بررسی اثرات فورسکولین و متفورمین به تنهایی و توأمان بر پارامترهای اسپرم ، هورمونهای جنسی و تغییرات بافتی در بیضه موش‌های صحرایی مدل دیابتیک نوع 2

مجریان: داریوش محمدنژاد , حمید طایفی نصرآبادی

خلاصه روش اجرا: خلاصه روش اجرا: مطالعه حاضر بر روی 50 سر موش‌های صحرایی (رت) با وزن تقریبی ۲۰۰ تا ۲۵۰ گرم انجام خواهد شد. موش‌های صحرایی به پنج (5) گروه تصادفی تقسیم شده و در هر گروه 10 موش مورد آزمایش قرار می گیرند که به شرح زیر می باشد: گروه ۱- گروه شاهد اول که فقط از آب و غذا با شرایط استاندارد همچون سایر گروه ها استفاده خواهند کرد. گروه 2- گروه شاهد دیابتیک (که برای دیابتی شدن ابتدا رژیم پرچرب و سپس دوز پایین داروی استرپتوزوتوسین (Streptozotocin) به میزانmg/kg 3۵ بصورت داخل صفاقی را دریافت می کنند. [رفرنس دوز داروها] گروه 3- گروه دیابتیک که متفورمین به میزان mg/kg 300 به روش گاواژ به مدت 8 هفته را دریافت خواهند کرد [رفرنس دوز داروها](1). گروه 4- گروه دیابتیک که فورسکولین به میزان mg/kg ۱۰۰ به روش گاواژ به مدت 8 هفته را دریافت خواهند کرد [رفرنس دوز داروها](2). گروه 5- گروه دیابتیک که بصورت توأمان ، متفورمین و فورسکولین را به ترتیب به میزان mg/kg 300 و mg/kg 100 به روش گاواژ به مدت 8 هفته دریافت خواهند کرد. برای دیابتی کردن و ایجاد مدل در موشهای گروههای دیابتی از رژیم پر چرب و تزریق داروی استرپتوزوتوسین به روش زیر انجام می شود. رژیم پرچرب به مدت 2 ماه به گروههای حیوانی داده شده و پس از ایجاد مقاومت انسولینی در حیوانات ، از داروی استرپتوزوتوسین با دوز mg/kg 35 جهت تخریب نسبی سلولهای بتا استفاده خواهد شد(3). پس از اتمام دوره درمان در پایان هفته هشتم به منظور بی هوش کردن موش‌های صحرایی از تزریق ترکیب mg/kg 50 داروی کتامین و mg/kg 10 داروی زایلازین (xylazine) به ازای هر رت استفاده خواهد شد. سپس از قلب حیوانات به مقدار ۵-۳ سی سی خون جهت اندازه گیری فاکتور های بیوشیمیایی از قبیل قند ، هورمون تستوسترون و هورمون تحریک کننده فولیکول (FSH) خون گیری می شود. سپس در شرایط استریل با ایجاد شکافی در قسمت تحتانی شکم بیضه های راست و چپ به همراه اپی دیدیم خارج می شوند. پس از وزن کردن بیضه ها، بیضه چپ بعد فیکساسیون ، به منظور بررسی ساختمان بافت شناسی ، مراحل پاساژ بافتی را جهت میکروسکوپ الکترونی (TEM) و نوری (H&E) را طی خواهد کرد و از بیضه راست به منظور بررسی بیان ژن های Bax و Bcl2 به روش تکنیک Real-Time PCR استفاده خواهد شد. همچنین از اپی دیدیم رت ها به منظور اسپرم گیری و بررسی پارامترهای اسپرم استفاده خواهد شد.