بررسی روند القایی نانوذره نقره بر تمایز کاردیومیوژنیک سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت در محیط برون تنی

مجریان: محمد برزگر جلالی , راحله فرحزادی

خلاصه روش اجرا: در این مطالعه سلول¬های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان رت به روش گرادیان غلظتی-فایکول جداسازی می¬شوند، پس از پاساژ و تکثیر سلولی، با استفاده از فلوسایتومتری شاخص¬های سطحی CD44 و CD90 به عنوان شاخص¬های مثبت و CD31 و CD34 به عنوان شاخص¬های منفی سلول¬های بنیادی مزانشیمی شناسایی می¬شوند. برای اثبات مزانشیم بودن سلول¬های خالص شده، علاوه بر قابلیت چسبندگی و بررسی مارکرهای سطح سلولی قید شده، این سلول¬های به سلول¬های استخوان¬ساز و چربی¬ساز نیز تمایز داده می¬شوند که برای القاء و اثبات تمایز به سلول¬های چربی از محیط کشت آدیپوژنیک و رنگ¬آمیزی Oil Red و برای القاء و اثبات تمایز به سلول¬های استخوانی از محیط کشت استئوژنیک و رنگ¬آمیزی Alizarin Red استفاده خواهد شد. در ادامه، غلظت مناسب از نانو ذره نقره جهت تیمار با سلول¬های بنیادی مزانشیمی به روش MTT ارزیابی می¬شود. جهت تأیید تمایز سلول¬های بنیادی مزانشیمی به سلول¬های کاردیومیوسیت، برخی نشانگرهای سطح سلولی از قبیل اکتینین و دسمین (بررسی ساختاربه روش ایمنوسیتوشیمی) بررسی خواهند شد. سلول¬ها در مدت زمان و غلظت مشخص به دست آمده به روش MTT، در حضور محیط تمایزی کاردیومیوژنیک با نانوذره نقره تیمار خواهند شد. پس از سپری شدن مدت زمان تیمار سلولی، بخشی از سلول¬ها جهت انجام Real time-PCR و بخشی دیگر جهت انجام وسترن بلاتینگ جمع¬آوری خواهند شد. در ادامه جهت بررسی تأثیر نانوذره نقره بر پتانسیل کاردیومیوژنیک سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان رت، بررسی بیان ژن و پروتئین C-TnI انجام خواهد شد. با توجه به نقش بسیار مهم سلول¬های بنیادی مزانشیمی در سلول درمانی بیماران قلبی، به دست آوردن سلول¬هایی با قدرت تمایز بیشتر، در این پژوهش هدف بررسی تأثیر و قابلیت نانوذره نقره بر پتانسیل کاردیومیوژنیک سلول¬های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت در محیط برون تنی می¬باشد.