cholangitis and diabetes. Recently, obeticholic acid has been approved by the US Food and Drug Administration for the treatment of primary biliary cholangitis and is currently in clinical trials for non-alcoholic steatohepatitis and non-alcoholic fatty liver disease. Many nanoparticle systems have been used to transport drugs for hepatic fibrosis so far, but no research has been conducted on the use of exosomes as natural nanocarriers for drug delivery to the tissue. Therefore, it seems necessary to develop optimal strategies to deliver the drug to the target tissue with the least distribution in non-target sites. Therefore, in the present study, we aimed to focus on the efficiency of transferring to the target tissue by using a lower dose exosome with higher efficacy and consequently less side effects. |
| کلمات کلیدی | 1)(NAFLD) Non-alcoholic fatty liver disease: کبد چرب غیر الکلی: نوعی از کبد چرب است که در نتیجه تجمع چربی به دلیلی غیر از مصرف زیاد الکل در کبد بروز میکند 2) Liver fibrosis: فیبروز کبد زمانی رخ می دهد که بافت سالم کبد دچار اسکار یا جوشگاه شود و نتواند به درستی کار کند فیبروز اولین مرحله از بروز اسکار درکبد است. 3)Hepatocyte: به سلولهای اصلی بافت کبد گفته میشوند. این سلولها حدود هشتاد درصد بافت کبد را تشکیل میدهند. کارهای اصلی هپاتوسیتها عبارت است از: ساخت پروتئینهایی مانند آلبومین، پروترومبین، فیبرینوژن و هپارین؛ ذخیره پروتئین؛ متابولیسم کربوهیدراتها، ساخت کلسترول، اسیدهای صفراوی و لیپو پروتئینها؛ سمیت زدایی، تغییر و دفع سموم خارجی و داخلی 5) Hepatic stellate cell: سلولهای ستاره ای کبد: یکی از سلولهای غیر پارانشیمی کبد که به عنوان سلولهای perisinusoidal یا سلولهای Ito هم شناخته می شود که در فضای Disse (فضای کوچکی بین سینوزوئید و هپاتوسیت ) قرار گرفته است و نقش اصلی را در فیبروز کبدی ایفا می کند که باعث ایجاد اسکار بافتی در واکنش به آسیب کبدی می شود. 6)Exsosome: میکرووزیکول های مشتق از سلول در زمینه ارتباطات سلول-سلول شناخته می شوند 7) :Extracellular Matrixماده زمینه ای خارج سلولی: شبکهای از گلیکوپروتئینها و یاختهها است که پیرامون یاختهها را در بر میگیرد. این ماده ژله مانند از گلیکوزآمینوگلیکانها، گلیکوپروتئینها، مایع بافتی و گاهی فیبروبلاستهای استروما ساخته شدهاست 8) (HCC) hepatocellular carcinoma: کارسینوم هپاتوسلولار از رایجترین شکل سرطان کبد اولیه است؛ که در سلولهای کبدی شروع میشود. 9)kupffer cell : سلولهای کوپفر که به نامهای ماکروفاژهای ستاره ای و سلولهای Kupffer-Browicz نیز شناخته میشوند، درشتخوارهای خاصی هستند که در کبد قرار گرفتهاند و دیوارههای سینوس کبدی را میپوشانند. آنها بخشی از دستگاه فاگوسیت تک هستهای را تشکیل میدهند. 10)(NASH) Nonalcoholic steatohepatitis : نوعی از کبد چرب است که در نتیجه تجمع چربی به دلیلی غیر از مصرف زیاد الکل در کبد بروز میکند. 11) (PDGF) Platelet-derived growth factor : فاکتور رشد مشتق از پلاکت که یکی از فاکتورهای رشد با ساختاری پروتئینی است. این پروتئینها در رشد و متابولیسم سلولهای زیادی دخیل هستند و نوعی سایتوکین هستند. 12)(PBC) Primary biliary cholangitis : کلانژیت صفراوی اولیه که قبلاً به نام سیروز اولیه نامیده می شد یک بیماری مزمن است که در آن مجرای صفرا در کبد به کندی از بین میرود. سیروز کلانژیت صفراوی اولیه یک بیماری خود ایمنی است، به این معنی که سیستم ایمنی بدن به اشتباه به سلول های سالم و بافت خودی حمله می کند. وقتی که مجاری صفراوی آسیب ببیند، صفرا می تواند به کبد برگردد و گاهی به زخم برگشت ناپذیر بافت کبد (سیروز) منتهی شود. 13) (FXR) farnesoid X receptor: گیرنده فارنزوئید X یا FXR، یک گیرنده هورمونی هسته ای است که با سنتز اسیدهای صفراوی، انتقال و متابولیسم کلسترول برهمکنش می کند |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| عفت علیزاده | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| عباس ابراهیمی کلان | مشاور |
| آرزو عزیزسلطانی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| کاوه بقایی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر اگزوزومهای مشتق شده ازسلولهای بنیادی بند ناف و غنیشده با اوبتیکولیک اسید باعث کاهش فیبروز کبدی در شرایط برونتنی و درونتنی شد.متن خبر فیبروز کبدی یک مشکل بهداشتی جهانی است که به دلیل التهاب و ایجاد بیومارکرهای فیبروتیک منجر به نارسایی کبد میشود. این وضعیت میتواند به سیروز و کارسینوم سلولی کبدی منجر شود که از علل اصلی مرگ و میر در جوامع بشری است. در مطالعات قبلی، آگونیستهای گیرنده فارنزوئید ایکس رسپتور مانند اوبتیکولیک اسید نشان دادهاند که میتوانند کبد را در برابر آسیبهای کبدی محافظت کنند. اما تجویز این دارو به تنهایی میتواند عوارض جانبی به همراه داشته باشد. به همین دلیل، استفاده از حاملهای زیستی مانند اگزوزومها به عنوان روشی برای کاهش این عوارض جانبی پیشنهاد شده است. در این تحقیق، اثرات اگزوزومهای غنیشده با آنالوگ زیستی بر روی سلولهای ستارهای کبد و مدل موشی فیبروز کبدی مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که اگزوزوم های غنی شده با اوبتیکولیک اسید به طور معناداری فعالسازی سلولهای ستاره ای کبد را کاهش میدهد. همچنین، درمان باعث بهبود قابل توجهی در آنزیمهای سرمی و کاهش فیبروز کبدی در مدل موشی القا شده فیبروز کبدی ایجاد کرد.نتایج این مطالعه نشان میدهد که دارورسانی بهوسیله اگزوزوم و همافزایی آن با اوبتیکولیک اسید میتواند به عنوان یک رویکرد امیدوارکننده در درمان فیبروز کبدی باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
