ارزیابی حضور توالی های CRISPR-Like و ژن spoT در هلیکوباکتر پیلوری و ارتباط آنها با مقاومت آنتی بیوتیکی و تشکیل بیوفیلم
Evaluation of CRISPR-Like sequences and spoT gene among Helicobacter pylori isolates and determination of their association with antibiotic resistance and biofilm formation
مجریان: حسین صمدی کفیل , رضا قوطاسلو
خلاصه روش اجرا: گسترش مقاومت های آنتی بیوتیکی و ظهور عفونت های میکروبی جدید ضرورت مطالعات جهت شناسایی روش های نوین درمانی و کنترل را افزایش داده است. لذا مطالعه حاضر بر آن است تا با استفاده از ابزارهای نوین ژنتیک و ملکولی راهی برای مهار بیماریزایی و ایجاد عفونت توسط گونه ای از باکتری ها بنام هلیکوباکتر پیلوری بیابد. لذا این مطالعه به ارزیابی نقش لوکوس ژنتیکی CRISPR-Likeو ژنspoT در مقاومت آنتی بیوتیکی و بیوفیلم می پردازد. همچنین با هدف قرار دادن ناحیه ژنی spoTبا استفاده از تکنولوژی PNA (پپتید نوکلئیک اسید) برآن هستیم تا بیان این ژن را بطور کامل مهار نموده و بتوانیم نقش spoTدر بیماریزایی هلیکوباکتر پیلوری را ارزیابی نماییم و امکان استفاده از این ناحیه جهت کنترل عفونت هلیکوباکتر را در آینده ارزیابی نماییم. لذا ایزوله های هلیکوباکتر پیلوری از بیماران جمع آوری و از نظر مقاومت آنتی بیوتیکی و تشکیل بیوفیلم و حضور لوکوس هایCRISPR-Like و ژن spoTارزیابی و ارتباطشان با بروز مقاومت و بیوفیلم ارزیابی خواهد شد. جهت ارزیابی نقش ژن spoT توالی PNA اختصاصی برای نواحی پروموتری طراحی و سنتز می گردند سپس یک پپتید کریر طراحی و برای انتقال داخل سلولی استفاده می گردد روش های انتقال داخل سلولی برای شناسایی بهترین مکانیسم دلیوری داخل سلولی ارزیابی می گردد و تاثیر PNA بر روی تشکیل بیوفیلم میکروبی و مهار رشد میکروبی و مقاومت آنتی بیوتیکی ارزیابی می گردد تا تاثیر مهار این ژن بر مقاومت و تشکیل بیوفیلم مشخص گردد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 63656 |
| عنوان فارسی طرح | ارزیابی حضور توالی های CRISPR-Like و ژن spoT در هلیکوباکتر پیلوری و ارتباط آنها با مقاومت آنتی بیوتیکی و تشکیل بیوفیلم |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of CRISPR-Like sequences and spoT gene among Helicobacter pylori isolates and determination of their association with antibiotic resistance and biofilm formation |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 24 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | مطالعه حاضر به ارزیابی نقش حضورCRISPR-Likeو ژن spoTدر مقاومت آنتی بیوتیکی و بیوفیلم در هلیکوباکتر پیلوری های جدا شده از بیوپسی معده می پردازد و با هدف قرار دادن ژن spoT با استفاده از PNAاثر آن را بهعنوان یک مهار کننده برای کنترل عفونت هلیکوباکتر پیلوری ارزیابی می کند تا به عنوان ابزاری نوین در طی پروسه های درمانی در آینده کاربرد داشته باشند. |
| اهداف اختصاصی | جداسازی و تعیین هویت هلیکوباکتر پیلوری از بیوپسی های معده و تعیین الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی و بررسی تشکیل بیوفیلم در ایزوله ها -بررسی حضور لوکوس ژنیCRISPR-Like و ژن spoT در ایزوله ها و تعیین ارتباط آنها با مقاومت آنتی بیوتیکی و تشکیل بیوفیلم -طراحی و سنتز پپتید نوکلئیک اسید علیه ژن spoT و تاثیر آن در بیان ژن spoT و تشکیل بیوفیلم و مقاومت آنتی بیوتیکی هلیکوباکتر پیلوری |
| چکیده انگلیسی طرح | Misuse of antibiotics has resulted in multidrug resistance and subsequently failure in treatment. Another reason of antibiotic resistance is biofilm formation. Several genes are involved in this process such as spoT, cagE and luxS. CRISPR associated with cas proteins are acquired immune system in bacteria. In Helicobacter pylori CRISPR-like sequences has been recognized by PCR. These sequences are located on vlpC gene and mutation of this gene is associated with the resistance of H. pylori to metronidazole. In present study we are going to evaluate role of CRISPR-like and spoT gene in antibiotic resistance and biofilm formation in H. pylori isolated from stomach biopsies and also with targeting spoT gene using specific PNA evaluate its impact as a inhibitor for controlling H. pylori infection. |
| کلمات کلیدی | هلیکوباکتر پیلوری:هلیکوباکترپیلوری یک باسیل گرم منفی مارپیچی شکل و متحرک است. :Peptid nucleic acid (PNA)این مولکول کایمری از اسیدنوکلئیک و پپتید است و به همین علت تحت عنوان پپتید نوکلئیک اسید نامیده میشود، ازلحاظ ساختاری شبیه نوکلئیک اسید و ازلحاظ خواص شیمیائی شبیه پروتئین میباشد. : Carrier peptide هنگامیکه پپتید نوکلئیک اسید همراه با cell-penetrating peptide کنژوگه شود، فعالیت آنتی سنسی و نفوذ PNA افزایش پیدا میکند. آنتی سنس: به رشته DNA که بهعنوان الگو برای سنتز RNA قرارمیگیرد، رشته آنتی سنس (رشته غیرکدکننده) و به رشته مقابل آن در مولکول DNA، رشته سنس (رشته کد کننده)گفته میشود. بیوفیلم (Biofilm): بیوفیلم ها اجتماعات باکتریایی هستند که به سطوح زنده یا غیرزنده متصل میشوند و در مقاومت باکتریها به شرایط سخت محیطی بسیار مؤثر میباشند. spoT: ژنی است که با تنظیم بیان پمپ افلاکس در هلیکوباکتر پیلوری در تشکیل بیوفیلم و مقاومت چند دارویی نقش مهمی دارد. سیستم CRISPR\Cas: سیستم دستجات منظم متقاطع کوتاه پالیندرومی تکراری (CRISPR; Clustered Regularly interspaced Short Palindromic Repeats) همراه با پروتئین¬های مرتبط با CRISPR (Cas; CRISPR-associated proteins)، سیستم ایمنی اکتسابی یوباکتری¬ها و آرکه¬آ باکتری¬هاست. این سیستم، ارگانیسم¬ها را در برابر DNAهای خارجی بالقوه خطرناک مانند عناصر ترانسپوزونی، فاژها و پلاسمیدها مصون می¬دارد. |
| ذینفعان نتایج طرح | باتوجه به موضوع طرح نتایج این تحقیق میتواند به عنوان امیدی برای مهارعفونتهای این باکتری بوده ومورد استفاده داروسازان و پزشکان قرارگیرد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حسین صمدی کفیل | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| رضا قوطاسلو | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| محمد آهنگرزاده رضایی | مشاور |
| طاهره پیرزاده | مشاور |
| جاوید صادقی | مشاور |
| سید یعقوب مودب | همکار اصلی |
| لیلا یوسفی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| محمد حسین صومی | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر توالی های مشابه کریسپر در هلیکوباکتر پیلوری در مقاومت آنتی بیوتیکی آن ها نقش داشتند.متن خبر هلیکوباکتر پیلوری یک میکروارگانیسم گرم منفی است که در معده انسان کلونیزه می شود. این باکتری بیماریهای گوناگونی از جمله گاستریت، زخم های معده، لنفومای بافت لنفوئیدی مرتبط با مخاط و سرطان در مخاط معده ای را ایجاد می کند. سرطان معده سرطان شایعی است که منجر به مرگ می شود. بنابراین، حذف هلیکوباکتر پیلوری ضروری است. با توجه به اهمیت حذف هلیکوباکتر برای پیشگیری و درمان سرطان معده، توسعه روش های نوین درمانی بسیار مهم می باشد که این مطالعه بر همین اساس توسعه یافته است. یکی از مهمترین فاکتورها برای مقاومت دارویی ژن spoT است که به طور موثری در تشکیل بیوفیلم دخالت دارد. اخیرا" کلاسترهایی تحت عنوان CRISPR-cas شناسایی شده اند که در کنترل پاتوژنز نقش دارند. ابزارهای ژنتیکی بر اساس تکنولوژی کریسپر در حال حاضر محبوبترین تکنولوژی برای دستکاری بیان ژن و اصلاح ژنوم هستند. بنابراین، در این مطالعه،۳۶ ایزوله هلیکوباکتر پیلوری برای حضور ژن spoT و توالی های CRISPR-likeتوسط روش PCR و ارتباطشان با مقاومت آنتی بیوتیکی و تشکیل بیوفیلم مورد مطالعه قرار گرفتند. تولید بیوفیلم و مقاومت آنتی بیوتیکی هلیکوباکتر پیلوری به نحو موثر کاهش و نتایج حاضر ژن هدف عالی برای درمان این عفونت معرفی نمود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
