کلون ، بیان، تخلیص FGF7 و شناسائی آنتی بادی های تک زنجیره ای جدید علیه FGF7 با استفاده از تکنیک نمایش فاژی
Cloning, expression, and purification of FGF7 and Identification of novel single chain variable fragments (scFv) antibodies against FGF7 using Phage Display technology.
مجریان: سیاوش دستمالچی
خلاصه روش اجرا: فاکتور رشد فیبروبلاستی (FGF7) در بسیاری ا ز سرطانهای مرتبط با Carcinoma) Associated Fibroblasts) نقش عمده ای ایفا میکند. طی مطالعه ای که بر روی سلول های سرطانی به عمل آمده، مشخص شده که آنتی بادی های FGF7 قدرت بازگردانی سلول های سرطانی به سلول های معمولی را دارند. هدف از انجام طرح فوق، کلون کردن پروتئین FGF7 (Fibroblast Growth Factor 7) ، بیان، خالص سازی و شناسائی آنتی بادی های تک زنجیره ای جدید علیه FGF7 با استفاده از تکنیک نمایش فاژی می باشد. برای انجام مرحله کلون کردن، mRNA پروتئین مورد نظر از سلولهای یوکاریوتی جداسازی شده و از روی این mRNA ، cDNA مربوطه به دست آمده وکه پس از انجام PCR در یک حامل مناسب کلون خواهد شد. بعد از این مرحله، حامل وارد سلول باکتریایی خواهد شد. سپس در محیط کشت مناسب باکتری ها را کشت داده و حامل های حاوی ژن FGF7 جداسازی خواهند شد. بعد از جداسازی حامل حاوی ژن مورد نظر، این حامل را در یک باکتری دیگر با قدرت بیان بالا وارد کرده و بعد از کشت دادن این باکتری ها، پروتئین بیان شده مورد نظر طی مراحل خالص سازی، تخلیص خواهد شد. تکنیک نمایش فاژی که اولین بار توسط Smith و همکاران در سال 1985 معرفی شد، تکنیک توانمندی است که میتواند در شناسائی لیگندهای جدید علیه گیرندههای هدف های پروتئینی مورد استفاده قرار گیرد. بنابراین در مطالعه حاضر برآنیم که با استفاده از تکنیک نمایش فاژی امکان دستیابی به آنتی بادی یا آنتی بادی های اختصاصی علیه FGF7 بررسی گردد. . برای بررسی اثرات آنتی بادی های انتخاب شده از تکنیک ELISA و همچنین تست MTT استفاده خواهد شد. نتایج به دست آمده از این طرح می تواند برای تولید مهارکننده های FGF7 مورد استفاده قرار گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 62470 |
| عنوان فارسی طرح | کلون ، بیان، تخلیص FGF7 و شناسائی آنتی بادی های تک زنجیره ای جدید علیه FGF7 با استفاده از تکنیک نمایش فاژی |
| عنوان لاتین طرح | Cloning, expression, and purification of FGF7 and Identification of novel single chain variable fragments (scFv) antibodies against FGF7 using Phage Display technology. |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | تولید آنتی بادیهای منوکلونال و پروتئینهای نوترکیب (جنبههای تولیدی و پروتکل درمانی) و واکسن |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 36 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | در مطالعه حاضر برآنیم که با استفاده از تکنیک نمایش فاژی امکان دستیابی به آنتی بادی یا آنتی بادی های اختصاصی FGF7 بررسی گردد. در صورت شناسائی، چنین آنتی بادی یا آنتی بادی هایی میتوانند در فرآیند طراحی عوامل درمانی در سرطانهای مرتبط با CAF مورد استفاده قرار گیرند. |
| اهداف اختصاصی | 1)تولید پروتئین نوترکیب FGF7- کلون کردن پروتئین FGF7- بیان پروتئین FGF7- تخلیص پروتئین FGF7
- |
| چکیده انگلیسی طرح | Fibroblast growth factor (FGF7) plays a major role in many cancers associated with Carcinoma (Associated Fibroblasts). During a study conducted on cancer cells, it was found that FGF7 antibodies have the power to restore cancer cells to normal cells. The purpose of carrying out the above project is to clone FGF7 (Fibroblast Growth Factor 7) protein, express, purify and identify new single-chain antibodies against FGF7 using phage display technique. To perform the cloning step, the mRNA of the desired protein is isolated from eukaryotic cells and the corresponding cDNA is obtained from this mRNA, which will be cloned in a suitable carrier after PCR. After this step, the carrier will enter the bacterial cell. Then, the bacteria will be cultured in the appropriate culture medium and the carriers containing the FGF7 gene will be isolated. After isolating the carrier containing the desired gene, this carrier is inserted into another bacterium with high expression power, and after culturing these bacteria, the desired expressed protein will be purified during purification steps. The phage display technique, which was first introduced by Smith et al. in 1985, is a powerful technique that can be used to identify new ligands against protein target receptors. Therefore, in the present study, we intend to investigate the possibility of obtaining specific antibody or antibodies against FGF7 by using phage display technique. . ELISA technique and MTT test will be used to check the effects of selected antibodies. The results obtained from this project can be used to produce FGF7 inhibitors. |
| کلمات کلیدی | Cloning به دست آوردن یک ژن از ژن همسان آن به تعداد زیاد Expression تولید پروتئین از ژن مربوطه با استفاده از سیستم سلولی Purification جداکردن یک پروتئین از سلول بدون از بین رفتن فعالیت بیولوژیکی آن پروتئین Phage display antibody library |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| سیاوش دستمالچی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| مریم حمزه میوه رود | مشاور |
| بهزاد جعفری | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر نمایش فاژی میتواند برای شناسایی آنتی بادی های تک زنجیره ای علیه پروتئین FGF7 استفاده شود.متن خبر نمایش فاژی می تواند برای شناسایی آنتی بادی های تک زنجیره ای علیه پروتئین FGF7 استفاده شود.پروتئین FGF7 در وکتور بیانی مناسب کلون و بیان شد.برای انجام این مرحله mRNA پروتئین مورد نظر از سلولهای یوکاریوتی جداسازی شده و از روی این mRNA ، cDNA مربوطه به دست آمده و که پس از انجام PCR در یک حامل مناسب کلون شد. بعد از این مرحله، حامل وارد سلول باکتریایی شده و سپس باکتری ها در محیط کشت مناسب کشت داده شده و بعد از بیان مناسب پروتئین تخلیص گردید. بعد از ارزیابی فعال بودن این پروتئین نمایش فاژی انجام گرفت.بعد از ارزیابی اتصال FGF7 با فاژهای غربالگری شده، sdAb هایی با قابلیت انحلال به این پروتئین جداسازی شدند. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر نمایش فاژی میتواند برای شناسایی آنتی بادی های تک زنجیره ای علیه پروتئین FGF7 استفاده شود.متن خبر نمایش فاژی می تواند برای شناسایی آنتی بادی های تک زنجیره ای علیه پروتئین FGF7 استفاده شود.پروتئین FGF7 در وکتور بیانی مناسب کلون و بیان شد.برای انجام این مرحله mRNA پروتئین مورد نظر از سلولهای یوکاریوتی جداسازی شده و از روی این mRNA ، cDNA مربوطه به دست آمده و که پس از انجام PCR در یک حامل مناسب کلون شد. بعد از این مرحله، حامل وارد سلول باکتریایی شده و سپس باکتری ها در محیط کشت مناسب کشت داده شده و بعد از بیان مناسب پروتئین تخلیص گردید. بعد از ارزیابی فعال بودن این پروتئین نمایش فاژی انجام گرفت.بعد از ارزیابی اتصال FGF7 با فاژهای غربالگری شده، sdAb هایی با قابلیت انحلال به این پروتئین جداسازی شدند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
