بررسی نقش گیرنده های GABA-A در اثرات ضد افسردگی و اضطرابی عصاره گل گاو زبان در مدل استرس موش سوری

مجریان: سعید صدیق اعتقاد

خلاصه روش اجرا: این مطالعه بر روی حیوانات آزمایشگاهی در مرکز تحقیقات اعصاب دانشگاه علوم پزشکی تبریز انجام خواهد گردید. در مطالعه حاضر از 70 عدد موش کوچک آزمایشگاهی نر از نژاد Balb/c در محدوده وزنی 30-25 گرم استفاده خواهد شد. عدم وجود هر‌گونه بیماری و رفتار غیر‌‌‌عادی به ‌عنوان معیار ورود و بروز هر گونه بیماری و جراحت در طول دوره مطالعه به عنوان معیار‌های خروج در نظر گرفته خواهد شد. موش‌ها به صورت تصادفی به 7گروه 10 تائی، شامل گروههای زیر تقسیم خواهند شد. 1. گروه کنترل: حیوانات به مدت 14 روز 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق خوراکی و 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 2. دیازپام: حیوانات به مدت 14 روز 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق خوراکی و 1میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن دیازپام از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 3. استرس مهاری: به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی، حیوانات به مدت 14 روز تحت استرس مهاری قرار می¬گیرند (1) و همزمان به مدت 14 روز 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق خوراکی و 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 4. استرس مهاری+عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان: به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی، حیوانات به مدت 14 روز تحت استرس مهاری قرار می¬گیرند و همزمان به مدت 14 روز عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی با دوز 150 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن از طریق خوراکی و نیم ساعت قبل از دریافت عصاره، 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 5. استرس مهاری+فلومازنیل+عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان: به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی، حیوانات به مدت 14 روز تحت استرس مهاری قرار می¬گیرند و همزمان به مدت 14 روز عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی با دوز 150 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن از طریق خوراکی و نیم ساعت قبل از دریافت عصاره، فلومازنیل با دوز 1میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 6. استرس مهاری+فلومازنیل: به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی، حیوانات به مدت 14 روز تحت استرس مهاری قرار می¬گیرند و همزمان به مدت 14 روز 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق خوراکی و نیم ساعت قبل از دریافت نرمال سالین، فلومازنیل با دوز 1میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. 7. استرس مهاری+فلومازنیل+دیازپام: به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی، حیوانات به مدت 14 روز تحت استرس مهاری قرار می¬گیرند و همزمان به مدت 14 روز 2/0 میلی لیتر نرمال سالین از طریق خوراکی و 1میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن دیازپام از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. نیم ساعت قبل از دریافت دیازپام، فلومازنیل با دوز 1میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن از طریق داخل صفاقی دریافت خواهند کرد. یک روز بعد از پایان دوره القای استرس، آزمون‌های رفتاری شامل شنای اجباری و معلق¬سازی از دم جهت ارزیابی رفتار شبه افسردگی انجام خواهد شد. و به منظور سنجش سطح اضطراب، مدل رفتاری آزمون‌های ماز بعلاوه‌ای مرتفع شده و تست میدان باز مورد استفاده قرار خواهد گرفت. بعد از پایان آزمون رفتاری، حیوانات با داروهای کتامین 100 میلی گرم به ازای وزن بدن و زایلازین10 میلی گرم به ازای وزن بدن بیهوش خواهند شد، سر آنها قطع شده و بافت مغز استخراج خواهد شد. بعد از انجماد در نیتروژن مایع، به فریزر 70- ذخیره خواهند شد. همچنین در این مرحله با خونگیری از بطن چپ، نمونه های سرمی جهت اندازه گیری کورتیکوسترون تهیه خواهد شد. شاخص های استرس اکسیداتیو شامل ظرفیت آنتی اکسیدانی تام (TAC)، مالوئیل دآلدهید (MDA)، و فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدان شامل سوپراکسید دیس موتاز (SOD) و گلوتاتیون پراکسیداز (GPx) در بافت مغز نیز بر اساس دستورالعمل کیت‌های تجاری مربوطه اندازه¬گیری خواهد شد. همچنین از روش وسترن بلاتینگ برای بررسی بیان پروتئین های BDNF، TrkB، CREB، و گیرنده های GABAA استفاده خواه شد.