بررسی سرکوب بیان ژن BHRF1 به منظور افزایش اثرات آپوپتوتیک داروی doxorubicin در لوسمی لنفوبلاستیک مزمن.
Downregulation of BHRF1 in chronic lymphocytic leukemia cells in order to enhance apoptotic effects of doxorubicin
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق , قاسم قلم فرسا
خلاصه روش اجرا: مطالعه بر روی نمونه های خون محیطی ۱۰ بیمار مبتلا بهCLL تایید شده انجام خواهد شد. هنگام جمع آوری خون محیطی از بیماران برخی از ویژگی ها از جمله ناهنجاری های ژنتیکی، رویکردهای درمانی قبل از عود و بازگشت بیماری و جنسیت بیماران نیز مورد ارزیابی قرار خواهد گرفت. همچنین نمونههای خون محیطی از اهدا کنندگان سالم به صورت موازی و منطبق به عنوان گروه کنترل دریافت خواهد شد. در این مطالعه داروی Doxorubicin (DOX)، siRNA ، و نانو ذرات حامل به صورت Single agent و Combinational استفاده خواهد شد. این مطالعه دو فاز دارد: ۱.تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA : ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2% آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. ۲. مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده : از سلولهای لوسمیک خون محیطی بیماران مبتلا به لوسمی لنفوبلاستیک مزمن در این مطالعه استفاده خواهد شد که این سلولها در محیط RPMI1640 حاوی fetal bovine serum 10% و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA و داروی Doxorubicin را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر درمان های ترکیبی و تکی بر روی بیان ژن BHRF1 در کشت سلول ها توسط تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود.تاثیردارو و نانوذرات حاویsiRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. همچنین، تاثیر درمان ترکیبی بر روی جلوگیری از بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهارکننده آپوپتوز توسط تکنیک Real-time PCR بررسی می گردد. آنالیز فلوسیتومتری اپوپتوز با استفاده از Propidum Iodide (PI) / Annexin V بر اساس دستور العمل سازنده انجام خواهد شد و درصد سلولهای AnnexinV/PI Positive با ارزیابی حداقل ۱۰۰۰۰ سلول تعیین خواهد شد ،میانگین درصد سلولهای Annexin V /PI Positive و خطای استاندارد حداقل در دو آزمایش مستقل محاسبه خواهد شد
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 64940 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی سرکوب بیان ژن BHRF1 به منظور افزایش اثرات آپوپتوتیک داروی doxorubicin در لوسمی لنفوبلاستیک مزمن. |
| عنوان لاتین طرح | Downregulation of BHRF1 in chronic lymphocytic leukemia cells in order to enhance apoptotic effects of doxorubicin |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | یکی از اجزای کلیدی در پاتوفیزیولوژی Chronic lymphocytic leukemia (CLL) که نوعی بدخیمی سلولهای + B-CD5 میباشد، مسیر داخلی(میتوکندریایی) آپوپتوز است. سلولهای CLL سطح بالایی از پروتئین ضد آپوپتوزی BCL2را بیان میکنند و برای بقای خود از لحاظ عملکردی به BCL-2 وابسته هستند مطالعات نشان داده است که BHFR1 که توسط ویروس EBV بیان می شود همولوگ پروتئین آنتی آپوپتوتیک انسانی می باشد و اتصال آن به پروتئین های پرو آپوپتوتیک باعث محافظت لنفوسیت ها از مرگ می شود. درمانهای موجود شامل شیمی درمانی و داروهایی که سـیگنالینگ سـلول Bرا مورد هدف قرار میدهند است اما این روش های درمانی در تعداد زیادی از بیماران نتیجه مورد قبولی نداشته اند. مطالعات قبلی نشان داده است که ترکیب درمان های جدید با داروهای شیمی درمانی رایج که مبتنی بر آسیب به DNA هستند می تواند دوزهای درمانی را کاهش داده و به تبع آن سمیت ناشی از اینگونه داروها رو کاهش دهد.در این مطالعه ما به کمک نانوذرات و RNAهای مداخله گر به دنبال معرفی روشی هدفمند هستیم که بیان ژن BHFR1 را سرکوب کرده و از این طریق اثرات آنتی آپوپتوتیک داروی Doxorubicin را افزایش دهیم و با دوز کم ، بیشترین تاثیر و کمترین عارضه را داشته باشیم. |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی ترکیبات دارویی تهیه شده |
| چکیده انگلیسی طرح | Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a prevalent malignancy among elderly people in western countries. Specific genomic alteration can impair apoptosis of clonal B-cells and initiate Leukemic transformation. CLL is shown by the clonal proliferation and accumulation of mature, typically CD5-positive B-cells within the blood, bone marrow, lymph nodes, and spleen. Immunophenotyping of circulating B-lymphocytes, blood counts, and blood smears are typical ways established for diagnosis. Chemoimmunotherapy, chemotherapy, inhibitors of apoptosis, such as BCL2 are available approaches for CLL treatment. Proteins in the B cell lymphoma 2 (Bcl2) family are leading regulators of the apoptotic process. It has been shown that viruses have developed homologs of Bcl-2 family members. Epstein–Barr virus (EBV) encodes the Bcl-2 associated protein, BHRF1, a protein that makes a great contribution to the prevention of apoptosis during initial stages of virus infection. Investigators have shown that BHRF1 can preserve epithelial cells from apoptosis induced by tumor necrosis factor-alpha, anti-Fas, activated monocytes, and serum deprivation. BHRF1 has an important role in the protection of lymphocytes from death by binding Bim. BHFR1 expression is also correlated with resistance to a variety of genotoxic drugs. Doxorubicin (Adriamycin) is an important drug for fighting against cancer, and as a single agent or in combination with other antitumor drugs is used for the treatment of breast cancer, Hodgkin’s and non-Hodgkin’s lymphomas. Despite successful results in cancer treatment, several studies suggested that DOX-induced apoptosis makes a great contribution to its cardiotoxicity. In this study, we hypothesize that the downregulation of BHRF1 using siRNA loaded nanoparticle in chronic lymphocytic leukemia cells will enhance the apoptotic effects of doxorubicin. This can reduce toxic side effects of DOX without affecting its antitumor action. |
| کلمات کلیدی | siRNA RNA مداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق گردیده و در گیاهان با اصطلاح PTGS عنوان می شود .در تکنولوژی RNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجود می آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. کیتوزان : کیتوزان یک آمینو پلی ساکارید خطی و ترکیبی از پیوند های (۴→۱ β) واحدهای D-گلوکزآمین وN-استیل -D-گلوکزآمین است. کیتوزان توسط داستیلاسیون کیتین ( پلی ساکارید طبیعی و فراوان موجود در اسکلت خارجی سخت پوستانی همچون خرچنگ و میگو)، تهیه می شود. این پلی ساکارید کاتیونی به دلیل دسترس پذیری فراوان، چسبندگی بی نظیر، خواص دارویی مناسب و دیگرخواص سودمند بیولوژیکی مثل زیست سازگاری، زیست تخریب پذیری، عدم سمیت و تحریک کم سیستم ایمنی، در موارد بیوپزشکی و دارویی مورد توجه گسترده قرارگرفته است. دوکسوروبیسین: دوکسوروبیسین با نام تجاری Adriamycin یک داروی ضد سرطان است که در روند رشد و گسترش سلول های سرطانی مداخله میکند. ای دارو برای درمان انواع مختلفی از سرطان از جمله سرطان های موثر بر سینه ، مثانه و همچنین برای درمان بیماری هاجکین و انواع خاصی از لوسمی نیز به کار میرود. (Epstein-Barr virus (EBV ویروس هرپس انسانی است که مرتبط با عفونتهای نهفته Subclinical در افراد سالم و تعداد متنوعی از لنفومهای سلول B است. عفونت EBV میتواند بر بیان miRهای سلولی اثر بگذارد و در سلولهای B لنفوییدی قادر به القای بیان miR155 است. BHRF1 : نوعی از miRهای EBV است که سطح بیان آن در پلاسمای افراد CLL افزایش مییابد. BHRF1 می تواند سلول های اپی تلیال را از آپوپتوز القا شده توسط TNF-α و FAS محافظت کند. TNF : سایتوکاین پیش التهابی است که موجب تحریک و القای پاسخ های ایمنی التهابی می گردد. FASL/FAS : نوعی گیرنده که توانایی القای مرگ را داشته و در سیناپس بین سلول های سرطانی و سلول های ایمنی وجود دارد. |
| ذینفعان نتایج طرح | سرطان در کشور ما از مهم ترین معضلات سلامت عمومی است وبیماران سرطانی ذینفعان اصلی نتایج این طرح خواهند بود. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| فرناز حاجی زاده | همکار اصلی |
| قاسم قلم فرسا | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| سیما شاه محمدی فرید | مشاور |
| سینا عباس زاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر افزایش حساسیت نسبت به دوکسوروبیسین با استفاده از نانوذرات بارگیری شده با siRNA می توند روش نوین درمانی لوسمی باشد.متن خبر مقاومت سلول های لوسمیک نسبت به مرگ از مهمترین مشکلات موجود در درمان انواع لوسمی ها محسوب می شود. انواع داروهای شیمی درمانی نظیر دوکسوروبیسین به صورت روتین در درمان لوسمی ها نظیر لوسمی لنفوسیتی مزمن (CLL) استفاده شده اند که متاسفانه با کارایی پایینی همراه بوده اند. یکی از فاکتورهای مهمی که در مقاومت به آپوپتوز در سلول های بدخیم نقش مهمی ایفا می نماید، فاکتور BHRF1 می باشد. در این مطالعه به منظور تحویل همزمان BHRF1 siRNA و دوکسوروبیسین به سلول های لوسمیک و نرمال از نانوذرات تری متیل کیتوزان پوشیده شده با کربوکسی متیل دکستران استفاده شد. بررسی سمیت سلولی نشان داد که نانوذرات سمیت چندانی بر روی سلول ها ندارند درحالیکه نانوذرات بارگیری شده با siRNA و دوکسوروبیسین به صورت معناداری موجب مرگ سلول ها می شدند. در نتیجه، درمان CLL با استفاده از نانوذرات بارگیری شده با BHRAF1 siRNA و دوکسوروبیسین می تواند به عنوان یک روش نوین برای درمان لوسمی مطرح باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
