اثر نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین بر بیان ژن های کاسپاز 8 و 9 در سلولهای سرطان دهان (HN5)
Effect of curcumin-cisplatin loaded mesoporous silica nanoparticles on the expression of caspase 8 and 9 in oral cancer cells (HN5)
مجریان: سیمین شریفی , جواد یزدانی
خلاصه روش اجرا: درمان ترکیبی سرطان با استفاده از داروهایی که با مکانیسم های مختلف کار می کنند و در نتیجه کاهش احتمال ایجاد سلول های سرطانی مقاوم یکی از روشهای درمانی مطلوب می باشد. هنگامی که داروهایی با اثرات مختلف ترکیب می شوند ، هر دارو می تواند در دوز مطلوب خود ، بدون عوارض جانبی غیر قابل تحمل استفاده شود . سیس پلاتین و کورکومین از داروهای ضد سرطان رایج می باشد و مصرف همزمان آنها در یک نانو سامانه می تواند از عوارض جانبی آنها بکاهد. در این تحقیق یکی از مکانیسم های اثر نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین مورد بررسی قرار خواهد گرفت. به منظور انجام این آزمایشات، سلولهای HN5 (که شماره پاساژ پایین دارند) بصورت تک لایه در محیط DMEM با گلوکز بالا حاوی سرم 10% (FBS یا سرم جنین گاوی) و آنتی بیوتیک کشت داده شده و پس از رسیدن به سطح رشد مناسب، با نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین مواجه می شوند. سپس RNA از سلول های مزبور استخراج خواهد شد. با استفاده از 1 میکرو گرم RNA واکنش RT ست می گردد. واکنش در دستگاه ترموسایکلر بر طبق برنامه دمایی خاص آغاز می شود. در ادامه با استفاده از روش Real time-PCR میزان بیان نسخه های ژنهایcaspase 8,9 بررسی و تعیین مقدار می شود. بطور خلاصه برای هر ژن یک جفت Primer طراحی شده و با استفاده از 10 نانوگرم cDNA ، بافر، پرایمرها، کلرید منیزیم، dNTP’s و آنزیم Tag-Polymerase واکنش PCR انجام می گردد. لازم به توضیح است که برای کنترل تغییرات بین نمونه ای، از Housekeeping Gene ß-Actin استفاده خواهد شد و از نسبت دانسیته ژن مورد نظر بر ß-Actin برای گزارش نتایج استفاده خواهد شد.نتایج مطالعه با استفاده از روشهای آماری توصیفی (میانگین ± انحراف معیار) گزارش خواهد شد. به منظور مقایسه بیان ژن های کاسپاز 8 و 9 با و بدون حضور نانوذرات، از آزمون t مستقل و یا معادل نا پارامتریک آن استفاده خواهد شد. آنالیز آماری با استفاده از نرم افزار SPSS ورژن 17 انجام شده و سطح معنی داری 0.05≥P در نظر گرفته خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 63940 |
| عنوان فارسی طرح | اثر نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین بر بیان ژن های کاسپاز 8 و 9 در سلولهای سرطان دهان (HN5) |
| عنوان لاتین طرح | Effect of curcumin-cisplatin loaded mesoporous silica nanoparticles on the expression of caspase 8 and 9 in oral cancer cells (HN5) |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | فناوریهای نوین در دندانپزشکی با تاکید بر فناوری نانو، نانوذرات، بایومتریالها و اپلیانسهای داخل دهانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | با توجه به این که عوارض داروهای شیمیایی همچون سیس پلاتین جهت شیمی درمانی در بیماران سرطانی چشمگیر می باشد و مصرف مواد غذایی طبیعی همانند کورکومین که اثرات ضد سرطانی و ویژگی های ممانعت از ایجاد سرطان را هم داراست، بر آن شدیم که در این تحقیق اثر ماده ضد سرطانی نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین بر روی سلولهای سرطان دهان مورد بررسی قرار دهیم. در این مطالعه اثر نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین بر روی ژنهای caspase 8,9 مورد بررسی قرار خواهد گرفت. |
| اهداف اختصاصی | بررسی بیان ژن های caspase 8,9 در سلول های سرطان دهان تریت شده با نانو ذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین |
| چکیده انگلیسی طرح | Combination of drugs for treatment of cancer that work with different mechanisms and thus reduce the chemoresistant cells. When drugs with different effects are combined, each drug can be used in its desired dose, without intolerable side effects. Cisplatin and curcumin are common anticancer drugs, and their concomitant use in a nanosystem can reduce their side effects. For these experiments, HN5 cells (low passage) will be cultured as monolayers in high glucose DMEM medium containing 10% serum (FBS or Fetal Bovin Serum) and antibiotics and after reaching the confluency level, Porous silica nanoparticles containing cisplatin and curcumin will be encountered. RNA will then be extracted from the cells. The RT reaction will be determined using 1 μg of RNA. The reaction in the thermocycler device begins according to a specific temperature schedule. Next, the real-time PCR assays of caspase 8,9 gene variants will be evaluated and quantified. Briefly, a primer pair will be designed for each gene and prepared using 10 ng of cDNA, buffer, primers, magnesium chloride, dNTP's and the Tag-Polymerase enzyme. The results of the study will be reported using descriptive statistical methods (mean and standard deviation). In order to compare the expression of caspase 8 and 9 genes with and without the presence of nanoparticles, independent t-test or its non-parametric equivalent will be used. Statistical analysis was performed using SPSS software version 17 and a significance level of P < 0.05 would be considered. HN5 cells will be cultivated in high glucose DMEM medium and will be treated with curcumin-cisplatin loaded mesoporous silica nanoparticles then expression levels of caspase 8,9 genes will be evaluated |
| کلمات کلیدی | آپوپتوز (Apoptosis): مرگ برنامه ریزی شده سلول (20) RT- PCR: واکنش زنجیره پلیمراز نسخه برداری معکوس ( Reverse Transcriptase-PCR ) که ابتدا ریبو نوکلئیک اسید (RNA ) توسط آنزیم نسخه بردار معکوس به DNA تبدیل شده و سپس توسط واکنش زنجیره پلیمراز (PCR) به نسخه های فراوان تکثیر می شود (21). Confluency: پوشیده شدن سطح کشت از تک لایه سلولی کاسپازها: کاسپازها گروهی از آنزیمها هستند که به خانواده پروتئازها تعلق دارند و نقش مهمی در مرگ برنامهریزیشده سلول، آپوپتوز و التهاب ایفا میکنند (8). HN5:رده سلولی سرطانی بدخیم سر و گردن (19) نانو ذرات سلیکا:یکی از کاربردی ترین مواد شیمیایی است. این نانوذرات ﺧﺼﻮﺻﻴﺎت ﻣﻨﺤﺼﺮﺑﻪ ﻓﺮدﺷﺎن از ﺟﻤﻠﻪ ﭘﺎﻳﺪاری ﺣﺮارﺗﻲ و ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﺑﺎﻻ، زﻳﺴﺖﺳﺎزﮔﺎری ﻣﻨﺎﺳﺐ، ﺣﻔﺮات ﻳﻜﻨﻮاﺧﺖ و ﻣﻨﻈﻢ، ﺳﻄﺢ وﻳﮋه ﺑﺴﻴﺎر زﻳﺎد ﺑﺎ ﺣﺠﻢ ﻣﻨﺎﻓﺬ ﺑﺎﻻ، ﻣﻮرﻓﻮﻟﻮژی ﻗﺎﺑﻞ ﻛﻨﺘﺮل، ﻗﺎﺑﻠﻴﺖ اﺻﻼح ﺳﻄﺢ، ﺳﻨﺘﺰ ﺳﺎده و ﺗﻮاﻧﺎﻳﻲ در ﺣﻤﻞ و ﭘﺬﻳﺮش اﻧﻮاع ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻣﻮﻟﻜﻮل ﻫﺎ ﻧﻈﻴﺮ ژن ﭘﺮوﺗﺌﻴﻦ ﻫﺎ، ﺑﻴﻮﺗﻴﻚ ﻫﺎ، آﻧﺘﻲ ﻫﺎ و داروﻫﺎی ﺿﺪ ﺳﺮﻃﺎن ﺑﻪ درون ﺣﻔﺮات ﺧﻮد ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻳﻚ ﮔﺰﻳﻨﻪ ﻣﻨﺎﺳﺐ در ﻛﺎرﺑﺮدﻫﺎی ﭘﺰﺷﻜﻲ ﻣﻌﺮﻓﻲ ﺷﺪه اﻧﺪ (2). کورکومین: ماده موثره موجود در زردچوبه است. این ماده دارای خواص ضدباکتریایی، خواص ضدالتهابی، ضد سرطانی و خواص آنتی اکسیدانی می باشد. (12و11). فراورده هاي دارويي و گياهي |
| ذینفعان نتایج طرح | ذینفعان این طرح در صورت مثبت بودن نتایج مطالعه احتمالا بیماران مبتلا به سرطان دهان خواهند بود. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| سیمین شریفی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| صدف جعفری | دانشجوی مالک پایان نامه |
| سپیده بهلولی | مشاور |
| جواد یزدانی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| سولماز ملکی دیزج | مشاور |
| الهه دلیرعبدالهی نیا | همکار اصلی |
| مرضیه فتحی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر اثر نانوذرات سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین و کورکومین بر بیان ژن های کاسپاز 8 و 9 در سلولهای سرطان دهان (HN5)متن خبر در این مطالعه اثر نانوپارتیکل های سیلیکای متخلخل حاوی کورکومین و سیس پلاتین (SI-CUR-CIS)، نانوپارتیکل های سیلیکای متخلخل حاوی کورکومین (SI-CUR) و نانوپارتیکل های سیلیکای متخلخل حاوی سیس پلاتین (SI-CIS) بر میزان بیان ژنهای کاسپاز8 و 9 به روش Real Time RT-PCR انجام شد. برای این کار ابتدا سلولهای HN5 کشت داده شدند و سپس با نانوذرات تیمار شده و بعد از 48 ساعت استخراج RNA از سلولها صورت گرفت. سنتز cDNA با استفاده از کیت مخصوص انجام گرفت و سرانجام میزان بیان ژنهای کاسپاز 8 و 9 به روش Real Time PCR انجام شد. جهت آنالیز آماری داده ها از آزمون ANOVA و توسط نرم افزار گراف پد ورژن 17 انجام شده و سطح معنی داری p≤0.05 در نظر گرفته شد.
بیان ژن کاسپاز 9 در سلولهای HN5 که با SI-CUR-CIS و SI-CIS تریت شده بودند، افزایش معنی داری پیدا کرد (p<0.05) ولی این افزایش در مورد SI-CUR-CIS بسیار بیشتر بود، در مورد SI-CURاین افزایش معنی دار نبود (p>0.05). همچنین بیان ژن کاسپاز 8 در تماس با هر سه ترکیب بطور معنی داری تغییر نکرد (p>0.05).
نتیجه گیری: با توجه به افزایش بیان ژن کاسپاز 9 که نشان دهنده اثر کشندگی نانوذرات فوق از طریق مسیر داخلی آپوپتوز است ، SI-CUR-CIS می توانند گزینه ای مناسب بعنوان داروی |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
