بررسی تغییرات اپی ژنتیک ژنBAX و BCL-2 در رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM تیمار شده با رزوراترول و پردنیزولون
Evaluation of Epigenetic changes in BAX and BCL-2 genes in CCRF-CEM cell line treated with resveratrol and prednisolon
مجریان: مجید فرش دوستی حق
خلاصه روش اجرا: این تحقیق کلا بصورتinvitro صورت می گیرد و کل بررسی ها بر روی سلول سرطانی CCRF-CEM انجام خواهد گرفت. رده ی سلولی CCRF-CEMاز بانک سلولی پاستور ایران تهیه می شود . ویال کرایو در بن ماری 37 درجه قرار داده شده و بعد دفریز شدن، با دور 500 برای 5 دقیقه سانتریفیوژ می شود و مایع رویی برداشته شده و با کمی محیط کشت RPMI 1640 آماده ( غنی شده با سرم گاوی ) جایگزین می شود و سلول ها به صورت سوسپانسیون در آورده می شوند و به فلاسک کشت سلولی حاوی محیط RPMI 1640 منتقل شده در دمای 37 و رطوبت 95 درصد و 5 درصد CO2 انکوبه می شوند. این رده سولی بصورت سوسپانسیون رشد می کند. یک روز بعد، مقداری از سوسپانسیون را برداشته ، در لام همو سیتومتر شمارش می شوند و تعداد سلول در هر میلی لیتر تعیین می شود. در ادامه، در فلاسک های T-25 حاوی محیط کشت RPMI 1640 ، هر کدام 400هزار سلول ، کشت داده می شود و در دمای 37 و رطوبت 95 در صد و 5 درصد CO2 برای 24 ساعت انکوبه می شوند. سپس آن را هاروست می کنیم و استخراج DNA بر روی این سلولها انجام می گیرد. و جهت بررسی الگوی متیلاسیون ژن BAX و BCL-2 رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF- CEMهمراه و بدون تیمار با عصاره گیاه دارویی رزوراترول و داروی پردنیزولون با استفاده از تکنیک PCR اختصاصی متیلاسیون (MSP ) استفاده میشود.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 62016 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی تغییرات اپی ژنتیک ژنBAX و BCL-2 در رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM تیمار شده با رزوراترول و پردنیزولون |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of Epigenetic changes in BAX and BCL-2 genes in CCRF-CEM cell line treated with resveratrol and prednisolon |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مطالعات سلولی- مولکولی و ایمونولوژیک در زمینــه تولید واکسن |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | مطالعه حاضر تا حالا بر روی سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد انجام نشده است. |
| اهداف اختصاصی | بررسی الگوی متیلاسیون ژن BAX و BCL-2 دررده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد بدون تیمار با عصاره گیاه دارویی رزوراترول و داروی پردنیزولون -بررسی اثر اپی ژنتیک عصاره گیاهی رزوراترول بر متیلاسیون ژن BAX و BCL-2 دررده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF- CEM با استفاده از تکنیک MSP -بررسی اثر اپی ژنتیک داروی پردنیزولون بر متیلاسیون ژن BAX و BCL-2 دررده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF- CEM با استفاده از تکنیک MSP -بررسی اثر اپی ژنتیک داروی پردنیزولون و عصاره گیاه دارویی رزوراترول با هم بر متیلاسیون ژن BAX و 2-BCL در سلول سرطانی CCRF-CEM با استفاده از تکنیک MSP |
| چکیده انگلیسی طرح | این تحقیق کلا بصورتinvitro صورت می گیرد و کل بررسی ها بر روی سلول سرطانی CCRF-CEM انجام خواهد گرفت. رده ی سلولی CCRF-CEMاز بانک سلولی پاستور ایران تهیه می شود . ویال کرایو در بن ماری 37 درجه قرار داده شده و بعد دفریز شدن، با دور 500 برای 5 دقیقه سانتریفیوژ می شود و مایع رویی برداشته شده و با کمی محیط کشت RPMI 1640 آماده ( غنی شده با سرم گاوی ) جایگزین می شود و سلول ها به صورت سوسپانسیون در آورده می شوند و به فلاسک کشت سلولی حاوی محیط RPMI 1640 منتقل شده در دمای 37 و رطوبت 95 درصد و 5 درصد CO2 انکوبه می شوند. این رده سولی بصورت سوسپانسیون رشد می کند. یک روز بعد، مقداری از سوسپانسیون را برداشته ، در لام همو سیتومتر شمارش می شوند و تعداد سلول در هر میلی لیتر تعیین می شود. در ادامه، در فلاسک های T-25 حاوی محیط کشت RPMI 1640 ، هر کدام 400هزار سلول ، کشت داده می شود و در دمای 37 و رطوبت 95 در صد و 5 درصد CO2 برای 24 ساعت انکوبه می شوند. سپس آن را هاروست می کنیم و استخراج DNA بر روی این سلولها انجام می گیرد. و جهت بررسی الگوی متیلاسیون ژن BAX و BCL-2 رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF- CEMهمراه و بدون تیمار با عصاره گیاه دارویی رزوراترول و داروی پردنیزولون با استفاده از تکنیک PCR اختصاصی متیلاسیون (MSP ) استفاده میشود. |
| کلمات کلیدی | 1) آپوپتوز: مرگ برنامه ریزی شده سلول: یکی از دو مکانیسمی است که منجر به حذف و از بین رفتن فیزیکی سلول می شود. این نوع مرگ سلولی به طور مستقیم تحت کنترل ژنتیک میباشد. 2) اپی ژنتیک: واژه ای است برای اشاره به هر عاملی که بدون تغییر در ژنوتیپ ، بر فنوتیپ یک سلول و یا حتی یک فرد اثر میگذارد. 3) رده سلولی لوکمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM : رده ی سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد نوع T cellاولیه مقاوم به درمان 4) توارث اپی ژنتیک: نوعی از الگوی توارثی است که در آن تغییرات ژنهای هسته ای و یا کروموزومها سبب تغییر بیان ژنها میشود.ولی این تغییرات در بروز ژن معمولا پایدار نبوده و در طی گذشت چندین نسل باز دچار تغییراتی شده و احتمالا به حالت اولیه باز میگردد. 5) BAX و BCL-2: از جمله ژن هایی هستند که در فرایندآپوپتوز(مرگ برنامه ریزی شده) نقش دارد. 6) نواحی CpG : قطعاتی از DNA تکراری که معمولا در نزدیکی انتهای ژنهای خانه پا (house keeping gene) قرار دارند و غنی از دی نوکلئوتیدهای 5'_ CG_3' بوده و نوکلئوتید سیتوزین در این توالیها معمولا متیله شده است. 7) Resveratrol : یک فیتوآلکسین یا پلی فنول طبیعی که در بعضی گیاهان و میوه ها چون انگور یافت می شود و اثرات ضد سرطانی دارد. 8) پردنیزولون: داروی کورتیکواستروئیدی که برای درمان بیماری های مختلفی مثل، آسم، کولیت السراتیو، آرتریت روماتوئید، لوپوس اریتماتوس، هپاتیت اتوایمیون و لوسمی لنفوبلاستیک حاد مورد استفاده قرار می گیرد. 9) MDS (اختلالات میلودیسپلاستیک) : طیفی از بدخیمی کلونال سلول مادر خونساز هستند که با کاهش یک یا چند رده سلولی همراه با تغییرات دیسپلاستیک و خون سازی غیره موثر در یک یا چند رده ی خونی بروز می کند و با گذشت زمان قابلیت تبدیل به لوسمی میلوبلاستیک حاد دارند،البته میزان خطر برای تبدیل به لوسمی در حالات گوناگون این سندرم متفاوت است |
| ذینفعان نتایج طرح | با پی بردن به مکانیسک های دقیق داروی پردنیزولون و رزوراترول میتوان به عملکرد دقیق و بهبود این عملکرد در بیماران کمک کرد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مجید فرش دوستی حق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| میلاد زادی حیدرآباد | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر الگوی متیلاسیون ژن های تنظیم کننده مرک سلولی در تیمار سلولهای سرطان خون با داروهای گیاهی مورد ارزیابی قرار گرفت.متن خبر تنظیم بیان ژن ها از طریق اپی ژنتیک بخصوص تنظیم از طریق متیلاسیون یکی از جنبه های کلیدی تنظیم بیان ژن ها و عملکرد ژن ها مطرح می باشد که این پدیده تنظیمی در مورد ژنهای تنظیم کننده مسیر آپوپتوز نیز صدق می کند. که این پدیده تنظیمی اپی ژنتیک در سلولهای سرطانی می تواند دستخوش تغییر تنظیمی گردد و سبب القا مقاومت به آپوپتوز در برابر عوامل شیمی درمانی و ضد سرطانی قرار گیرد. چون رزوراترول دارای سمیت کمی در in vivoاست و دارای اثرات ضد سرطانی میباشد و اثر آن انتخابی است یعنی روی سلولهای خونی نرمال و پیش سازهای مغز استخوان اثر مضری ندارد، آن را به یک مادهی ضد سرطانی بسیار مفید تبدیل کرده است. حضور رزوراترول و پرنیزولون باعث کاهش روند رشد تومور و توقف تومور میشود. تحقیق مذکور تا الان بر سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک انجام نشده است. در تحقیق قبلی مان نشان دادیم که رزوراترول و پرنیزولون با تغییر در بیان ژن های BAX و BCL-2سبب القا آپوپتوز در سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک حاد CCRF-CEM می شود. در این تحقیق الگوی متیلاسیون ژن های BAX و BCL-2 مورد ارزیابی قرار گرفت. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر داروهای گیاهی از طریق آپوپتوز سلولهای سرطان خونی و بدون تغییر متیلاسیون اعمال اثر می کنندمتن خبر درک صحیح و دقیق مکانیسم های مرتبط با مقاومت به گلوکوکورتیکوئیدها (پردنیزولون) در بیماران لوسمی لنفوبلاستیک حاد از جمله درک جامع و دقیق از تغییرات اپی ژنتیک می تواند راهکار و استراتژی جدیدی برای غلبه بر مقاومت به گلوکوکورتیکوئیدها و بهبود نتایج باشد. با شناخت کامل مکانیسم های مقاومت داروئی می توان داروهایی طراحی کرد که بتواند بر این مقاومت داروئی غلبه کرد و در صورت نتایج قابل توجه متخصصین می توانند با کابرد داروهایی موثر و بدون عوارض جانبی سبب بهبود بیماران شود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
