تعیین میزان بیان ژ ن talin2؛ MMP2mir-194,mir-106b, در رده سلولی MDA-MB-231 بعد از تیمار با DHA
Evaluationof mir-194،mir-106b and talin2,،MMP2 expression in breast cancer cell lines, MDA-MB-231 after treatment with DHA
مجریان: توحید کاظمی
خلاصه روش اجرا: رده سلولی MDA-MB-231در محیط کشت RPMI1640کشت داده می شوند. برای بدست آوردن غلظتهای بهینه DHA انجام میشود. به این صورت که در پلیتهای 96 خانه ای، در چاهکهای مختلف تعداد مشخصی سلول را با غلظتهای مختلف از DHA مجاور کرده و بعد از 24 ساعت انکوباسیون محلول رویی را خارج می کنیم. بعد از 4 ساعت انکوباسیون در 37 درجهشسانتیگراد و بر اساس رنگ تولید شده و سنجش آن توسط دستگاه الایزاریدر در طول موج nm570، نتیجه گزارش میشود. به منظور بررسی میزان بیان miRNA-194 و talin2در ردههای سلولی، RNA کل سلولها(Total RNA) توسط کیت استخراج شده، از روی پرایمرهای اختصاصی و طبق دستورالعمل کیت، cDNA سنتز شده و سپس با روش q RT-PCR ارزیابی میگردد. در این روش برای اندازه گیری بیان miR-194 و talin2 از U6 به عنوان House keeping gene استفاده میشود.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 61884 |
| عنوان فارسی طرح | تعیین میزان بیان ژ ن talin2؛ MMP2mir-194,mir-106b, در رده سلولی MDA-MB-231 بعد از تیمار با DHA |
| عنوان لاتین طرح | Evaluationof mir-194،mir-106b and talin2,،MMP2 expression in breast cancer cell lines, MDA-MB-231 after treatment with DHA |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | سرطان سینه دومین عامل مرگ و میربعد از بیماری های قلبی عروقی است که با توجه به شیوع سرطان سینه وآمارمرگ ومیر ناشی ازآن ،درمان وتشخیص این بیماری حائز اهمیت است ،بطوری که تقریبا یک سوم بیماران مبتلا به سرطان سینه با وجود درمان های متعدد ی که دردسترس است به علت عوارض ناشی ازاین بیماری فوت می¬کنند. علیرغم پیشرفت های اخیردر درمان سرطان سینه،محدودیت هایی وجود داردکه منجربه درمان ناموفق می¬گردد. امگا-3مکملی است که دردرمان های ترکیبی کاربرد دارد،این ترکیب ازDHAوEPA تشکیل شده استDHA بطور چشمگیری باتحریک ترشح وتغییردرmiRNAهایا اگزوزومی سلولهای سرطان سینه دردرمان آن نقش دارد. دراکثرسرطان¬ها الگوی بیان تعداد زیادی ازmiRNAدچارتغییرات گسترده¬ای می¬شود.و هدف از این مطالعه بررسی تغییر میزان بیان mir-194 و talin2در رده سلولی سرطان سینه,MDA-MB-231 پس از تیمار با DHA می باشد. متاستاز اغلب یک فرایند نهایی و کشنده در پیشرفت تومورهای توپور می باشد. تهاجم داخلی سلول های توموری،زنده ماندن در گردش خون، تهاجم بیش از حد به ارگان های دور، آنژیوژنز و رشد غیرقابل مهار باعث فرایند متاستاز می شوند. این مولکول ها برای طی کردن این مراحل به بافت خاص نیازمند هستند. در حقیقت تمایلی که تومورها به ارگان خاص دارند از قبیل سرطان سینه که به استخوان و ریهمتاستاز می دهد از یک قرن پیش اشاره شده است. شواهد تجربی برای متاستاز سرطان سینه به بافت های خاص از جمله استخوان و ریه وجود دارد که مرتبط با یک سری ژن های خاص می باشد.ریه ها و استخوان محل های رایج برای متاستاز سرطان سینه می باشد. متاستاز به این محل ها از نظر تکامل سلول های سرطانی، درمان ، میزان ابتلا و مرگ و میر متفاوت است. دریک مطالعه , مشخص شده است که بسیاری از ژن هایی که در متاستازبه ریه نقش دارد, غالبا در جمعیت های رده سلولی MDA-MB-231بیان می شود. این ژن ها محصولات خارج سلولی را کد می کنند که باعث رشد و بقای سلول های توموری می شود. از جمله این ژن ها: HER/ERbB (لیگاند گیرنده اپی رگیولین)، کموکاین CXCL1 وگیرنده مولکول چسبان ROBO1 و ماتریکس پروتئاز MMP1و آنزیم خارج سلولی COX2 و عوامل تنظیم کننده رونویسی ID1. تغییر در الگوی بیان این ژن ها ارتباط تنگاتنگی با متاستاز ریه دارد. از سوی دیگر,اغلب ژن های که باعث متاستاز استخوان می شوند پروتئین های سطحی و ترشحی را کد می کنند. از جمله این ژن ها اینترلوکین 11((IL11،CTGF ،IGFB، ماتریکس متالوپروتئاز1(MMP1)، کموکاین CXCR4،هستند که درافزایش آنژیوژنز و متاستاز استخوان نقش دارند. مطالعات نشان داده است که ژن هدف mir-194 ، talin2می باشدکه کد کننده پروتئین اسکلت سلولی است..mir-194اتصال مستقیم با3`UTR، ژن talin2 دارد. با توجه به بررسی هایی که از نظر عملکرد مولکولی mir-194در سرطان سینه انجام گرفته است، افزایش بیان mir-194به طو چشمگیر باعث مهار مهاجرت و تهاجم سلول های سرطان سینه را که افزایش بیان HER2 داشته اند می شود. درمان با trastuzumab که یک مونوکلونال آنتی بادی انسانی شده بر ضد دومن خارج سلولی انکوپروتئین HER2می باشد. و به نظر می رسد تاثیرات ضد توموری خود را از طریق مکانیسم های مختلف بر رویmiRNA اعمال می کند. با بررسی هایی که انجام گرفته است trastuzumabسبب القا mir-194 و targetجدید talin2 در سلول های سرطان سینه که افزایش بیان 2HERدارند می شوند.درمان با trastuzumab باعث افزایش بیان mir-194 و کاهش بیان talin2 و در نتیجه مهار مهاجرت و تهاجم سلول های سرطان سینه که افزایش بیان HER2 داشته اند می شود. یکی دیگر از مارکرهایی که در متاستاز سرطان سینه مورد بررسی قرار گرفته است ماتریکس متالوپروتئاز2(MMP2) می باشد. بر اساس آنالیزهایی که بر روی ژن و پروفایل miRNA انجام گرفته است ,MMP2هدفمستقیم mir-106b می باشد. افزایش بیان MMP2 و کاهش بیان mir-106b باعث متاستاز استخوان در بیماران سرطان سینه می شود. همچنین به اثبات رسیده است که افزایش بیان MMP2 در بافت توموری فاکتور خطر پذیری است برای متاستاز استخوان در بیمارانی که مبتلا به سرطان سینه می باشند.mir-106bقادر است با سرکوب مهاجرت و تهاجم و تکثیر تومور به طور مستقیم MMP2 را مهار کند. و هم چنین بر روی فعال شدن مسیر سیگنالینگERK نیز تاثیر بگذارد. |
| اهداف اختصاصی | تعیین میزان بیان ژ ن talin2؛mir-194,mir-106b,MMP2 در رده سلولی MDA-MB231 قبل و بعد از تیمار با DHA -مقایسه میزان بیان پروتئینtalin2 قبل و بعد از تیماربا DHA |
| چکیده انگلیسی طرح | رده سلولی MDA-MB-231در محیط کشت RPMI1640کشت داده می شوند. برای بدست آوردن غلظتهای بهینه DHA انجام میشود. به این صورت که در پلیتهای 96 خانه ای، در چاهکهای مختلف تعداد مشخصی سلول را با غلظتهای مختلف از DHA مجاور کرده و بعد از 24 ساعت انکوباسیون محلول رویی را خارج می کنیم. بعد از 4 ساعت انکوباسیون در 37 درجهشسانتیگراد و بر اساس رنگ تولید شده و سنجش آن توسط دستگاه الایزاریدر در طول موج nm570، نتیجه گزارش میشود. به منظور بررسی میزان بیان miRNA-194 و talin2در ردههای سلولی، RNA کل سلولها(Total RNA) توسط کیت استخراج شده، از روی پرایمرهای اختصاصی و طبق دستورالعمل کیت، cDNA سنتز شده و سپس با روش q RT-PCR ارزیابی میگردد. در این روش برای اندازه گیری بیان miR-194 و talin2 از U6 به عنوان House keeping gene استفاده میشود. |
| کلمات کلیدی | microRNA : RNA کوچک غیر کد شونده است که نقش تنظیم کنندگی در پروسههای سلولی را دارد. DHA : یک اسیدچرب امگا-3 است که در بدن ازآلفا لینولئیک اسید سنتز می شود و همچنین می توانداز طریق رژیم غذایی شیر مادر و روغن ماهی به دست می آید . ساختار این ترکیب یک کربوکسیلیک اسید 22 کربنه با 6 پیوند دوگانه است . |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| توحید کاظمی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| مهسا جوادیان | دانشجوی مالک پایان نامه |
| داریوش شانه بندی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| حامد محمدی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| بهزاد برادران | مشاور |
| مسعود دارابی امین | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر مکمل غذایی اسید چرب امگا شش در جلوگیری از انتشار سلول های سرطانی سینه مفید است.متن خبر یکی از مشکلات عمده در مورد سرطان سینه و افراد مبتلا، انتشار سلول های سرطانی به مناطقی از بدن است که متفاوت از محل اصلی رشد و تکثیر سلول های سرطانی است. درمان چنین مواردی از سرطان بعضا سخت بوده و منتج به نتیجه مطلوب نمی گردد. لذا استفاده از درمان های ترکیبی و ترجیحا مکمل های غذایی در کنار داروهای مرسوم برای در مان سرطان مطلوب کادر درمانی می باشد. نتیجه مطالعه حاضر نشان داد که استفاده از اسید چرب امگا شش با نام DHA در کنار داروی شیمی درمانی تاکسول موجب مهار گسترش سلول های سرطانی بدخیم سرطان سینه می گردد. لذا این ترکیب به عنوان مکمل دارویی مناسب در درمان سرطان سینه می تواند استفاده گردد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر اثرات سینرژیسم ضد متاستازی DHA و تاکسول بر زیر نوع سه گانه منفی سرطان سینهمتن خبر زیر نوع سه گانه منفی (triple negative) سرطان سینه نوعی از سرطان است که دارای خاصیت متاستازی بالا می باشد و معمولا جواب مناسب به درمان های رایج نمی دهد. نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که اسید چرب DHA و داروی تاکسول اثرات سینرژیک در کاهش بیان ژن ها و microRNA های متاستازی و افزایش بیان ژن ها و mircroRNA های ضد متاستازی دارند. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
