تاثیر مکملیاری جداگانه و توامان لاکتوباسیلوس پلانتاروم و اینولین بر شاخصهای قلبی استرس اکسیداتیو و نشانگرهای آپوپتوز در بافت قلب رتهای نر دیابتی نوع 2

مجریان: مریم ثقفی اصل

خلاصه روش اجرا: مطالعه بر روی 60 رت نر نژاد ویستار با سن1±6 ماه و وزن تقریبی20 ±200 گرم تحت شرایط استاندارد آزمایشگاهی با دمای محیطºc 25 -22 ، سیکل h 12 روشنایی و h12 تاریکی، رطوبت نسبی 60 % -40% و دسترسی آزاد به آب انجام می گیرد. رتها بطور تصادفی به 6 گروه 10 تایی تقسیم می شوند (به دلیل ریزش احتمالی در دیابت). رژیم غذایی جهت القای رژیم دیابتی به صورت پرچرب (58%چربی-17%کربوهیدرات-25% پروتئین) به مدت 4 هفته به 5 گروه از رتها داده می شود. پس از 4 هفته رژیم، جهت دیابتی کردن رتها از استرپتوزوتوسین (STZ) استفاده خواهد شد. STZ به میزان mg/kg BW35 به صورت تک دوز و داخل صفاقی به حیوان تزریق می شود. بعد از گذشت یک هفته از تزریق STZ، برای اندازه گیری گلوکز خون ناشتا جهت تشخیص دیابت از دم حیوان خونگیری خواهد شد. گلوکز خون بیشتر از mg/dl 250 به عنوان دیابت تعریف می شود. رتهایی که به دیابت مبتلا نشده اند، از مطالعه خارج خواهند شد. پروبیوتیک لاکتوباسیلوس پلانتاروم کشت داده شده، به صورت محلول PBS در محیط یخچال نگهداری و به شکل گاواژ با دوز ( CFU107) هر 24 ساعت به حیوان داده می شود. این کار پس از دیابتی شدن حیوان صورت می گیرد. جهت اطمینان از میزان ماندگاری مکمل تجویز شده، LP به صورت هفتگی کشت داده می شود. رژیم پربیوتیک اینولین HP که به شکل پودر می باشد، همراه با آب مصرفی به شکل محلول به میزان 5% میزان غذای مصرفی اندازگیری شده رت داده می شود. در هر قفس تعداد 3 الی 4 سر رت قرار داده و از آن ها نگهداری می شود. نظافت قفس رتها روزانه می باشد، هم چنین آب و غذای مورد نیاز آن ها هر روز بررسی شده و به میزان کافی داده می شود. جهت بیهوش کردن حیوانات از داروی تیوپنتال سدیم استفاده خواهد شد. بدین صورت که رت ها بر روی میز جراحی قرار داده شده و با تزریق داخل صفاقی دوز بالای تیوپنتال سدیم ( 60 میلی گرم به ازای کیلوگرم وزن بدن) بیهوش خواهند شد. سپس بلافاصله بافت های مورد نظر برداشته خواهند شد. . بافت بطن چپ و ایلئوم رتها خارج شده و پس از هموژناسیون با 1 میلی لیتر PBS، به مدت 40 دقیقه در 12000 rpm و دمای 4°C سانتریفوژ می شوند. سپس نمونه ها در دمای −80°C تا هنگام انجام آزمایشات بیوشیمیایی و وسترن بلات نگهداری می شوند. در انتها، لاشه حیوانات را اتوکلاو کرده و سپس در داخل دستگاه زباله سوز قرار داده و معدوم خواهند شد. وزن رتها از ابتدای مطالعه به صورت هفتگی اندازگیری می شود. میزان مصرف غذا نیز با ترازوی دیجیتالی روزانه اندازگیری می شود. پس از 8 هفته مکمل یاری، سنجش سطوح فاکتورها انجام میشود. گروههای مطالعه بدین شرح می باشند: 1)گروه کنترل با رژیم نرمال 2)گروه دیابت با رژیم نرمال 3)گروه دیابتی+ L.plantarum 4)گروه دیابتی+ اینولین HP 5)گروه دیابتی+ L.plantarum+ اینولین HP 6)گروه sham (همانند گروه مداخله دیابتی می باشد، با این تفاوت که به جای گاواژ پروبیوتیک، آب مقطر گاواژ خواهد شد.) در ضمن محل نگهداری حیوانات در مرکز نگهداری حیوانات مرکز تحقیقات کاربردی-دارویی است و به صورت مشترک محل انجام پروژه نیز در مرکز کاربردی-دارویی و مرکز تحقیقات تغذیه می باشد.