فعالیت آنتی توموری سلولهای CD16 possitive NK cells مشتق از سلولهای بنیادی خون بند ناف جهت استفاده در ایمیون سل تراپی برای لوکمیای لنفوئیدی حاد(ALL)
Anti tumor activity of cord blood stem cell derived CD16 positive NK cells as an immune cell therapy for acute lymphoblastic leukemia (ALL)
مجریان: حجت اله نوزاد چروده , علی عابدالهی
خلاصه روش اجرا: خون بند ناف از بیمارستانهای مختلف بعد از زایمان جمع اوری و هپارینه شده و در فلسکهای مخصوص به ازمایشگاه سلولهای بنیادی منتقل میشود. سلولهایCD34بعد از انجام فایکول با استفاده از MACS جدا شده و در تانک نیتروژن ذخیره میشوند. برای رسیدن به هرکدام از اهداف حدود 15 نمونه کافی است.باهرکدام از نمونه هامیتوان چند ازمایش انجام داد.نمونه ها کشت داده شده با سایتوکاینهای مختلف شامل ,IL21,IL 15,IL2,SCF,IL7, Flt3-ligand,notch ligand به محیط اضافه خواهد شد و روزهای صفر,7,14و21 توسط فلوسایتومتری مورد بررسی قرار خواهند گرفت. برای کشت سلولی در صورت نیازاز سلولهای استرومایی OP9وOP9-DL1استفاده می شود. سلول های تولید شده در روزهای مورد نظر از نظر بیان مارکرCD16مورد ارزیابی قرار می گیرند و اثرات سایتوتوکسیتی و تولید سیتوکین در مقابله با سلول های سرطانی مورد ارزیابی قرار می گیرد بدین منظور پس از defreeze سلولها به مدت 48 ساعت در حضور RPMI حاوی 10% FBS کشت داده خواهند شد سلول های NK تولید شده از سلولهای CD34بند ناف به مدت 6 ساعت در درحضوررده های سلولی سرطان لوکمیا ( ( MOLT4, jurkat , REH,NALM6با نسبت های مختلف کشت داده خواهند شد و در هر گروه اثر مداخلات فوق بر روی سلولها با استفاده ازدگرانالاسیون داخل سلولی CD107a برای ارزیابی سیتوتوکسیتی وINF-y برای سیتوکین پروداکشن ارزیابی خواهد شد و همچنین اثرات مهاری ADAM17بر روی بیان CD16 و در مقابله با سلول های سرطانی با استفاده ازمهارکننده اختصاصی ADAM17مورد ارزیابی قرار می گیرد. بدین منظور سلول های NK تولید شده در زمان های مختلف با مهارکننده کشت داده خواهد شد در ادامه برای بررسی تاثیر مهارکننده بر روی سلول های NK تولید شده بیان مارکر CD16 توسط فلوسایتومتری مورد بررسی قرار خواهد گرفت و اثر تغییر بیان مارکرCD16 بعد از استفاده ازمهارکننده بر روی سلولها با استفاده ازدگرانالاسیون داخل سلولی CD107a برای ارزیابی سیتوتوکسیتی وINF-y برای سیتوکین پروداکشن ارزیابی خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 64365 |
| عنوان فارسی طرح | فعالیت آنتی توموری سلولهای CD16 possitive NK cells مشتق از سلولهای بنیادی خون بند ناف جهت استفاده در ایمیون سل تراپی برای لوکمیای لنفوئیدی حاد(ALL) |
| عنوان لاتین طرح | Anti tumor activity of cord blood stem cell derived CD16 positive NK cells as an immune cell therapy for acute lymphoblastic leukemia (ALL) |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | لوکمی لیمفوبلاستیک حاد ( ALL) فرمی از سرطان مهاجم در بین کودکان و بزرگسالان می باشد که با سطح بیان بالای CD47 مشخص می شود. مقاومت به درمان های جاری از قبیل شیمی درمانی و عوارض جانبی این گونه درمان ها باعث شده محققین به دنبال پیداکردن درمان های جایگزین از قبیل تولید پاسخ های ایمنی در جهت کنترل سرطان باشند.علیرغم نتایج امید بخش در استفاده از سلول های NK برای ایمونوتراپی ⸲ براورد نیاز های کلینیکی نیاز به بررسی های بیشتری دارد. سلول های CD16positiveNK قادر به حذف سلول های توموری با مکانیسم سیتوتوکسیتی سلولی با واسطه آنتی بادی (ADCC) می باشد. از طرف دیگر طی بررسی های انجام گرفته بیان پایین CD16بعد از تحریکات میتوزنی و coculture با سلولهای بدخیمی رخ می دهد که به واسطه شدینگ اکتودمینی با واسطه متالوپروتئیناز ADAM17 این امر صورت می گیرد. بنابراین ما در این مطالعه اثرات ADCC سلول های CD16+ NK مشتق از سلول های بنیادی بند ناف را با استفاده از آنتی بادی CD47 و مهارکننده ADAM17 ارزیابی کردیم |
| اهداف اختصاصی | یافتن مناسب ترین ترکیب سایتوکینی برای تولید درصد بالای CD16 positive NK cell از سلولهای بنیادی بند ناف - ارزیابی خاصیت آنتی توموری CD16 positive NK cell مشتق از خون بند ناف بر سلولهای لنفوبلاستیک Bو T -بررسی و کارایی مهارADAM17 برافزایش احتمالی فعالیت سیتوتوکسیسیتی CD16 positive NK cell در مواجهه با سلولهای ALL -استفاده از آنتی بادی anti-CD47 برای ارزیابی خاصیت ADCC سلولهای CD16 positive NK cell در مواجهه با سلولهای ALL |
| چکیده انگلیسی طرح | Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is an aggressive cancer in children and adults which possess higher CD47 expression than normal cells. ALL chemotherapy has a lot of side effects and in most cases is ineffective. However arrival of Natural killer (NK) cell immunotherapy raised hopes for successful treatment of cancers, tailoring NK cells to meet clinical requirements is still under investigation. Of note, CD16+ (FCγIIIa) NK cells eliminate tumor cells with antibody dependent cell cytotoxicity (ADCC) mechanism. The mononuclear cells were isolated from umbilical cord blood by Ficoll-Paque density gradient and CD34 positive cells were enriched with MACS LS column using CD34 microbeads. Then cells were cultured for 21 days in the presence of different cytokines. Flow cytometry was performed on days 7, 14 and 21. Expression of CD47 and ADAM17 evaluated using westernblot and Flow cytometry. NK cell cytotoxicity was evaluated by measuring expression of CD107a and secretion of IFN-γ in combination of ALL cell line in the presence and absence of ADAM17 inhinitor⸲ anti-CD 47 antibody and Macrophages. |
| کلمات کلیدی | ALL: سرطان سلولهای سفید خونی + CD34cells: سلولهای حاوی سلولهای بنیادی Natural killer:سلولهای کشنده طبیعی HLA: انتی ژن لوکوسیت انسانی CD56+ cells:سلول های کشنده طبیعی عرضه کننده آنتی ژن CD56 CD16+ cells: سلول های کشنده طبیعی عرضه کننده آنتی ژن FCYRIII :ADCCسایتوتوکسیتی سلولی با واسطه تولید آنتی بادی CD107a lysosomal associated membrane protein1 (LAMP1):پروتئین همراه غشای لیزوزمی ADAM (a disintegrine and metalloproteinase):پروتین متالوپروتیناز |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حجت اله نوزاد چروده | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| علی عابدالهی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| بهناز ولی پور | دانشجوی مالک پایان نامه |
| محمد کریمی پور | مشاور |
| مسعود دارابی امین | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر سلولهای NK cells مشتق از سلولهای بنیادی خون بند ناف با تحریک ماکروفاژها باعث کنترل سرطان می شودمتن خبر همانطور که می دانیم یکی از جمعیت NK Cells ، سلولهای CD16 cells هستند که این نوع NK Cells می توانند انتهای FC انتی بادی را تشخیص بدهند و از طریق ADCC باعث از بین بردن سلولهای سرطانی می شوند. در این تحقیق از سرطان لنفوئیدی حاد استفاده شده و سلولهای CD16 NK cells از خون بند ناف گرفته شده است. ما این سلولها را با انتی بادی برعلیه CD47 بکار بردیم چون بیان ان در سرطانها افزایش میابد و باعث غیر فعال کردن ماکروفاژها می شود. بنابرین علاوه بر اینکه از خاصیت ADCC سلولهای NK Cells استفاده کردیم، باعث فعال کردن ماکروفاژها نیز شدیم. و در این تحقیق نشان دادیم که فعال کردن ماکروفاژها و CD16 NK cells می تواند سلولهای سرطانی حاد لنفوئیدی را تا حد زیادی کنترل کند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
