بررسی میزان بیان ژن hTERT و تغییرات طول تلومر در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) متعاقب هم کشتی با سلول های بنیادی مزانشیمی
Investigation of gene expression level of the hTERT gene and telomer length changes in acute lymphoblasic leukemia cell line (Molt-4) following co-culture with mesenchymal stem cells
مجریان: حمیدرضا حیدری سورشجانی , راحله فرحزادی
خلاصه روش اجرا: خلاصه روش اجرا: خلاصه روش اجرا: یکی از مکانیسم¬های ناپایداری ژنتیکی که نقش مهمی در سرطان¬ها ایفا می¬نماید، از دست رفتن طول تلومر در آن¬ها می¬باشد. از طرفی آنزیم تلومراز با اضافه نمودن تکرارهای تلومریک کاهش طول تلومر را جبران می¬نماید و بدین صورت میزان فعالیت آنزیم تلومراز در سلول¬های سرطانی بسیار بالاست و این میزان فعالیت بالای آنزیم تلومراز، وابسته به میزان بیان بالای ژن hTERT (ترانس کریپتاز معکوس تلومراز انسانی) می باشد. با هدف قرار دادن ژن hTERT و کاهش میزان بیان آن می توانیم فعالیت آنزیم تلومراز را کم کرده و در نتیجه از بازسازی توالی تلومر حین تقسیم سلولی جلوگیری کرده و سلول را به سمت مرگ سوق دهیم. یکی از روش¬های تحقیقاتی در حال اجرا، تأثیر سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر میزان بیان ژن hTERT و طول تلومر می¬باشد. در این مطالعه سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی از موسسه رویان تهران خریداری می¬شود. پس از پاساژ و تکثیر سلولی، با استفاده از فلوسایتومتری شاخص¬های سطحی CD44 و CD90 به عنوان شاخص¬های مثبت و CD31 و CD34 به عنوان شاخص¬های منفی سلول¬های بنیادی مزانشیمی شناسایی می¬شوند. برای اثبات مزانشیم بودن سلول¬های خالص شده، علاوه بر قابلیت چسبندگی و بررسی مارکرهای سطح سلولی قید شده، این سلول¬های به سلول¬های استخوان¬ساز، چربی¬ساز و غضروف¬ساز نیز تمایز داده می¬شوند که جهت القاء و اثبات تمایز به سلول¬های چربی از محیط کشت آدیپوژنیک و رنگ¬آمیزی Oil Red، جهت القاء و اثبات تمایز به سلول¬های استخوانی از محیط کشت استئوژنیک و رنگ¬آمیزی Alizarin Red و جهت القاء و اثبات تمایز به سلو¬ل¬های غضروف¬ساز از محیط کشت کندروژنیک و رنگ¬آمیزی تولوئیدین بلو استفاده خواهد شد. همچنین درصد زنده¬مانی سلول-های خریداری شده به روش تریپان بلو تأیید خواهد شد. از طرف دیگر سلول¬های رده لوسمی لنفوئیدی حاد (ALL)، به طور جداگانه کشت داده شده و تکثیر می¬شوند. در مرحله بعد، هر دو سلول با استفاده از پلیت¬های مخصوص هم¬کشتی (Trans well) به مدت 7 روز در مجاورت هم، کشت داده می¬شوند. پس از اتمام دوره هم¬کشتی سلول¬های بنیادی مزانشیمی و سلول¬های رده Molt-4، RNA و DNA مربوط به رده سلولی Molt-4 جهت بررسی میزان بیان ژن hTERT و اندازه گیری طول تلومر استخراج خواهند شد. با توجه به نقش بسیار مهم سلول¬های بنیادی مزانشیمی در سلول درمانی، در این مطالعه هدف بررسی میزان بیان ژن hTERT و تغییرات طول تلومر در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) متعاقب هم¬کشتی با سلول¬های بنیادی مزانشیمی می¬باشد. نوآوری و ضرورت اجرای طرح: شواهد نشان می¬دهند که سلول¬های بنیادی مزانشیمی می¬توانند به عنوان عواملی در درمان سرطان مورد استفاده قرار گیرند. در طول دهه اخیر، این سلول¬ها به دلیل دارا بودن ویژگی¬هایی مانند گرایش ذاتی به محل تومور و ایمنی¬زایی پایین، به عنوان ابزارهای تحویل جهت تولید موضعی پروتئین¬های درمانی در انواع تومورها مورد استفاده قرار گرفتند. تاکنون هیچ مطالعه¬ای مبنی بر تأثیر سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر تغییرات طول تلومر و همچنین فعالیت تلومراز در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) انجام نشده است. با توجه به مطالعات فراوانی که در زمینه سلول درمانی و درمان انواع سرطان انجام شده است، پیدا کردن مسیرهای مولکولی و برسی جزئیات دخیل در اثرات سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر رده¬های سرطانی گام مهمی در پیشرفت کارآزمایی¬های بالینی و کاهش هزینه¬های درمان خواهد کرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 62714 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی میزان بیان ژن hTERT و تغییرات طول تلومر در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) متعاقب هم کشتی با سلول های بنیادی مزانشیمی |
| عنوان لاتین طرح | Investigation of gene expression level of the hTERT gene and telomer length changes in acute lymphoblasic leukemia cell line (Molt-4) following co-culture with mesenchymal stem cells |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 18 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | شواهد نشان می¬دهند که سلول¬های بنیادی مزانشیمی می¬توانند به عنوان عواملی در درمان سرطان مورد استفاده قرار گیرند. در طول دهه اخیر، این سلول¬ها به دلیل دارا بودن ویژگی¬هایی مانند گرایش ذاتی به محل تومور و ایمنی¬زایی پایین، به عنوان ابزارهای تحویل جهت تولید موضعی پروتئین¬های درمانی در انواع تومورها مورد استفاده قرار گرفتند. تاکنون هیچ مطالعه¬ای مبنی بر تأثیر سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر میزان بیان ژن hTERT و تغییرات طول تلومر در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) انجام نشده است. با توجه به مطالعات فراوانی که در زمینه سلول درمانی و درمان انواع سرطان انجام شده است، پیدا کردن مسیرهای مولکولی و برسی جزئیات دخیل در اثرات سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر رده¬های سرطانی گام مهمی در پیشرفت کارآزمایی¬های بالینی و کاهش هزینه¬های درمان خواهد کرد. |
| اهداف اختصاصی | بررسی تأثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی بر میزان بیان ژنhTERT در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) متعاقب هم­کشتی -هدف اختصاصی دوم: بررسی تأثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی بر تغییرات طول تلومر رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt4) متعاقب هم­کشتی - |
| چکیده انگلیسی طرح | خلاصه روش اجرا: یکی از مکانیسم¬های ناپایداری ژنتیکی که نقش مهمی در سرطان¬ها ایفا می¬نماید، از دست رفتن طول تلومر در آن¬ها می¬باشد. از طرفی آنزیم تلومراز با اضافه نمودن تکرارهای تلومریک کاهش طول تلومر را جبران می¬نماید و بدین صورت میزان فعالیت آنزیم تلومراز در سلول¬های سرطانی بسیار بالاست و این میزان فعالیت بالای آنزیم تلومراز، وابسته به میزان بیان بالای ژن hTERT (ترانس کریپتاز معکوس تلومراز انسانی) می باشد. با هدف قرار دادن ژن hTERT و کاهش میزان بیان آن می توانیم فعالیت آنزیم تلومراز را کم کرده و در نتیجه از بازسازی توالی تلومر حین تقسیم سلولی جلوگیری کرده و سلول را به سمت مرگ سوق دهیم. یکی از روش¬های تحقیقاتی در حال اجرا، تأثیر سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر میزان بیان ژن hTERT و طول تلومر می¬باشد. در این مطالعه سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی از موسسه رویان تهران خریداری می¬شود. پس از پاساژ و تکثیر سلولی، با استفاده از فلوسایتومتری شاخص¬های سطحی CD44 و CD90 به عنوان شاخص¬های مثبت و CD31 و CD34 به عنوان شاخص¬های منفی سلول¬های بنیادی مزانشیمی شناسایی می¬شوند. برای اثبات مزانشیم بودن سلول¬های خالص شده، علاوه بر قابلیت چسبندگی و بررسی مارکرهای سطح سلولی قید شده، این سلول¬های به سلول¬های استخوان¬ساز، چربی¬ساز و غضروف¬ساز نیز تمایز داده می¬شوند که جهت القاء و اثبات تمایز به سلول¬های چربی از محیط کشت آدیپوژنیک و رنگ¬آمیزی Oil Red، جهت القاء و اثبات تمایز به سلول¬های استخوانی از محیط کشت استئوژنیک و رنگ¬آمیزی Alizarin Red و جهت القاء و اثبات تمایز به سلو¬ل¬های غضروف¬ساز از محیط کشت کندروژنیک و رنگ¬آمیزی تولوئیدین بلو استفاده خواهد شد. همچنین درصد زنده¬مانی سلول-های خریداری شده به روش تریپان بلو تأیید خواهد شد. از طرف دیگر سلول¬های رده لوسمی لنفوئیدی حاد (ALL)، به طور جداگانه کشت داده شده و تکثیر می¬شوند. در مرحله بعد، هر دو سلول با استفاده از پلیت¬های مخصوص هم¬کشتی (Trans well) به مدت 7 روز در مجاورت هم، کشت داده می¬شوند. پس از اتمام دوره هم¬کشتی سلول¬های بنیادی مزانشیمی و سلول¬های رده Molt-4، RNA و DNA مربوط به رده سلولی Molt-4 جهت بررسی میزان بیان ژن hTERT و اندازه گیری طول تلومر استخراج خواهند شد. با توجه به نقش بسیار مهم سلول¬های بنیادی مزانشیمی در سلول درمانی، در این مطالعه هدف بررسی میزان بیان ژن hTERT و تغییرات طول تلومر در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) متعاقب هم¬کشتی با سلول¬های بنیادی مزانشیمی می¬باشد. نوآوری و ضرورت اجرای طرح: شواهد نشان می¬دهند که سلول¬های بنیادی مزانشیمی می¬توانند به عنوان عواملی در درمان سرطان مورد استفاده قرار گیرند. در طول دهه اخیر، این سلول¬ها به دلیل دارا بودن ویژگی¬هایی مانند گرایش ذاتی به محل تومور و ایمنی¬زایی پایین، به عنوان ابزارهای تحویل جهت تولید موضعی پروتئین¬های درمانی در انواع تومورها مورد استفاده قرار گرفتند. تاکنون هیچ مطالعه¬ای مبنی بر تأثیر سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر تغییرات طول تلومر و همچنین فعالیت تلومراز در رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4) انجام نشده است. با توجه به مطالعات فراوانی که در زمینه سلول درمانی و درمان انواع سرطان انجام شده است، پیدا کردن مسیرهای مولکولی و برسی جزئیات دخیل در اثرات سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر رده¬های سرطانی گام مهمی در پیشرفت کارآزمایی¬های بالینی و کاهش هزینه¬های درمان خواهد کرد. |
| کلمات کلیدی | سلول بنیادی مزانشیمی: سلول¬های بنیادی مزانشیمی که نوعی سلول بنیادی بزرگسال محسوب می¬شوند، با دو خاصیت توان خود تجدیدی برای مدت طولانی و پتانسیل تمایز به رده¬های سلولی متفاوت شناخته می¬شوند. رده سلولی Molt-4: رده سلولی مربوط به لوسمی لنفوئیدی حاد است، این رده سلولی از یک مرد 19 ساله جدا شده است. هم¬کشتی: در معرض قرار گرفتن دو نوع سلول متفاوت را گویند که این دو نوع سلول از طریق محیط کشت مشترک با یکدیگر تبادلات فاکتورهای رشد مختلف را دارند. تلومر: پایانه فیزیکی کروموزمهای خطی میباشد که از یک توالی غیر کد کننده تشکیل یافته است. در پستانداران تلومر مرکب از تعداد متغیری توالیهای تکراری، با رمز TTAGGG میباشد. آنزیم تلومراز: یک ریبونوکلئوپروتئین می¬باشد و با الگو قراردادن بخش اسید ریبونوکلئیکی خود، توالیهای تکراری تلومر را به پایانهی رشتهی پیرو متصل کرده و این بخش اضافه برای سنتز پرایمر جدید الگو قرار گرفته و همانندسازی انتهای DNA کامل میشود. |
| ذینفعان نتایج طرح | نتایج به دست آمده از این طرح، مساعدت بزرگی است به محققانی که در زمینه سلول درمانی و پزشکی بازساختی به خصوص در زمینه درمان سرطان فعالیت دارند. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| حمیدرضا حیدری سورشجانی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| راحله فرحزادی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| عزت اله فتحی | همکار اصلی |
| حجت اله نوزاد چروده | مشاور |
| ایوب ممندی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر سلول های بنیادی مزانشیمی موجب کاهش طول تلومر در سلول های سرطانی مدل ALL می شوندمتن خبر استفاده از سلول های بنیادی مزانشیمی که با تولید سایتوکائین های مختلف می توانند موجب مهار رشد سلول های سرطانی گردند یکی از روش های آینده دار در مبارزه با سرطان می باشد. در این مطالعه سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی در مواجهه با سلول های مدل سرطان خون ALL قرار گرفت. بعد از گذشت پنج روز از هم کشتی آنها، جهت بررسی تغییرات میزان بیان آنزیم تلومراز و تغییرات طول تلومر در سلول های سرطانی هم کشت داده شده و کنترل منفی (هم کشت داده نشده)، به ترتیب RNA و DNA تام سلول ها استخراج گردید.
با انجام واکنش Real-time PCR تغییرات میزان بیان ژن تلومراز، در مقایسه با ژن کنترل داخلی B-actin بصورت نسبی مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد سلولهای هم کشت داده شده نسبت به کنترل آن 40 درصد کاهش میزان بیان در آنزیم تلومراز از خود نشان داده است.
همچنین با انجام واکنش Real-time PCR در غلظت های مختلف تلومر استاندارد، منحنی کالیبراسیون تهیه گردید و بر اساس آن طول تلومر مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج نشان داد در سلول های هم کشت شده طول تلومر از 70000 جفت باز به 20000 جفت باز تغییر یافته بود. نتایج حاصل بیانگر کارایی مناسب سلول درمانی بر پایه سلول های مزانشیمی بنیادی در مبارزه با سرطان می باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
