بررسی بیان microRNA(miR)-424 و PD-L1 در بافت و رده سلولی سرطان سینه و بررسی اثر جایگزینی miR-424 در مهار بیانPD-L1 ، رشد و مهاجرت سلولی و القاء آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه
Evaluation of expression of microRNA(miR)-424 and PD-L1 in breast cancer tissue and cell line , evaluating the effect of miR-424 replacement on inhibition of PD-L1 expression, cell growth, cell migration and induction of apoptosis in breast cancer cell line
مجریان: بهزاد برادران
خلاصه روش اجرا: 1) نمونهگیری از بیمار که طی آن بافت های سرطانی از بیماران مبتلا به سرطان سینه توسط جراح متخصص از بیمار جدا و بلافاصله به نیتروژن مایع جهت نگهداری برای آزمایشات آتی منتقل خواهد شد. 2) انتخاب بیماران مبتلا به سرطان سینه با توجه به اطلاعات پرونده پاتولوژی 3) استخراج RNAی کل (total RNA) از 40 بافت انسانی تومور بدخیم سینه و بافت نرمال مجاور تومور با استفاده از کیت استخراج RNA 4) سنتز cDNA با استفاده از کیت سنتز cDNA 5) طراحی پرایمر اختصاصی miR-424 و PD-L1 6) مقایسه سطح بیان miR-424 وPD-L1 بین بافتهای توموری سینه و سالم مجاور توموری از طریق qRT- PCR 7) آنالیز آماری دادههای مربوط به qRT-PCR 8) کشت سلولهای سرطانی سینه 9) مقایسه سطح بیان miR-424 و PD-L1 در ردههای سلولی سرطان سینه از طریق qRT-PCR با هدف یافتن رده سلولی دارای پایین ترین سطح بیان miR-424 و بالاترین سطح بیان PD-L1 10) ترانسفکت miR-424-mimic در رده سلولی سرطان سینهی دارای پایینترین سطح بیان miR-424 با استفاده از transfection reagent 11) ارزیابی میزان رشد در سلولهای سرطانی سینه ترانسفکت شده با miR-424-mimic در مقایسه با گروه کنترل (سلولهای سرطانی ترانسفکت نشده) با استفاده از تست MTT 12) ارزیابی مهاجرت سلولی در سلولهای سرطانی سینه ترانسفکت شده با miR-424-mimic در مقایسه با گروه کنترل با استفاده از تست خراش (scratch test/wound healing assay) 13) ارزیابی آپوپتوز سلولی در سلولهای سرطانی سینه ترانسفکت شده با miR-424-mimic در مقایسه با گروه کنترل با استفاده از تست Annexin V 14) اندازهگیری و مقایسه سطح mRNA PD-L1 به عنوان هدف انکوژن پاییندست برای miR-424 بین سلولهای سرطانی سینه ترانسفکت شده با miR-424-mimic و گروه کنترل از طریق qRT-PCR 15) آنالیز آماری دادههای به دست آمده
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 62775 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی بیان microRNA(miR)-424 و PD-L1 در بافت و رده سلولی سرطان سینه و بررسی اثر جایگزینی miR-424 در مهار بیانPD-L1 ، رشد و مهاجرت سلولی و القاء آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of expression of microRNA(miR)-424 and PD-L1 in breast cancer tissue and cell line , evaluating the effect of miR-424 replacement on inhibition of PD-L1 expression, cell growth, cell migration and induction of apoptosis in breast cancer cell line |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مطالعات سلولی- مولکولی و ایمونولوژیک در زمینــه تولید واکسن |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 16 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | بر اساس اطلاعات بدست آمده از مقالات و سایر منابع، در این مطالعه برای اولین بار نقش و اثرات تومورساپرسیو miR-424 از طریق بررسی بیان یکی از اهداف مولکولی پایین دست آن به نام PD-L1 در رده سلولی سرطان سینه بررسی می شود تا مکانیزم مولکولی عملکرد این miR در سرطان سینه مشخص تر گردد. |
| اهداف اختصاصی | بررسی تغییرات بیان miR-424 و PD-L1 در بافت و رده سلولی سرطان سینه -بررسی نقش و اثرات جایگزینی miR-424 بر مهار بیان PD-L1 در رده سلولی سرطان سینه دارای پایین ترین سطح بیان این miR از طریق بررسی تغییرات سطح بیان PD-L1 (یکی از اهداف انکوژن این miR) در مقایسه با گروه (سلول‌های) کنترل -بررسی نقش و اثرات جایگزینی miR-424 بر میزان حیات سلولی (viability) در رده سلولی سرطان سینه دارای پایین‌ترین سطح بیان این miR پس از ترانسفکت miR-mimic در رده سلولی سرطان سینه در مقایسه با سلولهای کنترل -بررسی نقش و اثرات جایگزینی miR-424 بر روی مهاجرت سلولی (cell migration) در رده سلولی سرطان سینه دارای پایین ترین سطح بیان این miR ، پس از ترانسفکت miR-mimic در رده سلولی سرطان سینه در مقایسه با گروه (سلول‌های) کنترل -بررسی نقش و اثرات جایگزینی miR-424 در القاء آپوپتوز در رده سلولی سرطان سینه دارای پایین ترین سطح بیان این miR ، از طریق بررسی آپوپتوز سلولی (Apoptosis) پس از ترانسفکت miR-mimic در رده سلولی سرطان سینه در مقایسه با گروه (سلول‌های) کنترل |
| چکیده انگلیسی طرح | a1) Patient sampling, during which cancerous tissues from patients with breast cancer are removed from the patient by a specialist surgeon and immediately transferred to liquid nitrogen for preservation for future tests. 2) Selection of patients with breast cancer according to pathology file information 3) Extraction of total RNA from 40 human malignant breast tumor tissues and normal adjacent tumor tissues using RNA extraction kit 4) Synthesis of cDNA using cDNA synthesis kit 5) Design of miR-424 and PD-L1 specific primers 6) Comparison of miR-424 and PD-L1 expression levels between breast tumor tissues and healthy adjacent tumor tissues via qRT-PCR 7) Statistical analysis of qRT-PCR data 8) Culture of breast cancer cells 9) Comparison of miR-424 and PD-L1 expression levels in breast cancer cell lines via qRT-PCR with the aim of finding the cell line with the lowest miR-424 expression level and the highest PD-L1 expression level 10) Transfection of miR-424-mimic in the breast cancer cell line with the lowest miR-424 expression level using transfection reagent 11) Evaluation of growth rate in Breast cancer cells transfected with miR-424-mimic compared to the control group (untransfected cancer cells) using MTT assay 12) Evaluation of cell migration in breast cancer cells transfected with miR-424-mimic compared to the control group using scratch test/wound healing assay 13) Evaluation of cell apoptosis in breast cancer cells transfected with miR-424-mimic compared to the control group using Annexin V assay 14) Measurement and comparison of PD-L1 mRNA level as a downstream oncogene target for miR-424 between breast cancer cells transfected with miR-424-mimic and the control group using qRT-PCR 15) Statistical analysis of the obtained data |
| کلمات کلیدی | ترانسفکت: انتقال به درون سلول با استفاده از عامل ترانسفکت کننده |
| ذینفعان نتایج طرح | بیمار، جامعه،صنعت |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| بهزاد برادران | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| رضا صفرعلیزاده | همکار اصلی |
| محمدعلی حسینپورفیضی | همکار اصلی |
| نرگس دستمالچی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر 5p می تواند یک miR سرکوب کننده تومور برای تنظیم رشد سلولهای BC ، آپوپتوز و پاسخ ایمنی مربوط به سلول T باشد.متن خبر MicroRNA ها (miRs) تعدیل کننده های اصلی فرایندهای سلولی مانند تکثیر ، آپوپتوز و همچنین پاسخ های ایمنی ضد توموری هستند. در اینجا ، ما نقش miR-424-5p را به عنوان miR سرکوبگر تومور بالقوه در سرطان پستان (BC) ارزیابی کردیم و اثرات آن را در پاسخ ایمنی مربوط به سلول T از طریق تعدیل بیان PD-L1 بررسی کردیم.
نتایج نشان داد که کاهش تنظیم miR-424-5p و تنظیم تنظیم بیان PD-L1 در نمونه های بافت BC و رده سلولی است. ترانسفکشن MiR-424-5p باعث کاهش بیان PD-L1 ، یک هدف پیش بینی شده miR-424-5p شد. همچنین ، miR-424-5p می تواند از طریق تعدیل مسیرهای آپوپتوز و اتوفاژی ، زنده ماندن سلول MDA-MB-231 را کاهش دهد. علاوه بر این ، نشان داده شد که سرکوب PD-L1 توسط miR-424-5p می تواند در تنظیم بیان سیتوکین های موثر در سلول های T شرکت کند.
در نتیجه ، miR-424-5p می تواند یک miR سرکوب کننده تومور برای تنظیم رشد سلول های BC ، آپوپتوز و پاسخ ایمنی مربوط به سلول T از طریق هدف قرار دادن PD-L1 و واسطه های پایین دستی آن باشد. بنابراین ، ما miR-424-5p را به عنوان یک کاندیدای امیدوار کننده برای درمان ترمیم miR برای بیماران BC می شناسیم. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
