بررسی پروفایل میکروبیوتای روده و ارتباط آن با الگوی غذایی در کودکان سنین مدرسه(12-17)چاق، دارای وزن طبیعی و لاغر

مجریان: علیرضا استاد رحیمی

خلاصه روش اجرا: هدف از این مطالعه که یک مطالعه مقطعی – مقایسه ای می باشد ، تعیین بررسی پروفایل میکروبیوتای روده و ارتباط آن با الگوی غذایی در کودکان سنین مدرسه (12-7 سال ) ،چاق ،دارای وزن طبیعی و لاغر می باشد . بر اساس گزارشات وزارت بهداشت و درمان و آموزش پزشکی، استان گیلان -شهرستان لنگرود دومین رتبه کشور چاقی را در بزرگسالان و کودکان داراست.از آنجایی که چاقی در کودکی رابطه نزدیکی با چاقی در بزرگسالی و بیماریهای مرتبط با آن نظیر دیابت نوع 2 ،بیماریهای قلبی عروقی ،پرفشاری خون ،افزایش چربی خون و... دارد،لذا کنترل ومدیریت چاقی از دوران کودکی بسیار حائز اهمیت است . شواهد اخیر حاکی از آن است که میکروبهای روده در تنظیم متابولیکی ،هضم غذا و میزان استفاده از آن موثر بوده بنابراین می تواند نقش مهمی را درکنترل وزن و چاقی و بیماریهای مرتبط با آن ایفا کند .لذا به منظور حمایت از نتایج مطالعات گذشته در خصوص نقش بالقوه میکروبهای روده در پیشگیری از چاقی،مطالعات بیشتری لازم و ضروری است . حجم نمونه لازم جهت مقایسه میانگین تعداد گونه های میکروبیوتای روده در کودکان سنین مدرسه چاق ،دارای وزن طبیعی و لاغرو بر اساس نتایج مطالعات Peiru Xu و همکارانش و اطلاعات جدول شماره 3 با اطمینان 95 % و توان آزمون 90 % جهت آزمون دو دامنه و بررسی اختلاف آماری بر حسب فرمول نمونه گیری ذیل به تعداد 39 نفر در هر گروه تعیین گردید. از آنجایی که در این مطالعه علاوه برارتباط میکروبیوتای روده با وضعیت بدنی(چاقی ، دارای وزن طبیعی و لاغری)، متغییر جنس و الگوی غذایی نیزمطرح می باشد ،تعداد 20 نمونه به هر گروه اضافه خواهد شد ،لذا تعداد نمونه کل این مطالعه برابربا 59 نمونه در هر گروه خواهد بود . n=(Z1-α/2 +Z1-β)(SD12 +SD22 )/( µ1-µ2)2 پس از بررسی معیارهای ورود و خروج، از والدین دانش آموزان رضایت نامه آگاهانه اخذ می گردد .در ادامه پرسشنامه بسامد خوراک ، فعالیت فیزیکی و اطلاعات دموگرافیک از والدین تکمیل گردیده و اندازه گیری آنتروپومتری(وزن و قد ، BMI , دورکمر ) وفشار خون از دانش آموزان به عمل آمده و نمونه مدفوع تازه در قوطی های استریلی که قبلا تحویل والدین شده است ،جمع آوری خواهد شد و حداکثردر مدت دو ساعت پس از اجابت مزاج برای آماده سازی به آزمایشگاه منتقل شده و بلافاصله در دمای 70- درجه سانتی گراد نگه داری خواهد شد.میکروبیوتای روده باروش آزمایشگاهیq-pcr استخراج خواهد شد . روش Q-PCR ابتدا استخراج dna از نمونه های مدفوع با استفاده از کیت استخراج dna از مدفوع شرکت کیاژن (Qia gene stool dna extraction )استخراج خواهد شد و پس از ارزیابی میزان کیفیت و کمیت dna ی استخراج شده به مقدار یکسان به منظور انجام ریل تایم پی سی ار استفاده خواهد شد. با استفاده ازالاینمنت توالی ژن های 16sRDNA ی باکتری های گروه فرمیکوت نیز باکتریودت ، طراحی پرایمر های عمومی برای دو گروه از باکتری های ذکر شده با استفاده از نرم افزار oligo7 انجام خواهد شد. سپس با استفاده از این پرایمر ها و با استفاده از روش syber green method ریل تایم پی سی ار انجام خواهد شد. نتایج حاصل پس از نرمالایز شدن با ژن gapdh مخصوص سلول های انسانی که احتمالا همراه مدفوع وارد شده باشند و نیز با دی ان ای خالص باکتری لاکتوباسیل (نماینده فرمیکیوت ها ) و باکتری ایکولای (نماینده باکتریودت ها) با استفاده از فرمول دلتا ct در نرم افزار spss انالیز خواهد شد. پس از جمع اوری اطلاعات از کلیه واحدهای مورد پژوهش ، نتایج داده ها با استفاده از نرم افزار SPSS 21 تجزیه وتحلیل خواهند شد . برای توصیف داده های کمی متقارن از میانگین و انحراف معیار و برای داده های چوله از میانه و دامنه چارکی استفاده خواهد شد .داده های کیفی نیز با فراوانی و درصد گزارش خواهند شد .جهت مقایسه میانگین متغییر های کمی در سه گروه از روش one way ANOVA استفاده می شود. و در صورت غیر نرمال بودن از آزمون Kruskal-walise استفاده خواهد شد .همچنین برای مقایسه دو گروه از آزمون t مستقل و در صورت غیر نرمال بودن از آزمون Mann-whiteey U استفاده می شود .برای همبستگی بین دو متغییر از ضریب همبستگی پیرسون برای داه های نرمال و اسپیرمن برای داده های غیر نرمال استفاده خواهد شد.