بررسی وضعیت متیلاسیون پروموتر ژن TDT متعاقب هم کشتی سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان با رده سلولی لوسمی لنفوئیدی حاد (Molt-4)

مجریان: راحله فرحزادی

خلاصه روش اجرا: سلول‌های بنیادی خون‌ساز بالغ دو رده سلولی لنفوئید و میلوئید را به وجود می‌آورند، رده سلولی لنفوئید، سلول‌های B، T و NK را به وجود می‌آورند. رده سلولی لنفوئید قبل از ایجاد سلول‌های B و T سلول‌های PreB و PreT را ایجاد می‌کنند سلول‌های PreB و PreT طی تولید ایمونوگلوبین (IG) و گیرنده‌های سلولی T (T Cell Receptor :TCR) یک بازآرایی ژنی (‌Gene Recombination) توسط آنزیمی به نام ترمینال دئوکسی نوکلئوتیدیل ترانسفراز (TDT) انجام می‌دهند. بیان بیش از حد TDT باعث بازآرایی ژنی (‌Gene Recombination) غیر متعارف شده و سلول‌های خونی را به سمت سرطانی شدن می‌برد و باعث ایجاد انواع مختلف سرطان سلول‌های خون‌ساز مانند لوکمی لنفوبلاستیک حاد (ALL) می‌شود. فاکتورهای رونویسی NF-κB، به عنوان اهداف درمانی مورد توجه قرار گرفته‌اند، زیرا در بسیاری از بیماری‌های انسانی، به طور غیر‌طبیعی فعال بوده و در پاتولوژی بیماری‌ها نقش دارند. فاکتور رونویسی c-Rel، یک عضو منحصر به فرد از خانواده NF- κB است که در آپوپتوز، تکثیر و بقای سلولی، نقش عمده‌ای دارد. بیان بیش از حد c-Rel، در بسیاری از تومورهای سلول B انسان، از جمله لوکمیای سلول‌های B و سرطان‌های متعدد، تشخیص داده شده است. به دلیل وضعیت منحصر به فرد حفره مغز استخوان، سلول¬های سرطانی ایجاد شده مرتبط با مغز استخوان، در مقایسه با سایر ارگان¬ها شرایط خاصی برای زنده ماندن دارند. از طرفی به دلیل اینکه سلول¬های بنیادی مزانشیمی به عنوان عناصر مؤثر در خونسازی نقش دارند و کاربرد این سلول¬ها در درمان بیماری¬های ژنتیکی، بهبود خونسازی در بیماران سرطانی تحت درمان، بازسازی استخوان، کم‌خونی آپلاستیک (ناتوانی در ساختن نسوج جدید)، سرطان خون و سرطان مغز استخوان به خوبی نشان داده شده است، هدف از انجام این مطالعه بررسی نقش فاکتورهای مترشحه از سلول¬های بنیادی مزانشیمی بر متیلاسیون پروموتر ژن آنزیم TDT و میزان بیان ژن و پروتئین c-Rel به عنوان یک فاکتور رونویسی مهم در مسیر سینگنالینگ NF-κB می¬باشد. در این پژوهش، سلول¬های Molt-4، از انستیتو پاستور خریداری خواهند شد و سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان از سلول¬هایی که در طرح قبلی مجری با کد پژوهان 59238 و کد اخلاق IR.TBZMED.REC.1396.849 استخراج شده است استفاده خواهد شد. در این پژوهش، سلول¬های Molt-4 و سلول¬های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان هر کدام به طور جداگانه کشت داده خواهند شد و پس از بررسی درصد زنده¬مانی سلول¬های استخراج شده به روش تریپان بلو، با استفاده از پلیت¬های Trans well، دو رده سلولی به روش هم¬کشتی در مجاورت یکدیگر قرار خواهند گرفت. در ادامه پس از اتمام زمان هم¬کشتی سلول¬های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان و سلول¬های رده Molt-4، بررسی میزان متیلاسیون پروموتر ژن TDT با روش MS-PCR و بررسی سطح بیان ژن و پروتئین c-REL به ترتیب با روش Real time-PCR و وسترن بلاتینگ انجام می¬شود.