مهار ترکیبی مولکول های CD73 و گیرنده EP4 به منظور سرکوب رشد سلول های سرطانی
Combinatorial inhibition of CD73 and EP4 RECEPTOR in order to suppression the cancer cells growth.
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق
خلاصه روش اجرا: این مطالعه دو فاز دارد: ۱.تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA : ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. کیتوزان لاکتات پتانسیل بالایی برای کپسوله کردن siRNA و حفاظت از آن در برابر تخریب سرمی دارد. تشکیل نانو ذرات کیتوزان لاکتات در اثر تعاملات یونی بین کیتوزان لاکتات و siRNA حل شده در سدیم تری پلی فسفات ( siRNA/TPP ) صورت می گیرد. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2% آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده : از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) و B16F10 ( ملانوما ) و CT26 (سرطان کولون ) در این مطالعه استفاده خواهد شد . این رده های سلولی در محیط RPMI1640حاوی 10%fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند.پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA ضد CD73بهمراه آنتاگونیست EP4 Receptor را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر درمان های ترکیبی و تکی بر روی بیان ژن CD73 و EP4 Receptor در کشت سلول ها توسط تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود.تاثیر نانوذرات حاویsiRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. همچنین، تاثیر درمان ترکیبی بر روی جلوگیری از بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهارکننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز نیز توسط تکنیک Real-time PCR بررسی می گردد. ضمن اینکه تاثیر درمان ترکیبی بر روی مهاجرت سلولی بوسیله تست Wound healing یررسی خواهد شد. تاثیر درمان بر روی آنژیوژنز نیز بوسیله تست CAM ارزیابی خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 64010 |
| عنوان فارسی طرح | مهار ترکیبی مولکول های CD73 و گیرنده EP4 به منظور سرکوب رشد سلول های سرطانی |
| عنوان لاتین طرح | Combinatorial inhibition of CD73 and EP4 RECEPTOR in order to suppression the cancer cells growth. |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه, گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | نانوفیبرها، نانوذرات و اسکافولدها (در طب بازساختی، مهندسی بافت و دارورسانی) |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 18 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | گیرنده EP4 در حال حاضر به عنوان متنوع ترین و امیدوار کننده ترین در بین گیرنده های PGE2 شناخته می شود. سیگنالینگ EP4 ارتباط نزدیکی با سرطان زایی ، هیپرتروفی قلب ، تجمع عروق ، بازسازی عروق ، بازسازی استخوان ، هموستاز دستگاه گوارش ، عملکرد کلیه و عملکرد تولید مثل زن دارد.علاوه بر اقدامات ضد التهابی کلاسیک EP4 بر روی سلولهای تک هسته ای و سلولهای T ، شواهد اخیر نشان داده اند که سیگنالینگ EP4 به عملکرد پیش التهابی نیز کمک می کند. ازطرفی مطالعات جمع آوری شده نشان داده است که CD73 یک مولکول اصلی نظارتی از گسترش سلول های سرطانی، مهاجرت و تهاجم، آنژیوژنز تومور و فرار از ایمنی تومور است. مطالعات جداگانه زیادی نشان داده است که رابطه دوطرفه ای میان گیرنده EP4 و CD73 وجود دارد. ما در این مطالعه سعی در مهار فاکتور رونویسی CD73با استفاده از نانوذرات SiRNA وهمچنین مهار گیرنده ی EP4 با استفاده از آنتاگونیست آن هستیم تا یکی از مسیر های اصلی در پیشرفت سرطان را مهارکنیم |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی : siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده -: مطالعه in vitro اثر بخشی درمان ترکیبی بر روی بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهار کننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز سلول های سرطانی با روش Real-time PCR: -بررسی تاثیر درمان ترکیبی بر روی مهاجرت سلولی و آنژیوژنز |
| چکیده انگلیسی طرح | The EP4 receptor is currently recognized as the most diverse and promising among PGE2 receptors. EP4 signaling is closely linked to carcinogenesis, cardiac hypertrophy, vascular aggregation, vascular remodeling, bone regeneration, gastrointestinal homeostasis, renal function and female reproductive function. In addition to the classical anti-inflammatory actions of EP4 on mononuclear cells and T cells, Recent evidence has shown that EP4 signaling also contributes to proinflammatory function. In addition, studies have shown that CD73 is a major regulatory molecule for cancer cell proliferation, migration and invasion, tumor angiogenesis, and escape of tumor immunity. Many separate studies have shown that there is a bilateral relationship between the EP4 and CD73 receptors. In this study, we sought to inhibit CD73 using SiRNA nanoparticles as well as EP4 receptor antagonist inhibition to block one of the major pathways in cancer progression. |
| کلمات کلیدی | SiRNA: (RNAi) مداخله گر اصطلاحی است که به مکانیسم خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای گفته می شود.در تکنولوژیRNA های مداخله گر (siRNA) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجودمی آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، و بنابراین بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. :CD73 باعث دفسفوریله شدن AMP خارج سلولی شده و باعث تولید ادنوزین میشود. متاستاز Metastasis) ) : به گسترش و مهاجرت سلولهای سرطانی از یک بافت به بافتهای دیگر، متاستاز گفته میشود آنژیوژنز (Angiogenesis) : فرایندی فیزیولوژیکی است که در آن رگهای جدید از رگهای موجود رشد میکنند.ایجاد رگهای خونرسان در درون تومورها برایآنها حیاتی است. نانوذره (Nanoparticle) : ذراتی هستند که ابعاد آنها در حدود ۱ تا ۱۰۰ نانومتر است. لیپوزمها، درخت سانها، نانو ذرات پلیمری، نانو ذرات پوشش داده شده با پلیمرها، نانو ذرات کیتوزان و لستین و نانو ذرات دارویی نمونههایی از نانو ذراتی میباشند که برای دارو رسانی استفاده شده اند. کیتوزان : کیتوزان یک آمینو پلی ساکارید خطی و ترکیبی از پیوند های (۴→۱β) واحدهای D-گلوکزآمین وN-استیل -D-گلوکزآمین است. کیتوزان توسط داستیلاسیون کیتین ( پلی ساکارید طبیعی و فراوان موجود در اسکلت خارجی سخت پوستانی همچون خرچنگ و میگو)، تهیه می شود. این پلی ساکارید کاتیونی به دلیل دسترس پذیری فراوان، چسبندگی بی نظیر، خواص دارویی مناسب و دیگرخواص سودمند بیولوژیکی مثل زیست سازگاری، زیست تخریب پذیری، عدم سمیت و تحریک کم سیستم ایمنی، در موارد بیوپزشکی و دارویی مورد توجه گسترده قرارگرفته است. COX2: آنزیم سیکلواکسیژناز2(COX2) آنزیم کلیدی ساخت پروستاگلاندینها در پاسخ به سایتوکینها است که سبب واکنشهای التهابی میگردد. COX-2 معمولا در سلول هابه طور ثابت نیست، اما بیان آن در واکنش به محرک های مختلف القا می شود. با این حال، COX-2 به طور جداگانه در برخی از بافتها مانند اندوتلیوم، کلیه، مخاط دهان و مغز بیان می شود PGE2: پروستاگلاندین E2 ازپروستاگلندین H2تولید می شودو در فرآیندهای بیولوژیکی چندگانه مانند درد، تب، تنظیم تنه عروق، نارسایی کلیه، یکپارچگی مخاطی، سرگیجه، انژیوژنز و تومور رشد نقش دارد. PGE2ها در مقادیر زیادی در فیبربلاست ها، سلول های مونوسیت ها، سلول های اپیتلیال و اندوتلیال تولید می شود EP RECEPTOR: گیرنده های پروستاگلاندین (PGE2)E2 جزو G پروتئینی هایی هستند که به پروستاگلاندین E2 متصل می شوند. آنها عضو گیرنده های گیرنده پروستاگلاندین هستند و شامل 4ایزوفرم های پروتئینی EP1,EP2,EP3,EP4 هستند. :EP4 RECEPTORگیرنده 4 پروستاگلاندین E2 (EP4) یک گیرنده پروستاگلاندین برای پروستاگلاندین (PGE2) E2 است که توسط ژن PTGER4 در انسان کدگذاری شده است. EP4 در واکنش های مختلف فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی و نقش مهمی در پیشرفت سلولهای سرطانی دارد. PI3K / AKT /ERK : یک مسیر سیگنال داخل سلولی است که در تنظیم چرخه سلولی مهم است وبا تکثیر سلولی، سرطان و طول عمر مرتبط می باشد. NF-Kb: (فاکتور هسته ای kappa-light-chain enhancer از سلول های فعال شده ی B) پروتئینی است که کنترل پروتکل DNA، تولید سیتوکین و بقای سلول را بررسی می کند. NF-κB در تقریبا تمام سلول های حیوانی یافت می شود و در پاسخ های سلولی به محرک هایی همچون استرس، سیتوکین ها، رادیکال های آزاد، فلزات سنگین، اشعه ماوراء بنفش، LDL اکسید شده و آنتی ژن های باکتری یا ویروسی دخیل است |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران سرطانی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| وحید کارپیشه | همکار اصلی |
| طاها خضرلو | دانشجوی مالک پایان نامه |
| هادی حسن نیا | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر کاهش بیان فاکتورهای CD73 و EP4 موجب مهار پیشرفت سرطان می شود.متن خبر ریزمحیط تومور یکی از عوامل اصلی عدم موفقیت بسیاری از روش های ایمونوتراپی سرطان است. مولکول های ایمونوساپرسیو در ریزمحیط تومور موجب مهار پاسخ های ایمنی ضد تومور شده و رشد سلول های توموری را تشدید می کنند. یکی از مهمترین محورهای تشدید کننده رشد تومور، محور CD73/EP4 است.در این مطالعه، از نانوذرات اکسید آهن سوپرپارامغناطیسی (SPION)-کایتوزان تیوله-تری متیل کایتوزان بار گیری شده باsiRNA برای سرکوب بیان مولکول های CD73 و EP-4 استفاده گردید. تعیین اثربخشی درمان ترکیبی بر روی سه رده سلولی سرطانی شامل 4T1، CT26 و B16-F10 صورت پذیرفت.نانوذرات بارگیری شده با siRNA به طور معناداری بیان مولکول های CD73 و EP4 را در سلول های سرطانی مهار کردند. مهار این مولکول ها موجب سرکوب تکثیر، توانایی ایجاد کلنی، مهاجرت و رگزایی در سلول های سرطانی شد.: این یافته ها نشان داد که نانوذرات اکسید آهن می توانند به عنوان یک حامل توانمند برای درمان سرطان مطرح باشند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
