مهار همزمان مولکول های CD73 و CD47 در سلول های سرطانی با نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA.
Concurrent inhibition of CD73 and CD47 molecules with siRNA loaded nanoparticles in cancer cells
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق
خلاصه روش اجرا: این مطالعه دو فاز دارد: ۱.تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA: ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. کیتوزان لاکتات پتانسیل بالایی برای کپسوله کردن siRNA و حفاظت از آن در برابر تخریب سرمی دارد. تشکیل نانو ذرات کیتوزان لاکتات در اثر تعاملات یونی بین کیتوزان لاکتات و siRNA حل شده در سدیم تری پلی فسفات ( siRNA/TPP ) صورت می گیرد. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2% آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. (in vitro) :مطالعه اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) و B16F10 ( ملانوما ) در این مطالعه استفاده خواهد شد که مطالعات گذشته تولید CD73 و CD47توسط آن ها را اثبات کرده است و میزان تولید آنها نیز در هر رده سلولی متفاوت است. این رده های سلولی در محیط RPMI1640حاوی 10%fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند.پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA ضدCD73 وضدCD47 را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر درمان های ترکیبی و تکی بر روی بیان ژن CD73 و CD47 در کشت سلول ها توسط تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود.تاثیر نانوذرات حاویsiRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. همچنین، تاثیر درمان ترکیبی بر روی جلوگیری از بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهارکننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز نیز توسط تکنیک Real-time PCR بررسی می گردد
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 63767 |
| عنوان فارسی طرح | مهار همزمان مولکول های CD73 و CD47 در سلول های سرطانی با نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA. |
| عنوان لاتین طرح | Concurrent inhibition of CD73 and CD47 molecules with siRNA loaded nanoparticles in cancer cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | CD73 یک مولکول مهم در گسترش سلول های سرطانی، مهاجرت و تهاجم در in vitro، آنژیوژنز تومور و فرار از ایمنی تومور در بدن است.همچنین مولکول CD47 به طور گسترده ای در بسیاری از سلول های توموری بیان شده است. CD47 در طیف وسیعی از پروسه های سلولی از جمله آپوپتوز، تکثیر، چسبندگی و مهاجرت دخیل است. به نظر می رسد مهاجرت سلولی به وسیله چسبندگی و فعال سازی CD47 تحریک می شود.بنابراین مسدود کردن عملکردCD73 وcd47 با استفاده ازمولکولهایsiRNA منجر به کاهش چشمگیرمهاجرت ومتاستاز به ارگان های اصلی می شود.در این مطالعه ما برای اولین بار با استفاده از درمان ترکیبی متشکل از نانوذرات بارگیری شده با RNAهای مداخله گر ضد CD73 وضد CD47 به دنبال مهار رشد وتکثیر وجلوگیری ازآنژیوژنز درسلول های توموری خواهیم بود. |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی درمان ترکیبی بر روی بقای سلول های سرطانی با روش MTT -مطالعه in vitro اثر بخشی درمان ترکیبی بر روی بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهار کننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز سلول های سرطانی با روش Real-time PCR |
| چکیده انگلیسی طرح | CD73 is an important molecule in the development of cancer cells, migration and invasion in vitro, angiogenesis of the tumor and escape from tumor immunity in the body. Also, the CD47 molecule is widely expressed in many tumor cells. CD47 is involved in a wide range of cellular processes, including apoptosis, proliferation, adhesion and migration. Cellular migration seems to be stimulated by CD47 binding and activation. Thus, blockade of the CD73 and CD47 function by using siRNA molecules leads to a significant reduction in migration and metastasis to the main organs. In this study, we will use a combination of treatments composed of nanoparticles loaded with anti-CD73 siRNA and anti-CD47 siRNA, to inhibit growth, and angiogenesis and proliferation of tumor cell lines . |
| کلمات کلیدی | CD73:این مولکول همچنین به عنوانecto-5'-nucleotidase شناخته می شود وآنزیمی است که در انسان توسط ژن NT5E کد گذاری می شود. CD73 معمولا برای تبدیل AMP به آدنوزین استفاده می شود. این آنزیم شامل یک دایمراز 2 زیرواحد یکسان 70کیلودالتونی است که با پیوند گلیکوزیل فسفاتیدیل اینوزیتول به بخش خارجی غشای پلاسمایی متصل می شود. این آنزیم به عنوان مارکر تمایز لنفوسیتی استفاده می شود. CD47: یک پروتئین غشایی است که همچنین به عنوان integrin-associated protein (IAP) شناخته شده ودر انسان توسط ژن CD47 کدگذاری می شود.این مولکول متعلق به ابرخانواده ایمونوگلوبولین است و به لیگاندهایthrombospondin-1 (TSP-1) و signal-regulatory protein alpha (SIRPα) متصل می شود. CD47 در طیف وسیعی از پروسه های سلولی از جمله آپوپتوز، تکثیر، چسبندگی و مهاجرت دخیل است. علاوه بر این، نقش کلیدی در پاسخ های ایمنی و آنژیوژنیک دارد. SIRPαα: Signal regulatory protein αیا CD172a/ Src homology 2 domain-containing phosphatase substrate-1 یک پروتئین غشایی تنظیمی است که عمدتا توسط سلول های میلوئیدی،سلول های بنیادی ونورون ها بیان می شود.این مولکول به عنوان یک رسپتور مهاری عمل کرده وبا CD47 برهمکنش می کند. SIRPα در سیگنالینگ سلول به عنوان یک تنظیم کننده منفیPI3K وMAPK عمل می کند. SiRNA: RNA مداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق گردیده و در گیاهان با اصطلاح PTGS عنوان می شود .در تکنولوژیRNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجود می آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. |
| ذینفعان نتایج طرح | درمان سرطان به دلیل قرار گرفتین سرطان در زمره بیماری هایی که هزینه فراوانی را برای جامعه و بیماران به دنبال داشته و سالانه باعث خروج مقادیر فراوان ارز کشور برای تهیه درمان سرطان می شود. بنابراین پیدا کردن روشی برای درمان این بیماری می تواند منافع بسیاری برای بیماران، جامعه داشته نقش به سزایی در حفظ تمامیت عرضی دارد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| سپیده ایزدی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| بهزاد برادران | مشاور |
| هادی حسن نیا | مشاور |
| قاسم قلم فرسا | مشاور |
| آزاد اصلانی پور | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر مهار همزمان مولکول های CD73 و CD47 در سلول های سرطانی باعث سرکوب رشد سرطان می گردد.متن خبر از مهمترین فاکتورهای دخیل در رشد و گسترش سرطان که بیان بسیار بالایی در ریزمحیط توموری دارند، فاکتورهای CD73 و CD47 می باشند. در این مطالعه بعد از بررسی فیزیکوشیمیایی نانوذرات و مشخص نمودن اندازه، پتانسیل زتا، مورفولوژی و پایداری آنها، تاثیر نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA بر ضد CD73 و CD47 در رده های سلولی 4T1 و CT26 ارزیابی گردید. نتایج این مطالعه نشان داد که نانو.ذرات تولید شده اندازه ای در حدود ~110 nm ، PDI < 0.2 و پتانسیل زتا 18 mV دارند. همچنین مورفولوژی آنها کروی ، به همراه جذب زیاد siRNA و پایداری سرمی بالا و سمیت کم بودند. مهار همزمان مولکول های CD73 و CD47 با کاهش بقای سلول های سرطانی همراه بود. علاوه بر این مشخص شد که ژن های درگیر در رشد تومور کاهش معناداری داشتند.یافته های این مطالعه نشان می دهد که درمان ترکیبی سرطان با استفاده از نانوذرات بارگیری شده با مولکول های siRNA بر ضد مولکول های CD73 و CD47 می تواند روش موثری برای درمان سرطان باشد. البته تایید این روش نیازمند انجام مطالعات تکمیلی بر روی مدل های حیوانی و بیماران سرطانی می باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
