مهار mTOR در سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد به منظور افزایش اثرات سایتوتوکسیک سیکلوفسفامید
Blockade of mTOR in acute lymphoblastic leukemia cells to increase the cytotoxic effects of cyclophosphamide
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق , قاسم قلم فرسا
خلاصه روش اجرا: خلاصه روش اجرا: مطالعه بر روی رده های سلولی jurkat و NALM6 و همچنین نمونه های خون محیطی ۱۰ بیمار باALL تایید شده و 10 نفر فرد نرمال بعنوان کنترل انجام خواهد شد. همچنین اطلاعات بیشتری از برخی ویژگی های بیماران مثل ناهنجاریهای ژنتیکی راجعه ، رویکردهای درمانی قبل از عود و بازگشت بیماری مربوط به بیمارانand remission relapse ، جنسیت بیماران و...نیز برای ارزیابی های تکمیلی جمع آوری خواهد شد . نمونههای خون محیطی همچنین از اهدا کنندگان سالم به صورت موازی و منطبق به عنوان گروه کنترل دریافت خواهد شد. در این مطالعه داروی سیکلوفسمامید ، siRNA ، و نانو ذرات حامل به صورت Single agent و Combinational استفاده خواهد شد. این مطالعه دو فاز دارد: ۱.تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA : ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2% آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. ۲. مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده : از سل لاین های jurkat و NALM6 و سلولهای لوسمیک خون محیطی بیماران مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک حاد در این مطالعه استفاده خواهد شد که این سلولها در محیط RPMI1640 حاوی fetal bovine serum 10% و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر درمان های ترکیبی و تکی بر روی بیان ژن mTOR در کشت سلول ها توسط تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود .برای ارزیابی تکثیر سلولی، سلولها تحت داروهای مورد آزمایش تیمار می شوند و سپس پرولیفراسیون سلول ها توسط MTT تعیین می شود، اثرات افزایشی سینرژیستی و آنتاگونیستی دارو ها نسبت به هم توسط COMPUSYN SOFTWARE تعیین می شود .تیمار های دارویی در ۳ تکرار انجام می شود تا آزمایش به صورت مستقل و غیر وابسته انجام شده باشد. آنالیز فلوسیتومتری اپوپتوز با استفاده از PROPIDUM IODIDE (PI) /ANNEXIN V بر اساس دستور العمل سازنده انجام خواهد شد و درصد سلولهای ANNEXIN V /PI POSITIVE با ارزیابی حداقل ۱۰۰۰۰ سلول تعیین خواهد شد ،میانگین درصد سلولهای ANNEXIN V /PI POSITIVE و خطای استاندارد حداقل در دو آزمایش مستقل محاسبه خواهد شد. آنالیز چرخه سلولی با استفاده از رنگ آمیزی PI مخلوط (PI STAINING MIX ) انجام خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 64951 |
| عنوان فارسی طرح | مهار mTOR در سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد به منظور افزایش اثرات سایتوتوکسیک سیکلوفسفامید |
| عنوان لاتین طرح | Blockade of mTOR in acute lymphoblastic leukemia cells to increase the cytotoxic effects of cyclophosphamide |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | نوآوری و ضرورت اجرای طرح: سال ها است که محققان برای کشف راه های پیشگیری ، تشخیص عوامل بیماریزایی و درمان لوسمی لنفوبلاستیک حاد(ALL) در حال تحقیق وپژوهش هستند. در دهه های اخیر علی رغم پیشرفت بسیار وسیع در زمینه تکنولوژی و دانش تشخیص و درمان ALL زیاد موثر نبوده و میزان مرگ ومیر افراد مبتلا به ALL کاهش نیافته است به همین دلیل نیاز بالینی برای تشخیص اهداف درمانی جدید برای یافتن درمانهای با کارایی بالا و یا بهبود کارائی درمان های سنتی حاضر در درمان و افزایش نرخ بقا در بیماران ALL احساس میشود در سالهای اخیر، با به کارگیری داروهای ضد سرطان مؤثرتر، طول عمر بیماران مبتلا به ALL افزایش پیدا کردهاست. این داروها موجب فروکش کردن نشانههای بیماری میگردند به طوریکه نشانهها در جریان درمان بیماری بدتر نمیشود و حتی بیماران تا اندازهای درمان میشوند. اما این روش های درمانی در تعداد زیادی از بیماران نتیجه مورد قبولی نداشته اند و محدودیت هایی از جمله هزینه ی بالا برای بیمار یا سیستم درمانی ، عوارض جانبی بسیار شدید و عدم کارایی در درمان انواع پیشرفته تر ALL را دارند. موثر نبودن این روش های درمانی محققان را بر آن داشت که به دنبال روش های درمانی موثر و بکارامدتر باشند . از طرفی تحقیقات متعددی موثر بودن درمان های ترکیبی جدید در همراهی با داروهای شیمی درمانی همچون سیکلوفسمامید را نشان می دهد. با وجود شواهد و دیتا در مورد اثر بخشی چنین رویکردهای درمانی هنوز مطالعات کمی در خصوص بررسی مکانیسم های اثر بخشی و کارائی آنها درALL انجام شده است. به این ترتیب این مطالعه با نشان دادن مسیر مکانیسم عمل پیشنهادی , بر روی ارائه روشهای درمانی جدید بصورت Single target و یا با نشان دادن پیامدهای درمان های ترکیبی, بر روی پیشنهاد دادن اهداف با اثرات همیاری بصورت combination تمرکز دارد |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی ترکیبات دارویی تهیه شده |
| چکیده انگلیسی طرح | In recent years, the use of more effective anticancer drugs has increased the lifespan of ALL patients. These drugs relieve the symptoms of the disease so that the symptoms do not get worse during treatment and even patients are treated to some extent. However, these treatments have not been widely accepted in many patients and have limitations such as high cost for the patient or system, severe side effects and inefficiencies in the treatment of more advanced ALL. The ineffectiveness of these therapies led the researchers to seek more effective and effective therapies. On the other hand, numerous studies have shown the efficacy of new combination therapies in combination with chemotherapy drugs such as cyclophosphamide. Despite the evidence and data on the efficacy of such therapeutic approaches, few studies have been conducted to investigate the mechanisms of their efficacy and efficacy in ALL. |
| کلمات کلیدی | : siRNA RNA مداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق گردیده و در گیاهان با اصطلاح PTGS عنوان می شود .در تکنولوژی RNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجود می آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. کیتوزان : کیتوزان یک آمینو پلی ساکارید خطی و ترکیبی از پیوند های (۴→۱ β) واحدهای D-گلوکزآمین وN-استیل -D-گلوکزآمین است. کیتوزان توسط داستیلاسیون کیتین ( پلی ساکارید طبیعی و فراوان موجود در اسکلت خارجی سخت پوستانی همچون خرچنگ و میگو)، تهیه می شود. این پلی ساکارید کاتیونی به دلیل دسترس پذیری فراوان، چسبندگی بی نظیر، خواص دارویی مناسب و دیگرخواص سودمند بیولوژیکی مثل زیست سازگاری، زیست تخریب پذیری، عدم سمیت و تحریک کم سیستم ایمنی، در موارد بیوپزشکی و دارویی مورد توجه گسترده قرارگرفته است. نانوذره (Nanoparticle) : ذراتی هستند که ابعاد آنها در حدود ۱ تا ۱۰۰ نانومتر است. لیپوزمها، درخت سانها، نانو ذرات پلیمری، نانو ذرات پوشش داده شده با پلیمرها، نانو ذرات کیتوزان و لستین و نانو ذرات دارویی نمونههایی از نانو ذراتی میباشند که برای دارو رسانی استفاده شده اند. mTOR : عضو خانواده کیناز مربوط به 3-کیناز فسفاتیدیلینوزیتول از پروتئین کیناز است. mTOR با پروتئین های دیگر پیوند می زند و به عنوان یک جزء اصلی دو مجتمع پروتئین مجزا ، mTORC1 و mTORC2 ، که فرآیندهای مختلف سلولی را تنظیم می کنند سیکلوفسفامید: سیکلوفسفامید با آلکیله کردن DNA مانند سایر عوامل آلکیلهکننده یک گروه آلکیل (CnH2n+1) را به مولکول DNA پیوند میدهد و با این روش مانع همانندسازی DNA میشود. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیمارانALL |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| وحید کارپیشه | همکار اصلی |
| قاسم قلم فرسا | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| سیما شاه محمدی فرید | مشاور |
| امیر معلمی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر مهار بیان mTOR موجب افزایش حساسیت سلول های لوسمیک نسبت به سیکلوفسفامید می گردد.متن خبر روش های درمانی موجود در تعداد زیادی از بیماران لوسمی لنفوسیتی حاد (ALL) نتیجه مورد قبولی نداشته اند و محدودیت هایی از جمله هزینه ی بالا برای بیمار یا سیستم درمانی ، عوارض جانبی بسیار شدید و عدم کارایی در درمان انواع پیشرفته تر ALL را دارند. به این ترتیب این مطالعه بر روی ارائه روشهای درمانی جدید بصورت Single target و یا با نشان دادن پیامدهای درمان های ترکیبی, بر روی پیشنهاد دادن اهداف با اثرات همیاری بصورت combination تمرکز دارد. این مطالعه بر روی رده های سلولی jurkat و NALM6 و همچنین نمونه های خون محیطی ۱۰ بیمار باALL تایید شده و 10 نفر فرد نرمال بعنوان کنترل انجام شد. در این مطالعه داروی سیکلوفسمامید ، siRNA ، و نانو ذرات حامل به صورت Single agent و Combinational استفاده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که مهار بیان mTORبصورت معناداری منجر به افزایش حساسیت سلول های سرطانی نسبت به سیکلوفسفامید گردید. افزایش آپوپتوز در این سلول ها با افزایش بیان Bax و کاهش بیان Bcl-2 نیز همراه بود. این نتایج نشان داد که تحویل همزمان siRNA ضد فاکتور mTOR و داروی سیکلوفسفامید به سلول های لوسمیک می تواند روش مفیدی برای درمان ALL باشد که بایستی مطالعات تکمیلی بر روی آن انجام گردد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
