بررسی ژنوتیپی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی هلیکوباکترپیلوری به مترونیدازول و کلاریترومایسین در نمونه های پارافینی بیوپسی معده بدست آمده از بیماران مبتلا به سرطان معده و بیماران غیرسرطانی
Evaluation of genotypic antibiotic resistance profile of Helicobacte pylori to metronidazole and clarithromycin in paraffin-embedded gastric biopsy specimens isolated from gastric cancer and noncancerous patients.
مجریان: وحیده طرح ریز
خلاصه روش اجرا: در حال حاضر، سرطان معده به تنهایی 10 درصد کل سرطان ها را در جهان تشکیل می دهد. این نوع سرطان چهارمین سرطان مهم در دنیا بوده و هر ساله بیش از 870 هزار مورد جدید در سطح جهان گزارش می شود. شیوع این بیماری در ایران و بخصوص در نواحی شمال غرب کشور بسیار زیاد است. هلیکوباکتر پیلوری (H. pylori) یک پاتوژن مهم معده است که بیش از نیمی از مردم جهان را آلوده کرده است. بروز عواقب ناشی از کلونیزاسیون این باکتری در افراد بسیار متغیر است. . به دلیل اینکه بعد از درمان عفونت H. pylori اختلالات گوارشی ناشی از آن به طور چشمگیری کاهش یافته وعوارضی نظیر دردهای شکمی وخونریزی از بین می رود، ریشه کنی این باکتری در مواردی نظیر زخم یا وجود زمینه ژنتیکی ابتلا به سرطان کاملا توصیه می شود. مقاومت آنتی بیوتیکی عامل کلیدی تعیین کننده در ریشه کنی H. pylori است. با توجه به اهمیت ریشه کنی H. pylori در بیماران مبتلا به سرطان معده، در این مطالعه برآنیم تا الگوی مقاومت ژنوتیپی این باکتری را در نمونه های پارافینی ( بلوک شده بی نام) بیوپسی معده بدست آمده از این بیماران تعیین کنیم. بدین منظور از نمونه های پارافینه (FFPE) بدست آمده از بیماران مبتلا به سرطان معده که مبتلا به عفونت H. pylori هستند و نیز افراد آلوده غیرسرطانی، DNA به روش Salting out استخراج خواهد شد. به منظور تایید حضور DNA مربوط به H. pylori ژن اوره آز UreC به روش PCR تکثیر خواهد شد. بررسی ژنوتیپی الگوی مقاومت به کلاریترومایسین که مربوط به سه نوع جهش جابه جایی A2143G, A2142G و A2142C در ژن 23s rRNA باکتری می باشد، به روش Real-Time PCR یا PCR انجام می گردد. در این روش تکثیر یک قطعه از ژن 23s rRNA همزمان با شناسایی محصول توسط (The allele-specific PCR(ARMS PCR و یا Sequencing انجام خواهد گردید. برای بررسی فراوانی ژنوتیپی مقاومت به مترونیدازول نیز از به روش PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن های rdxA و frxA و نیز توالی یابی آن ها انجام خواهد گرفت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 64015 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی ژنوتیپی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی هلیکوباکترپیلوری به مترونیدازول و کلاریترومایسین در نمونه های پارافینی بیوپسی معده بدست آمده از بیماران مبتلا به سرطان معده و بیماران غیرسرطانی |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of genotypic antibiotic resistance profile of Helicobacte pylori to metronidazole and clarithromycin in paraffin-embedded gastric biopsy specimens isolated from gastric cancer and noncancerous patients. |
| نوع طرح | طرح تحقیقاتی |
| اولویت طرح | اپیدمیولوژی، پیشگیری، تشخیص زودهنگام، درمان و بازتوانی در سرطانهای شایع |
| نوع مطالعه | |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | |
| مدت اجرا - ماه | 10 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | در حال حاضر، سرطان معده به تنهایی 10 درصد کل سرطان ها را در جهان تشکیل می دهد. این نوع سرطان چهارمین سرطان مهم در دنیا بوده و هر ساله بیش از 870 هزار مورد جدید در سطح جهان گزارش می شود. سرطان معده همچنین دومین عامل مرگ و میر ناشی از سرطان می باشد که سالیانه بیش از 650 هزار نفر از این سرطان در جهان فوت می کنند. بیشتر بیماران مبتلا به سرطان معده در هنگام تشخیص بیش از 50 سال دارند و میزان بروز آن در مردان دو برابر بیشتر از زنان است. مهمترین تغییرات در میزان بروز این بدخیمی در رابطه با مناطق جغرافیایی مشاهده شده است. گزارشات نشان می دهند که شیوع این بیماری در ایران و بخصوص در نواحی شمال غرب کشور بسیار زیاد است. هلیکوباکتر پیلوری (H. pylori) یک پاتوژن مهم معده است که بیش از نیمی از مردم جهان را آلوده کرده است. بروز عواقب ناشی از کلونیزاسیون این باکتری در افراد بسیار متغیر است. در بسیاری از افراد عفونت در تمام طول عمر بدون علامت باقی می ماند، اما در برخی افراد می تواند به عنوان کوفاکتوری مهم در ایجاد بیماری های مهم دستگاه گوارش فوقانی عمل نماید. این باکتری مهمترین عامل اتیولوژیک سرطان معده است. سازمان بهداشت جهانی هلیکوباکتر پیلوری را جز دسته یک مواد سرطانزا طبقه بندی کرده است. به دلیل اینکه بعد از درمان عفونت H. pylori اختلالات گوارشی ناشی از آن به طور چشمگیری کاهش یافته وعوارضی نظیر دردهای شکمی وخونریزی از بین می رود، ریشه کنی این باکتری در مواردی نظیر زخم یا وجود زمینه ژنتیکی ابتلا به سرطان کاملا توصیه می شود. مقاومت آنتی بیوتیکی عامل کلیدی تعیین کننده در ریشه کنی H. pylori است. مقاومت آنتی بیوتیکی در همه آنتی بیوتیک های رایج در درمان عفونت H. pylori وجود دارد و میزان آن در مناطق جغرافیایی مختلف متفاوت است. تعیین الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی H. pylori به دلیل کشت دشوار و طولانی این باکتری به آسانی قابل تعیین نمی باشد. امروزه با پیشرفت تکنیک های مولکولی، می توان الگوی مقاومت و نیز مکانیسم های مقاومت آنتی بیوتیکی را در باکتری ها تعیین کرد. شناسایی مکانیسم های مقاومت آنتی بیوتیکی می تواند در کشف داروهای جدید و یا انتخاب داروهای جایگزین موثر باشد. با توجه به اهمیت ریشه کنی H. pylori در بیماران مبتلا به سرطان معده، در این مطالعه برآنیم تا الگوی مقاومت ژنوتیپی این باکتری را در نمونه های پارافینی بیوپسی معده بدست آمده از این بیماران تعیین کنیم. |
| اهداف اختصاصی | بررسی فراوانی جهش های منجر به مقاومت کلاریترومایسین در نمونه های FFPE بیماران مبتلا به سرطان معده و افراد آلوده غیرسرطانی. -بررسی فراوانی جهش های منجر به مقاومت مترونیدازول در نمونه های FFPE بیماران مبتلا به سرطان معده و افراد آلوده غیرسرطانی. |
| چکیده انگلیسی طرح | Gastric cancer is an aggressive disease which is the fourth prevalent malignancy in the world. Helicobacter pylori (H. pylori) infection is one of the most important risk factors for the malignancy. Antibiotic resistance, especially resistance to clarithromycin and metronidazole is a major factor for treatment failure of H. pylori infections. Herein we want to evaluate the genotypic antibiotic resistance profile of H. pylori in paraffin-embedded gastric biopsy specimens isolated from gastric cancer and also noncancerous patients. DNA extraction will be performed using a modified salting out method. In order to confirmation of H. pylori presence in the specimens, the ureC gene will be amplified by PCR reaction. Clarithromycin resistance mechanism in H. pylori is due to three important mutations in 23s r RNA; A2142G, A2143G and A2142G. Genotypical clarithromycin resistances will be investigated by using Real time PCR and determination of the melting temperature. Resistance to metronidazole will be investigated by PCR reaction using specific primers for rdxA and frxA primers and also sequencing of the PCR products. |
| کلمات کلیدی | FFPE: formalin-fixed paraffin-embedded rdxA : ژن کد کننده یک NADPH نیتروردوکتاز حساس به اکسیژن frxA : ژن کد کننده NAD(P)H فلاوین نیتروردوکتاز هلیکوباکترپیلوری: عامل اصلی بیماریهایی مثل زخم معده و ناراحتیهای معده و مرتبط با سرطان معده |
| ذینفعان نتایج طرح | افرادی که مشغول فعالیت و تحقیق در زمینه بیماریهای غیر واگیر دار بویژه سرطان معده می باشند. دانشگاه های علوم پزشکی و مراکز تحقیقاتی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| وحیده طرح ریز | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| رضا اقدام ضمیری | همکار اصلی |
| شیرین عیوضی | همکار اصلی |
| محمد سعید حجازی | همکار اصلی |
| پریور یزدانی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر جهش های ژنتیکی عامل اصلی در ایجاد مقاومت به آنتی بیوتیک های مترونیدازول و کلاریترومایسین در افراد مبتلا به عفونت هلیکوباکتر پیلوری می باشد.متن خبر در حال حاضر، سرطان معده به تنهایی 10 درصد کل سرطان ها را در جهان تشکیل داده و بعنوان چهارمین سرطان خطرناک دنیا محسوب می گردد. شیوع این بیماری در ایران، بخصوص در نواحی شمال غرب کشور بسیار زیاد و غیر قابل انگار می باشد. هلیکوباکتر پیلوری (H. pylori) به عنوان پاتوژن اصلی و یکی از مهمترین عوامل سرطان معده، بیش از نیمی از مردم جهان را آلوده کرده است. به دلیل اینکه بعد از درمان عفونت حاصل از این باکتری، اختلالات گوارشی ناشی از آن به طور چشمگیری کاهش یافته وعوارضی نظیر دردهای شکمی وخونریزی از بین می رود، لذا ریشه کنی این باکتری در مواردی نظیر زخم یا وجود زمینه ژنتیکی ابتلا به سرطان کاملا توصیه می شود. در پژوهش فوق، به این نتیجه رسیدیدم که متاسفانه در طی سالهای اخیر میزان مقاومت به آنتی بیوتیک های مهم در درمان عفونت هیلکوباکتر پیلوری شامل مترونیدازول و کلاریترومایسین افزایش یافته است. این افزایش مقاومتی در پی ایجاد جهش در ژنهای مربوط به 23S rRNA, rdxA و frxA ایجاد گردیده است. برطبق یافته های بدست آمده، از همکاران پزشک خواهشمند است که استفاده از دو آنتی بیوتیک مترونیدازول و کلاریترومایسین را کاهش و درمان با آنتی بیوتیک های موثرتری نظیر فلوروکینولونها جایگزین گردد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر جهش در ژنهای A2143G، rdxA و frxA عوامل ایجاد مقاومت هلیکوباکتر پیلوری به آنتی بیوتیک های کلاریترومایسین و مترونیدازول در ایران می باشد.متن خبر نظر به اهمیت ریشه کنی عفونت با میکروب هلیکوباکتر پیلوری در بیماران مبتلا به سرطان معده، الگوی مقاومت ژنوتیپی این باکتری به دو آنتی بیوتیک رایج در درمان شامل کلاریترومایسین و مترونیدازول بررسی گردید. جهت نیل به این منظور از DNA باکتری موجود در نمونه های پارافینه (FFPE) بدست آمده از بیماران مبتلا به سرطان معده که آلوده به عفونت میکروبی بودند و همچنین افراد آلوده غیرسرطانی، استفاده گردید. نتایج نشان داد که الگوی مقاومت به کلاریترومایسین، مربوط به سه نوع جهش جابه جایی A2143G, A2142G و A2142C در ژن 23S rRNA باکتری می باشد و فراوانی ژنوتیپی مقاومت به مترونیدازول نیز مربوط به ژن های rdxA و frxA و در توالی ژنومی آنهاست. همچنین بررسی ها نشان دادند که جهش A2143G متداول ترین جهش ژن مقاومت به کلاریترومایسین در ایران بوده و جهش های misssense و frameshift جهش های متداول ژنهای rdxA و frxA می باشند. محقیقن همکاری کننده در این پژوهش توصیه می کنند که درمان با این دو آنتی بیوتیک را متوقف و در راستای گسترش سیاست های پژوهشی طرح های مرتبط سریعا به بررسی و شناسایی آنتی بیوتیک های جدیدتر جهت جایگزینی با آنتی بیوتیک های مذکور اقدام نمایند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر ..................................................متن خبر ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................ |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر ..................................................متن خبر ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................ |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
