ارزیابی Invitro عصارۀ هسته زردآلو (Prunus armeniaca L.) در مهار آنزیمهای استیل و بوتیریل کولین استراز
In vitro evaluation of acetyl and butyrylcholinesterase inhibitory activity of apricot (Prunus armeniaca L.) kernel extracts
مجریان: علیرضا استاد رحیمی , مینا سعیدی
خلاصه روش اجرا: زردآلوی شیرین از منطقه ایوند در آذربایجان شرقی جمع آوری شده سپس نام علمی آن توسط استاد گروه باغبانی دانشگاه تهران مورد تایید قرار خواهد گرفت. هسته های زردآلو تهیه شده در معرض هوا خشک شده، با آسیاب خرد شده و عصاره آبی و هیدروالکلی تهیه می شود. برای تهیه عصاره هیدروالکلی به روش ماسیراسیون سرد، مقدار مشخصی از گیاه به دکانتور منتقل شده و با حلال مورد نظر پوشانده می شود. بعد از 72 ساعت حلال از دکانتور خارج شده و حلال تازه جایگزین آن می شود. این عمل سه بار تکرار شده در نهایت سانتریفیوژ می شود تا ذرات گیاه رسوب کرده و از عصاره خارج شود. در مرحله بعد، عصاره بدست آمده در دمای محیط (زیر هود) حلال خارج شده و در انتها به وسیله دستگاه فریز درایر خشک و به پودر تبدیل می شود. برای تهیه عصاره آبی، روش جوشاندن مقدار مشخصی از پودر گیاه با مقدار مشخصی آب سرد در بشر ریخته و به مدت 10دقیقه می جوشد و پس از کاهش دما به دمای محیط، از صافی عبور داده می شود و مجددا عمل عصاره گیری با مقدار مشخص آب انجام می شود. ذرات گیاه باقیمانده در جوشانده حاصل توسط سانتریفیوژ جدا شده و در درجه حرارتی حدود 50 درجه سانتیگراد عصاره تا حجم 10 میلی لیتر با استفاده از دستگاه روتاری تغلیظ می شود و نمونه جهت تهیه پودر لئوفیلیزه می شود. غلظت های مورد نظر گیاه تهیه خواهد شد. بررسی اثر مهارکنندگی آنزیم های کولین استراز با استفاده از روش استاندارد ELLMAN صورت خواهد گرفت. در نهایت محاسبه IC50 توسط رسم منحنی لگاریتمی و محاسبه فرمول خط انجام خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 63782 |
| عنوان فارسی طرح | ارزیابی Invitro عصارۀ هسته زردآلو (Prunus armeniaca L.) در مهار آنزیمهای استیل و بوتیریل کولین استراز |
| عنوان لاتین طرح | In vitro evaluation of acetyl and butyrylcholinesterase inhibitory activity of apricot (Prunus armeniaca L.) kernel extracts |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مطالعات سلولی- مولکولی و ایمونولوژیک در زمینــه تولید واکسن |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | بیماریهای نورودژنراتیو مزمن مانند بیماری پارکینسون، بیماری هانتیگتون، بیماری آلزایمر وغیره در میان بسیاری از اختلالاتی است که به دلیل فقدان آزمون های خاص تشخیصی و درمان موثر، همواره ترس از ابتلای افراد به آن وجود دارد. سازمان جهانی بهداشت پیش بینی می کند که تا سال 2050 بیماریهای نورودژنراتیو به عنوان شایع ترین علت مرگ از سرطان پیشی بگیرد. بدلیل آمار بالا، شدت و روند مزمن این بیماری ها، و بار عظیم اقتصادی و روانی در افراد، جوامع و دولت ها تولید نیاز فوری درمان هرچه موثرتر بیماریهای نورودژنراتیو میباشد (2). در روند پاتوژنز بسیاری از بیماریهای نورودژنراتیو کاهش در غلظت گیرنده های کولین استراز یا کاهش در تولید میانجی عصبی استیل کولین رخ میدهد (3). با توجه به روند افزایشی شیوع بیماریهای نورودژنراتیو در بین سالمندان و مؤثر بودن داروهای مهارکننده آنزیم استیل کولین استراز در بهبود بیماری ها، یافتن داروهای جدید مهارکننده این آنزیم از اهمیت ویژه ای برخوردار است (3). آنزیم های کولین استراز دو آنزیم متفاوت متعلق به خانواده آلفا / بتا هیدرولاز ها هستند. این آنزیم ها بر اساس تفاوت سوبستراها، حساسیت در مقابل مهار کننده ها و رفتار در برابر سوبسترا به دو آنزیم شامل استیل کولین استراز یا کولین استراز حقیقی و بوتیریل کولین استراز یا پسودو کولین استراز یا کولین استراز کاذب تقسیم بندی می شوند (4). این دو آنزیم با وجود اینکه ژن کد کننده آنها بر روی دو کروموزوم متفاوت، شامل کروموزوم شماره 7 برای استیل کولین استراز و کروموزوم شماره 3 برای بوتیریل کولین استراز، قرار دارد دارای 65 درصد شباهت در توالی آمینو اسیدی هستند (4). این آنزیم ها توزیع بافتی متفاوتی دارند، استیل کولین استراز در مغز، غشای گلبول قرمز و عضله یافت شده و بوتیریل کولین استراز در کبد، روده، قلب، کلیه و ریه میزان فعالیت بالاتری دارد. کولین استرازها هر دو فعالیت پپتیداز و آمیداز داشته و در پاتوژنز آلزایمر نقش دارند. استیل کولین استراز باعث شکست پروتئین آمیلوئید از محل های غیر آمیلوئیدی شده در حالیکه بوتیریل کولین استراز قادر به تولید پروتئین بتا آمیلوئید و پخش پلاکهای آمیلوئیدی است (4). بوتیریل کولین استراز در رشد و تمایز نقش داشته و در جنین مهره داران دارای غلظت بالایی می باشد و همچنین دارای فعالیت توموروژنز می باشد (4،5). این آنزیم می تواند در غیاب استیل کولین استراز نوروترانسمیتر استیل کولین را غیر فعال نماید که این فعالیت وابسته به غلظت استیل کولین می باشد (7). نقش شناخته شده دیگر بوتیریل کولین استراز، فعالیت در سم زدایی داروها و سموم می باشد و این آنزیم داروها و سموم را قبل از رسیدن به استیل کولین استراز غیر فعال می کند(4). امروزه مهار کننده های استیل کولین استراز در درمان بیماریهایی از قبیل آلزایمر، عفونت های انگلی، گلوکوم، بیماری لویی بادی، هانتیگتون، مولتیپل اسکلروز، دمانس عروقی ساب کورتیکال، میاستنی گراویس و پارکینسون کاربرد دارد (4،7،8،9،10). همچنین امروزه با توجه به نقش تومورزایی بوتیریل کولین استراز در بدن، مهارکننده های بوتیریل کولین استراز به عنوان عامل کموتراپیک پیشنهاد شده اند (4). در طول سال های اخیر، اثرات دارویی منابع طبیعی و گیاهان از اهمیت ویژه ای برخوردار شده است (11). در این میان، دانه ها و مغزها بدلیل داشتن مواد مغذی مختلف از نظر تغذیه ای، صنعتی و دارویی از جایگاه ویژه ای برخوردار بوده اند (12). بسیاری از داروهای مهارکننده کولین استراز که امروزه جهت درمان بیماریهای نورودژنراتیو کاربرد دارند پایه گیاهی داشته و پس از بررسی های صورت گرفته بر روی این گیاهان، اثرات مهارکنندگی کولین استراز و خاصیت درمانی آنها مشخص شده که از آن جمله میتوان به داروی گالانتامین مشتق از گیاه گل حسرت با نام علمی Galanthus woronowi، داروی فیزوستیگمین مشتق از گیاه لوبیای کالابار با نام علمی Physostigma venenosum و huperzine A مشتق از نوعی خزه با نام علمی Huperzia serrata را نام برد (13). زرد آلو با نام علمی Prunus armeniaca یک گونه از خانواده گلسرخیان است. این میوه و هستۀ آن اثرات بیولوژیکی مختلفی مانند اثر محافظتی قلب، آنتی موتاتژیک، ضد میکروبی، آنتی اکسیدانی، مهار برخی آنزیم ها، ضد درد و ضد التهابی از خود نشان داده است (14). با وجود کشت گسترده ای زردآلو در بسیاری از نقاط جهان، در میان میوه ها از جمله مواردی است که بسیار کم مطالعه شده است (15). همچنین در مطالعه ای بر روی داروی طب سنتی چینیZhokumei-to که یکی از اجزای تشکیل دهنده آن زردآلو میباشد، اثر بهبوددهنده بر حافظه نشان داد (16). با توجه به اهمیت خواص بیولوژیکی زردآلو و کشت گستردۀ آن در کشور ایران به صورتیکه ایران دومین تولید کننده زردآلو پس از ترکیه در سطح جهان میباشد(14)، در این طرح بر آن شدیم، اثر مهار کنندگی آنزیم استیل و بوتیریل کولین استراز در عصارۀ هسته زردآلو (Prunus armeniaca L.) را بصورت برون تنی ارزیابی نماییم. تا از این طریق، برای مطالعات بیشتر درinvivo توصیه کرد. از آنجایی که شمال غرب ایران محل مناسبی برای کشت این میوه می باشد، بررسی های نیز در خصوص زردآلوی کشت شده در شمال غرب ایران خواهد بود. |
| اهداف اختصاصی | تعیین میزان اثر عصاره آبی و هیدروالکلی مغز هسته زردآلو بر مهار آنزیم استیل کولین استراز -تعیین میزان اثر عصاره آبی و هیدروالکلی مغز هسته زردآلو بر مهار آنزیم بوتیریل کولین استراز -مقایسه میزان اثر عصاره آبی و هیدروالکلی مغز هسته زردآلو بر مهار آنزیم استیل کولین استراز و آنزیم بوتیریل کولین استراز |
| چکیده انگلیسی طرح | The apricot will collect from the region of Ivand in East Azarbaijan and then its scientific name will be confirmed by the professor of the Department of Horticulture of the University of Tehran. Apricot kernels will dry by exposure air, then they will mill using a mortar and pestle and final aqueous and hydroalcoholic extracts will be produced. To prepare the hydroalcoholic extract by cold maceration, a certain amount of the plant is transferred to the Laboratory-decanter-funnel and is covered with the desired solvent. After 72 hours, the solvent is removed from the decanter and replaced by a new solvent. This operation is repeated three times, eventually centrifuged to dissolve the particles of the plant and remove the extract. In the next step, the solvent of the extract is removed at the room temperature (below the hood) and subsequently converted to a powder using a rotary evaporator under vacuum. For the preparation of aqueous extract, a certain amount of powder of the plant boiled with a certain amount of cold distilled water in a beaker for 10 minutes. After the temperature has been reduced to the room temperature, they will filter, and then each solid residue was re-extracted by a certain amount of cold distilled water. The residual plant particles are separated by centrifugation and in a thermal temperature of about 50 ° C, the extract is concentrated to a volume of 10 ml using a rotary evaporator under vacuum and the sample will freeze-dried to produce the powder. The desired concentrations of the plant will be prepared. The inhibitory effect of cholinesterase enzymes using the standard Ellman's method will investigate. Finally, calculating the IC50 will be done by plotting the logarithmic curve and calculating the line formula. |
| کلمات کلیدی | آزمون Ellman's: آزمایش معتبر جهت بررسی برون تنی مهار آنزیم های کولین استراز شامل استیل کولین استراز و بوتیریل کولین استراز فراورده هاي دارويي و گياهي |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| علیرضا استاد رحیمی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| یاسمن واحدی مزدآبادی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| محمد توشیح | همکار اصلی |
| مینا سعیدی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| الهه کریم پور رزکناری | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر ععصاره هسته زردآلوی شیرین و تلخ می تواند روی درمان آلزایمر و بیماری های دژنراتیو (تخریب کننده عصب) با مهار آنزیم مرتبط موثر باشد.متن خبر بیماری آلزایمر یا بیماری فراموشی، یک اختلال عملکرد مغزی است که سبب تخریب اعصاب در برخی مناطق مغز شده و تواناییهای ذهنی بیمار تحلیل میرود. آلزایمر از بیماری های شایع در دوران سالمندی است که می تواند زندگی فرد را به سمت نابودی سوق دهد. داروهای موجود نتوانسته این بیماری را به صورت کامل درمان کند. هسته زردآلو شیری و تلخ توانست یک آنزیم مهم که در روند ایجاد این بیماری ها نقش دارد را مهار کند که یک روش درمانی مهم برای درمان این بیماری است و همچنین اثرات محافظتی از مغز در برابر برخی سموم در سلول های مغزی نشان دادند که این اثرات در نوع تلخ بیشتر بود. آزمایشات بیشتری برای شناسایی ماده ای موثر ایجاد کننده این اثرات مورد نیاز است. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
