مطالعه آزمایشگاهی تاثیر سرم دیابتی نوع 2 بر بیان ژن های درگیر در ترشح اگزوزوم ها و رگزایی در سلول های بنیادی مزانشیم مغز استخوان انسان
The In Vitro Effect of Type II Diabetic Serum on the Expression of Genes Involved in Exosomes Secretion and Angiogenesis in Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells
مجریان: رضا رهبرقاضی , ملک سلیمانی
خلاصه روش اجرا: نمونه سرم دیابتی و سالم از افراد دیابتی نوع 2 و سالم (در یک محدوده سنی) از بیمارستان امام رضا(ع) تبریز تهیه خواهد شد سپس سلول های بنیادی مزانشیم به مدت هفت روز با سرم های مربوطه مجاور میگردد. فرم رضایت نامه از همه افراد دهنده سرم گرفته می شود 1. طراحی آزمایش : پس از تهیه سرم دیابتی و سالم از افراد دیابتی 2 و سالم سلول های بنیادی مزانشیم مغز استخوان انسان به مدت 7 روز با سرم دیابتی در آزمایشگاه کشت سلولی مرکز تحقیقات سلول های بنیادی تبریز کشت داده می شوند و همزمان گروه شاهد سرم سالم را دریافت خواهد نمود. هر گروه سرم 10% دریافت می کند و محیط کشت هر سه روز یکبار تعویض می گردد و دوباره مخلوط سرم10% و محیط کشت اضافه می گردد برای مطالعه تغییرات ناشی از اثر سرم فرد دیابتی بر روی ترشح اگزوزوم ها تست های زیر انجام می گیرد: 1. بررسی میزان بیان ژن های درگیر در ترشح اگزوزوم های مشتق شده از سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان انسان(Rab27a, Rab27b, Rab8) با استفاده از تکنیک Real Time PCR 2. بررسی میزان بیان ژن های درگیر در آنژیوژنز ژن:VEGF و VEGFR2 با استفاده از تست Real Time-PCR 3. بررسی تغییرات فنوتیپی داخل سلول: با استفاده از تست های زیر این تغییرات فنوتاپی بررسی می شوند: A. میکروسکوپ الکترونی: برای سنجش ساختار و اندازه و مورفولوژی MVB ها ا استفاده از میکروسکوپ الکترونی استفاده خواهد شد B. رنگ آمیزی ایمینوفلوئورسنس: برای بررسی نحوه ی پراکندگی کمپارتمان های حاوی CD63 در داخل سلول رنگ آمیزی ایمینوفلوروسنس انجام می گیرد C. فلوسایتومتری: نسبت تجمع CD63 داخل سلولی به سطح سلول با فلوسایتومتری سنجیده می شود 4. استخراج اگزوزوم ها(Exosome Isolation): برای استخراج اگزوزوم از اولتراسانترویفوژ و کیت EXOquick استفاده خواهد شد 5. برای تایید اگزوزوم ها از دو تکنیک زیر استفاده خواهد شد: A. فلوسایتومتری B . میکروسکوپ الکترونی 6. بررسی میزان اگزوزوم های ترشح شده: از تکنیک های زیر استفاده خواهد شد A. وسترن بلات B. بررسی فعالیت آنزیم استیل کولین استراز 7. بررسی توان زیستی: از دو روش تریپان بلو و MTT استفاده خواهد شد
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 62834 |
| عنوان فارسی طرح | مطالعه آزمایشگاهی تاثیر سرم دیابتی نوع 2 بر بیان ژن های درگیر در ترشح اگزوزوم ها و رگزایی در سلول های بنیادی مزانشیم مغز استخوان انسان |
| عنوان لاتین طرح | The In Vitro Effect of Type II Diabetic Serum on the Expression of Genes Involved in Exosomes Secretion and Angiogenesis in Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 2 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | دیابت نوع 2 شایع ترین نوع دیابت و زخم های دیابتی از عوارض دیابت نوع 2 است و تا کنون درمان موثری و قطعی برای بهبودی زخم ها پیدا نشده است. و با در نظر گرفتن نقش سلول های بنیادی مزانشیمی در کنترل آنژیوژنز و میزان شیوع این بیماری در دنیا و زخم های پیشرونده در بیماران دیابتی مطالعه مکانیسم های عدم آنژیوژنز و یافتن درمان های جایگزین و یا اضافی ضروری به نظر می رسد آنژیوژنز یک فراینده پیچیده ای است و عوامل مختلفی در کنترل آن نقش دارند می توان با شناسایی تغییرات ایجاد شده در رابطه با MSCs افراد دیابتی به مکانیسم عدم بهبودی زخم ها و عدم آنژیوژنز در این افراد پی برد |
| اهداف اختصاصی | 1). بررسی تاثیر سرم دیابتی نوع 2 بر بیان ژن های درگیر در ترشح اگزوزوم ها -2). بررسی تاثیر سرم دیابتی نوع 2 بر بیان ژن های درگیر در آنژیوژنز -3) . مطالعه تغییرات فنوتیپی داخل سلول اگزوزوم ها -4). جداسازی و شناسایی اگزوزوم ها -). ارزیابی میزان اگزوزوم های ترشح شده |
| چکیده انگلیسی طرح | |
| کلمات کلیدی | اگزوزوم: نانوذره های بیولوژیکی که از انواع سلول ها ترشح می شوند و در ارتباط سلول با انواع دیگر نقش ایفاء می کنند. رگ زایی: ایجاد عروق جدید از بستر عروقی پایه ایی قبلی برای افزایش میزان خون رسانی به بافت ها |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران مبتلا به بیماری های دیابتی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| رضا رهبرقاضی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| جعفر رضایی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| ملک سلیمانی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر شرایط دیابتی بر توان ترشحی سلول های بنیادی تاثیر می گذارد.متن خبر در این مطالعه مشخص شد که تیمار سلول های بنیادی مزانشیمی با سرم های دیابتی موجب تغییر توان ترشحی ویزیکول های این سلول ها می شود. شرایط دیابتی می تواند بیان برخی از ژن ها را در سلول های بنیادی افزایش داده و حال آنکه بیان برخی دیگر از ژن ها را دچار وقفه کند. به طور کلی می توان عنوان کرد که شرایط دیابتی می تواند فعالیت ترشحی سلول های بنیادی را تحت تاثیر قرار دهد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر تیمار سلول های بنیادی مزانشیمی با سرم های دیابتی موجب افزایش توان ترشحی اگزوزومی می گردد.متن خبر در این مطالعه نقش سرم های دیابتی بر روی قدرت ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بعد از 7 روز مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول ها با انواع سرم های دیابتی انسانی مجاور شدند. میزان بیان ژن های دخیل در سنتز و تولید اگزوزوم ها از طریق real-time PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. میزان بیان ژن های CD63, Alix, Rab27a, Rab27b, Rab8b به صورت معنی داری در حضور سرم های دیابتی افزایش یافت. سلول ها میزان بالاتری از پروتئین CD63 و استیل کولین استراز بیشتری تولید کردند. بررسی میکروسکوب الکترونی حاکی از وجود قطره های چربی و آسیب سلولی را نشان داد. می توان گفت که سرم های دیابتی باعث آسیب سلولی و افزایش میزان ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی می گردد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر تیمار سلول های بنیادی مزانشیمی با سرم های دیابتی موجب افزایش توان ترشحی اگزوزوم ها می گرددمتن خبر در این مطالعه نقش سرم های دیابتی بر روی قدرت ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بعد از 7 روز مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول ها با انواع سرم های دیابتی انسانی مجاور شدند. میزان بیان ژن های دخیل در سنتز و تولید اگزوزوم ها از طریق real-time PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. میزان بیان ژن های CD63, Alix, Rab27a, Rab27b, Rab8b به صورت معنی داری در حضور سرم های دیابتی افزایش یافت. سلول ها میزان بالاتری از پروتئین CD63 و استیل کولین استراز بیشتری تولید کردند. بررسی میکروسکوب الکترونی حاکی از وجود قطره های چربی و آسیب سلولی را نشان داد. می توان گفت که سرم های دیابتی باعث آسیب سلولی و افزایش میزان ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی می گردد. |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر تیمار سلول های بنیادی مزانشیمی با سرم های دیابتی موجب افزایش توان ترشحی اگزوزوم ها می گرددمتن خبر در این مطالعه نقش سرم های دیابتی بر روی قدرت ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی بعد از 7 روز مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول ها با انواع سرم های دیابتی انسانی مجاور شدند. میزان بیان ژن های دخیل در سنتز و تولید اگزوزوم ها از طریق real-time PCR مورد ارزیابی قرار گرفت. میزان بیان ژن های CD63, Alix, Rab27a, Rab27b, Rab8b به صورت معنی داری در حضور سرم های دیابتی افزایش یافت. سلول ها میزان بالاتری از پروتئین CD63 و استیل کولین استراز بیشتری تولید کردند. بررسی میکروسکوب الکترونی حاکی از وجود قطره های چربی و آسیب سلولی را نشان داد. می توان گفت که سرم های دیابتی باعث آسیب سلولی و افزایش میزان ترشح اگزوزوم ها در سلول های بنیادی مزانشیمی می گردد. |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
