مهار همزمان HIF-1 آلفا و S1PR1 به منظور مهار رشد سلول های سرطانی در محیط کشت
Cosuppression of HIF-1alpha and S1PR1 in order to inhibit cancer cell growth, in vitro
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق , قاسم قلم فرسا
خلاصه روش اجرا: این مطالعه دو فاز دارد: ۱. تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA : ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. کیتوزان لاکتات پتانسیل بالایی برای کپسوله کردن siRNA و حفاظت از آن در برابر تخریب سرمی دارد. تشکیل نانو ذرات کیتوزان لاکتات در اثر تعاملات یونی بین کیتوزان لاکتات و siRNA حل شده در سدیم تری پلی فسفات ( siRNA/TPP ) صورت می گیرد. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2 درصد آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. 2. مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده : از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) در این مطالعه استفاده خواهد شد که مطالعات گذشته بیان HIF-1α و S1PR1را در آنهااثبات کرده است. این رده سلولی در محیط RPMI1640 حاوی 10% fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی بیان ژن HIF-1α و S1PR1در کشت سلول ها توسط تکنیک های ELISA و Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. تاثیر نانوذرات حاوی siRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. علاوه بر این میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی فاکتورهای پیش آپوپتوزی Bax و فاکتور ضد آپوپتوزی Bcl-2 با استفاده از تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 62482 |
| عنوان فارسی طرح | مهار همزمان HIF-1 آلفا و S1PR1 به منظور مهار رشد سلول های سرطانی در محیط کشت |
| عنوان لاتین طرح | Cosuppression of HIF-1alpha and S1PR1 in order to inhibit cancer cell growth, in vitro |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | همزمان با رشد سریع سلول های توموری، شرایط هایپوکسیک و به دنبال آن محیط غنی از آدنوزین در ناحیه تومور ایجاد می شود که می توانند فعالیت ضد توموری سلول های T و NK را مهار کنند. طبق مطالعات انجام شده بیشترین فاکتوری که در این شرایط فعال می شود HIF-1 است که می تواند موجب رشد سلول های توموری شود و بر متاستاز، رگ زایی و مقاومت دارویی تومور تاثیر بگذارد.HIF-1 همچنین می تواند روی بیان S1PR1 تاثیر داشته باشد و شرایط غنی از آدنوزین در محیط ایجاد شود که نقش مهمی در مکانیسم فرار تومور ایفا می کند. مطالعات جداگانه زیادی برای مهار HIF-1α و S1PR1 انجام شده است که گاها به علت اختصاصی نبودن عوارض جانبی زیادی داشتند ولی در این مطالعه ما به کمک نانوذرات و RNA های مداخله گر به دنبال معرفی روشی هدفمند هستیم که بیان ژن های S1PR1 و HIF-1α را برای اولین بار بطور همزمان در ریزمحیط توموری سرکوب کند و با دوز کم ، بیشترین تاثیر و کمترین عارضه را داشته باشد. |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده |
| چکیده انگلیسی طرح | این مطالعه دو فاز دارد: ۱. تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی siRNA : ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. کیتوزان لاکتات پتانسیل بالایی برای کپسوله کردن siRNA و حفاظت از آن در برابر تخریب سرمی دارد. تشکیل نانو ذرات کیتوزان لاکتات در اثر تعاملات یونی بین کیتوزان لاکتات و siRNA حل شده در سدیم تری پلی فسفات ( siRNA/TPP ) صورت می گیرد. و نانوذرات حاوی siRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2 درصد آگارز تایید می شود و میزان بارگیری siRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. 2. مطالعه in vitro اثر بخشی نانو ذرات تهیه شده : از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) در این مطالعه استفاده خواهد شد که مطالعات گذشته بیان HIF-1α و S1PR1را در آنهااثبات کرده است. این رده سلولی در محیط RPMI1640 حاوی 10% fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA را به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی بیان ژن HIF-1α و S1PR1در کشت سلول ها توسط تکنیک های ELISA و Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. تاثیر نانوذرات حاوی siRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. علاوه بر این میزان تاثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA بر روی فاکتورهای پیش آپوپتوزی Bax و فاکتور ضد آپوپتوزی Bcl-2 با استفاده از تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود. |
| کلمات کلیدی | S1P: اسفنگوزین 1-فسفات یک اسفنگولیپید القا کننده سیگنالینگ است ،که با عنوان لیزواسفنگولیپید نیز شناخته میشود. S1P یک مدیاتور لیپیدی فعال زیستی بشمار میرود که پیامبر ثانویه داخلی و لیگاند خارج سلولی گیرنده های جفت شده با G پروتئین های S1PR ها میباشد. S1P یک تنظیم کننده مهم سیستم عروقی و سیستم ایمنی بدن است و سیگنالینگ القا شده توسط آن باعث تحریک مهاجرت سلولهای ایمنی میشود ودر سلولهای سرطانی هم دیده شده است که باعث رشد بیشتر و مقاومت به آپوپتوز و تحریک متاستاز میشود. نحوه تشکیل آن هم به این صورت است که اسفنگومیلین توسط اسفنگومیلیناز به سرامید و آن هم توسط سرآمیداز به اسفنگوزین تبدیل میشود و اسفنگوزین توسط دو اسفنگوکیناز به نام های SPHK1,2 به S1P تبدیل میشود. :S1PR1 یکی از 5 گیرنده جفت شده با G پروتئین است که بهS1P متصل میشود و القای سیگنالینگ STAT3 انجام میدهد. siRNA: RNA مداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق می گردد.در تکنولوژی RNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجودمی آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. HIF-1α: جزئی از فاکتور رونویس هترو دایمر HIF-1 است که از دو جزء HIF-1α وHIF-1β تشکیل شده است.یک جزء حساس به اکسیژن است که بیان آن تحت شرایط کمبود اکسیژن القا می گردد. به عنوان تنظیم کننده اصلی رونویسی در پاسخ سلولی به شرایط کمبود اکسیژن عمل می کند.در بقا و تهاجم سلول های توموری و رگزایی نقش دارد. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| قاسم قلم فرسا | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| هادی حسن نیا | مشاور |
| پیام اشرفی طالشمکائیل | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر سرکوب بیان HIF-1a و S1PR1 باعث مهار تکثیر سلول های سرطانی می شود.متن خبر ریزمحیط توموری نقش بسیار عمده ای در پیشرفت سرطان ایفا می کند. فاکتورهای بسیاری در ناحیه تومور حضور دارند که می توانند پاسخ های ایمنی ضد تومور را مهار کنند. در این مطالعه دو فاکتور بسیار مهم در ریزمحیط تومور شامل HIF-1α و S1PR1 هدف درمان قرار گرفتند. نانوذرات تری متیل کیتوزان کونژوگه شده با آلژینات برای انتقال موثر siRNA¬ ها به سلول های سرطانی تهیه گردید. ما با هدف بررسی تأثیر نانوذرات بارگیری شده با siRNA در شرایط in vitro بر روی علائم تومور رده سلولی سرطان 4T1(سرطان سینه) مطالعه کردیم. نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که نانوذرات تولیدی اندازه ای در حدود ~110 nm ، PDI < 0.2 و پتانسیل زتا 18 mV داشتند. ضمن اینکه درمان ترکیبی می توانست بخوبی باعث کاهش بقای سلول های سرطانی گردد. یافته های به دست آمده از این مطالعه نشان داد که هدف قرار دادن ترکیبی HIF-1α و S1PR1 توسط نانوذرات بارگیری شده با siRNA می تواند یک روش موثر برای درمان سرطان باشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
