بررسی تاثیر رزوراترول و پردنیزولون بر میزان بیانmiR-15a و miR-16-1 و میزان آپوپتوز در رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM
Evaluation of resveratrol and prednisolone effect on miR-15a and miR-16-1 gene expression level and apoptosis in acute lymphoblastic leukemia cell line: CCRF-CEM
مجریان: مجید فرش دوستی حق
خلاصه روش اجرا: رده سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد ALL) ) از بانک سلولی پاستور ایران تهیه شده و در محیط کشت همراه با فاکتورها و آنتی بیوتیک های مناسب کشت داده خواهند شد. دوز های 15, 50 و 100 میکرومول رزوراترول و دوز 700 میکرومول پردنیزولون بر اساس مطالعات قبل انتخاب شد. در ادامه، در فلاسک های مختلف T-25 حاوی محیط کشت RPMI 1640, سلول ها کشت داده می شوند و در دمای 37 و رطوبت 95 در صد و 5 درصد CO2 انکوبه می شوند. سپس سلولها در پلیت های مختلف کشت سلولی و در گروه های جداگانه با غلظت های 15, 50 و 100 میکرومول رزوراترول, غلظت 700 میکرومول پردنیزولون و غلظت 100 میکرومول رزوراترول به همراه غلظت 700 میکرومول پردنیزولون تیمار می شوند. سپس در فاصله های زمانی 24 و 48 ساعت، تعدادی از این پلیت ها, برای بررسی میزان آپوپتوز سلولی با استفاده از رنگ آمیزی انکسین V – FITC و پروپیدیوم آیوداید (PI) توسط دستگاه فلوسیتومتری انتخاب می شوند و تعدادی از پلیت ها, نیز بعد استخراج RNA سلولها و سنتز cDNA، برای بررسی میزان بیان microRNAهایa15 و-116 با استفاده از روش Syber-Green Real-Time RT-PCR و کیت مربوطه، و توالی های آغازگر برای miR15-a ,miR16-1 و نیز U6(کنترل داخلی) مورد استفاده قرار خواهند گرفت. از ژن Actin-β به عنوان نرمالایزر cDNA مورد استفاده قرار می گیرد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 62053 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی تاثیر رزوراترول و پردنیزولون بر میزان بیانmiR-15a و miR-16-1 و میزان آپوپتوز در رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of resveratrol and prednisolone effect on miR-15a and miR-16-1 gene expression level and apoptosis in acute lymphoblastic leukemia cell line: CCRF-CEM |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مکانیسم سلولی مولکولی اثربخشی فرآوردههای دارویی، ترکیبات بیولوژیک |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | امروزه علاقه ی زیادی به استفاده از ترکیبات طبیعی به عنوان عوامل chemopreventive در سرطان های انسانی بوجود آمده است. در این زمینه، با توجه به اطلاعات بدست آمده از مطالعات اپیدمیولوژیکی در سرتاسر جهان، ارتباط قابل اهمیتی بین رژیم غذایی و انواعی از سرطان ها نشان داده شده است. بسیاری از مطالعات نیز توانایی رزوراترول را در مهار تکثیر انواع مختلف سل لاین های سرطانی انسانی و القاء آپوپتوز در آزمایشات in vitro را اثبات کرده اند. |
| اهداف اختصاصی | تعیین میزان بیان ژن های miR-15a و miR-16-1 در سل لاین CCRF-CEM در دوزهای 15, 50 و 100 میکرومول رزوراترول -تعیین میزان بیان ژن های miR-15a و miR-16-1 در سل لاین CCRF-CEM ودر دوز 700 میکرومول پردنیزولون -تعیین میزان بیان ژن های miR-15a و miR-16-1 در سل لاین CCRF-CEM درگروه تیمار شده با دوز 100 میکرومول رزوراترول + دوز 700 میکرومول پردنیزولون -بررسی میزان آپوپتوز سلولی در گروه تیمار شده با رزوراترول تنها و گروه تیمار شده با رزوراترول+ پردنیزولون در هر سل لاین |
| چکیده انگلیسی طرح | Acute lymphoblastic leukemia (ALL) cell line was obtained from Pasteur Cell Bank of Iran and cultured in culture medium with appropriate factors and antibiotics. Doses of 15, 50 and 100 μmol of resveratrol and 700 μmol of prednisolone were selected based on previous studies. Next, the cells were cultured in different T-25 flasks containing RPMI 1640 culture medium and incubated at 37°C, 95% humidity and 5% CO2. Then, the cells were treated in different cell culture plates and in separate groups with concentrations of 15, 50 and 100 μmol of resveratrol, 700 μmol of prednisolone and 100 μmol of resveratrol plus 700 μmol of prednisolone. Then, at 24 and 48 hour intervals, a number of these plates will be selected to examine the level of cell apoptosis using Annexin V-FITC and propidium iodide (PI) staining by flow cytometry, and a number of plates, after extracting cell RNA and synthesizing cDNA, will be used to examine the level of expression of microRNAs a15 and -116 using the Syber-Green Real-Time RT-PCR method and the corresponding kit, and the primer sequences for miR15-a, miR16-1, and U6 (internal control). The Actin-β gene will be used as a cDNA normalizer. |
| کلمات کلیدی | لوکمی لنفوبلاستیک حاد(Acute Lymphoblastic Leukemia):این بیماری یک بدخیمی سلول های خونسازاست که عمدتا رده لنفوییدی را درگیر می کند و با حضور تعداد زیادی از لنفو بلاست ها در مغز استخوان و خون محیطی مشخص می شود. miR-15a (microRNA-15a): یک microRNA دخیل در تنظیم بیان ژن می باشد که دارای خصوصیات سرکوب کنندگی تومور می باشد. miR-16-1 (microRNA-16-1): یک microRNA دخیل در تنظیم بیان ژن می باشد که دارای خصوصیات سرکوب کنندگی تومور می باشد. Resveratrol : یک فیتوآلکسین یا پلی فنول طبیعی که در بعضی گیاهان و میوه ها چون انگور یافت می شود و اثرات ضد سرطانی دارد. پردنیزولون: داروی کورتیکواستروئیدی که برای درمان بیماری های مختلفی مثل، آسم، کولیت السراتیو، آرتریت روماتوئید، لوپوس اریتماتوس، هپاتیت اتوایمیون و لوسمی لنفوبلاستیک حاد مورد استفاده قرار می گیرد. CCRF-CEM: رده ی سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد نوع T cell اولیه Real- Time PCR : همان تکنیک PCR بوده با این تفاوت که در اینجا، با استفاده از یک ماده فلورسنت چون اتیدیوم بروماید با Syber Green ، که به DNA دو رشته ای حاصل طی PCR متصل می شود، می توان میزان محصول PCR را همزمان طی انجام فرآیند PCR، ارزیابی کرد. |
| ذینفعان نتایج طرح | پزشکان انکولوژیست، بیمارانی که شیمی درمانی می شوند، |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مجید فرش دوستی حق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| آکو عظیمی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر مکانیسم های تاثیر داروی گیاهی در درمان سرطان خون مقاوم به درمان در دانشگاه علوم پزشکی تبریز مورد شناسایی قرار گرفت.متن خبر در سالهای اخیر با پیشرفت و توسعه روشها و پروتکل های نوین درمانهای ضد سرطانی، سفارشی سازی پروتکل های درمانی مورد توجه خاصی قرار گرفته است. در کشور مانیز با توجه به محدودیت های مالی و دسترسی به داروها و مواد ضدسرطانی نوین، افزایش بهرهوری داروهای بکار رفته، به امری اجتناب ناپذیر تبدیل شده است. امروزه علاقه ی زیادی به استفاده از ترکیبات طبیعی به عنوان عوامل گیاهی در سرطان های انسانی بوجود آمده است. در این زمینه، با توجه به اطلاعات بدست آمده از مطالعات اپیدمیولوژیکی در سرتاسر جهان، ارتباط قابل اهمیتی بین رژیم غذایی و انواعی از سرطان ها نشان داده شده است. بسیاری از مطالعات نیز توانایی رزوراترول را در مهار تکثیر انواع مختلف سل لاین های سرطانی انسانی و القاء مرگ سلولی در آزمایشات را اثبات کرده اند. در تحقیقی که در دنشگاه علوم پزشکی تبریز انجام گرفت مکانیسم های اثر رزوراترول بر رده های سلولی سرطان خون مقاوم به درمان مورد شناسایی قرار گرفت. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر داروی گیاهی رزوراترول می تواند از طریق تغییر در بیان miR ها سلولهای سرطان خونی را از بین ببرندمتن خبر شیمی درمانی همواره موفق نبوده و مقاوم بودن و عود بیماری، مشکلات جدی را برای بیمار خواهد داشت. در درمانهای ضد سرطانی القاء آپوپتوز ، خصوصا القاء آپوپتوز انتخابی بدون آسیب سلولهای سالم، اصلی ترین استراتژی محسوب می شود. امروزه علاقه ی زیادی به استفاده از ترکیبات طبیعی به عنوان عوامل chemopreventive در سرطان های انسانی بوجود آمده است. در مطالعه ای که در دانشگاه علوم پزشکی تبریز انجام گرفت اثر رزوراترول و پردنیزولون بر میزان بیان miR-15a و miR-16-1و القای آپوپتوز در رده سلولی CCRF-CEM مورد بررسی گرفته است. نتایج این مطالعه نشان داد که رزوراترول به عنوان یک مکمل غذایی با افزایش بیان miR-15a و miR-16-1 و القا آپوپتوز نقش مهمی در درمان لوسمی هایی که دارای مقاومت نسبت به درمان های روتین مثل شیمی درمانی هستند دارد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
