بررسی اثرات تحریکی Toll-like receptor توسط لیپو پلی ساکارید باکتری گرم منفی بر روند تمایز و بلوغ سلول های بنیادی آندوتلیال جدا شده از خون بند ناف
The role of Toll-like receptor stimulation via bacterial LPS on the functional maturation of cord blood endothelial progenitor cells
مجریان: رضا رهبرقاضی
خلاصه روش اجرا: این مطالعه به منظور بررسی اثرات تحریک Toll-like receptor بر روند بلوغ و تمایز سلول های بنیادی آندوتلیال به سلول های بالغ عملکردی با استفاده از LPSطراحی شده است. ابتدا سلول های بنیادی اتدوتلیال با استفاده از Ficoll از خون بند ناف جداسازی شده و به مدت 7 روز در محیط کشت اختصاصی EGM-2 کشت داده می شوند بعد از این مدت سلول ها از محیط جدا شده و از نظر بیان مارکر های سلول های اندوتلیال از قبیل CD 133 و CD 34 توسط روش فلوسیتومتری بررسی می شوند سپس سلول های مورد نظر جهت ایجاد التهاب به مدت 7 روز با دوز های مختلف از LPS باکتری گرم منفی تیمار خواهند شد و میزان بقاء سلولی با استفاده از روش MTT سنجیده می شود.جهت تایید فعال شدن مسبر سیگنالی گیرنده Toll-like receptor، سلول های تیمار شده با LPS لبز و ابتدا استخراج RNA و سنتز DNA انجام شده و میزان بیان ژن های مسیر التهاب شامل NF-KB، MY88، TRIF با استفاده از real - time PCR اندازه گیری می شود در ادامه به منظور تعیین روند بلوغ سلول های آندوتلیال پیش ساز به سمت سلول های آندوتلیال بالغ میزان بیان پروتئین های vWF و VE-cadherin با استفاده از ایمونو فلورسانت اندازه گیری می شود و در نهایت جهت تعیین میزان مهاجرت سلولی ار روش Transwell migration insert که روشی است برای بررسی میزان مهاجرت سلول ها در شرایط in vitro یا برون تنی ، استفاده می شود. به منظور بررسی میزان تمایز سلول های بنیادی آندوتلیال به سلول های بالغ در محیط داخل بدن، از روش Matrigel Plug assay استفاده می گردد. برای این منظور ماتریژل حاوی یک میلیون سلول های بنیادی آندوتلیال و 10 نانوگرم بر سی سی در ناحیه زیر جلد موش Supra flank تزریق می گردد. و بعد ار یک هفته توده مورد نظر خارج و تعداد مویرگ های تشکیل یافته به روش IHC با رنگ آمیزی vWF انجام می گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 59976 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثرات تحریکی Toll-like receptor توسط لیپو پلی ساکارید باکتری گرم منفی بر روند تمایز و بلوغ سلول های بنیادی آندوتلیال جدا شده از خون بند ناف |
| عنوان لاتین طرح | The role of Toll-like receptor stimulation via bacterial LPS on the functional maturation of cord blood endothelial progenitor cells |
| نوع طرح | گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | باتوجه به اهمیت بسیار زیاد آسیب های عروقی در بیماری های ایسکمیک قلبی و به دنبال آن تغییرات بافتی ناشی از التهاب، یکی از مشکلات پیش رو در این روند محدود بودن میزان تمایز سلولی به رده بالغ سلول های عروقی می باشد. بنابراین ضروری است که نقش محوری گیرنده Toll-like و فعالیت آن از طریق LPS بر افزایش یا کاهش میزان تمایز سلو های آندوتلیال پیش ساز مشتق از سلول های بنیادی مغز استخوان در محیط برون تنی بررسی گردد که این مطالعه در کسب اطلاعات زیاد در زمینه ی درمان یا کاهش آسیب های ناشی از بیماری های قلبی بسیار موثر خواهد بودو همچنین تا به حال مطالعه ای با این اساس در محیط برون تنی انجام نگرفته یا بصورت بسیار محدود بوده است. |
| اهداف اختصاصی | بررسی میزان بقاء سلولی با استفاده از روش MTT -بررسی ژن های NF-KB و MYD88 و TRIF بعد از مواجهه با LPS باکتری -تعیین بیان پروتئین های vWF و VE-cadherin توسط روش رنگ آمیزی ایمونو فلورسانت -تعیین میزان مهاجرت سلولی با استفاده ار روش Transwell migration insert -بررسی میزان تمایز سلول های بنیادی آندوتلیال به سلول های بالغ در محیط داخل بدن، با استفاده از روش Matrigel Plug assay |
| چکیده انگلیسی طرح | This study was designed to investigate the effects of Toll-like receptor stimulation on the process of maturation and differentiation of endothelial progenitor cells into functional adult cells using LPS. At first, endothelial progenitor cells are isolated from cord blood using Ficoll and cultured for 7 days in EGM-2 specific culture medium. After that, the cultured cells are screened for the expression of endothelial cell markers such as CD 133 and CD 34 by flow cytometry, then targeted cells are treated to induce inflammation with different doses of Gram-negative bacterial LPS for 7 days, and cell viability is measured using the MTT assay.To confirm the activation of the Toll-like receptor signal transduction pathway, LPS-treated cells were first extracted for RNA and DNA synthesis and expression levels of inflammatory pathway genes including NF-KB, MY88, and TRIF were analyzed using real-time PCR. To determine the maturation process of precursor endothelial cells toward mature endothelial cells, the expression levels of vWF and VE-cadherin proteins were measured using immunofluorescence and finally to determine cell migration, Transwell migration insert, a method used to monitor cell migration in vitro or in vitro, is used. Matrigel Plug assay method is used to evaluate the differentiation of endothelial stem cells to adult cells in in vivo. For this purpose, Matrigel contains 1 million endothelial stem cells and 10 ng / ml are injected into the subcutaneous area of Supra flank nude mice. After a week, the formed mass is removed and the number of vesel-like structures are measured by IHC staining for vWF factor. |
| کلمات کلیدی | Toll – like receptor: مولکول هایی در سطح سلول های ایمنی و آندوتلیال که گیرنده ی لیپوپلی ساکارید و گلیگوپروتئین وسایر الگوهای بیماری زای میکروبی هستند. Maturation: مهاجرت سلول ها از خون یا سایرنواحی بدن به سمت محل آسیب دیده و شرکت در ترمیم و یا ایجاد التهاب. Endothelial progenitor cell ((EPCs: سلول های پیش ساز آندوتلیال که از سلول های بنیادی مغز استخوان منشاء گرفته و در خون محیطی به سلول های پیش ساز آندوتلیال گردشی تمایز پیدا کرده و در آسیب های عروقی با مهاجرت به محل آسیب در ترمیم آن شرکت میکنند. Cord blood: خون بند ناف که دارای مقدار فراوانی از سلول های بنیادی و سلول های پیش ساز آندوتلیال می باشد. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران قلبی عروقی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| رضا رهبرقاضی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| مرتضی حیدرزاده | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر باکتری ها موجب فعال شدن سلول های بنیادی رگ ساز می شوند.متن خبر حضور باکتری ها در بدن منشاء بسیاری از تحولات بیولوژیکی است. در مطالعه اخیر نشان داده شده است که ساختار دیواره باکتری ها دارای موادی است که می تواند موجب افزایش فعالیت بیولوژیکی سلول های بنیادی رگ ساز انسان شود. این مواد موجب می شود که میزان مهاجرت و ایجاد سلول های رگ بالغ شود. سلول های بنیادی رگ ساز در حضور ترکیبات دیواره باکتری می توانند در مدل های حیوانی عروق بالغ را ایجاد کنند. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
