بررسی اثر جایگزینی miR-145 در مهار رشد و متاستاز سلول های سرطانی معده
miR-145 replacement effect on growth and metastasis in gastric cancer cell line
مجریان: بهزاد برادران
خلاصه روش اجرا: ابتدا سلول های سرطانی معده در محیط کشت RPMI-1640 حاوی 10% FCS ، تحت شرایط 5% CO2 و دمای 37ₒc کشت داده می شوند، سپس ژن miR-145 همراه وکتور و معرف Lipofectamin2000 به محیط کشت اضافه می گردد، و بعد از انکوباسیون میزان بیان miR-145 و ژن های هدف مورد نظر بوسیله qRT-PCR ارزیابی می شود. برای بررسی میزان مهار رشد و تکثیر سلول های سرطانی معده، بعد از ترانسفکت miR-145 در محیط کشت و گذشت مدت زمان لازم ، محیط کشت قبلی با محیط کشت حاوی MTT تعویض شده و بعد از انکوباسیون برای اندازه گیری میزان رشد و تکثیر سلول ها ، جذب نوری در طول موج 570nm توسط دستگاه ELISA Plate Reader قرائت می گردد. مهاجرت و متاستاز سلولهای سرطانی بعد از ترانسفکت miR-145 بوسیله تکنیک Wound healing assay بررسی می شود، در این روش 105× 5 سلول ترانسفکت شده با miR-145 در محیط کشت انکوبه و با نوک پیپت شیاری در محیط کشت ایجاد می گردد که بعد از شستشوی محیط با بافر PBS و انکوباسیون، از محل شیار توسط میکروسکوپ نوری عکسبرداری می شود.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 61694 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر جایگزینی miR-145 در مهار رشد و متاستاز سلول های سرطانی معده |
| عنوان لاتین طرح | miR-145 replacement effect on growth and metastasis in gastric cancer cell line |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | ایمونوتراپی بیماریهای شایع با استفاده از ژن درمانی |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | سرطان معده یکی از رایج ترین انواع سرطان ها می باشد که در آسیای شرقی بیشترین شیوع را دارد، سالیانه باعث مرگ حدود یک میلیون نفر در سرتاسر جهان می گردد و تاکنون درمان قطعی برای آن پیدا نکرده اند. امروزه در سرتاسر جهان تحقیقات گسترده ای به منظور درمان و کنترل روند بیماری انجام می گیرد ولی همچنان مکانیسم های مولکولی دقیق این بیماری شناخته نشده اند، مطالعات انجام گرفته شواهد محکمی دال بر ارتباط بین miRNA و سرطان معده می باشد. miRNAها مولکول های کوچک 24-21 نوکلئوتیدی هستند که در تنظیم بیان ژن و کنترل مسیرهای متابولیسمی و سلولی مانند تغییرات اپی ژنتیکی، رشد و تکثیر سلولی، متاستاز و آپوپتوز نقش مهمی دارند. و مطالعات ژنتیکی در بیماران مبتلا به این سرطان هر روز ارتباط بین سرطان معده و miR-145 را پررنگ تر می کند. miR-145 بعنوان یک miRNA تومورساپرسور می باشد که باعث تنظیم بیان ژن های مختلفی می شود، در سلول های سرطانی معده میزان بیان miR-145 بشدت کاهش می یابد و تنظیم بیان ژن های هدف دچار اختلال می گردد، بنابراین می تواند بعنوان یک هدف درمانی مطرح گردد و می توان با بکارگیری تکنیک miRNA Replacement Therapy میزان بیان miR-145 را افزایش داد، |
| اهداف اختصاصی | ارزیابی میزان بیان miR-145 و ژن ‏های ,c-Myc, k-RAS و MMP-9 پس از جایگزینی miR-145 در رده سلولی MKN-45 سرطان معده با تکنیک Quantitative Real-time PCR. -بررسی میزان تکثیر و رشد سلول‏ های سرطانی، پس از جایگزینی miR-145 در رده سلولی MKN-45 سرطان معده با روش MTT -بررسی مهار تها‏جم سلول‏ های سرطانی­، پس از جایگزینی miR-145 در رده سلولی MKN-45 سرطان معده با روش Wound healing assay |
| چکیده انگلیسی طرح | ابتدا سلول های سرطانی معده در محیط کشت RPMI-1640 حاوی 10% FCS ، تحت شرایط 5% CO2 و دمای 37ₒc کشت داده می شوند، سپس ژن miR-145 همراه وکتور و معرف Lipofectamin2000 به محیط کشت اضافه می گردد، و بعد از انکوباسیون میزان بیان miR-145 و ژن های هدف مورد نظر بوسیله qRT-PCR ارزیابی می شود. برای بررسی میزان مهار رشد و تکثیر سلول های سرطانی معده، بعد از ترانسفکت miR-145 در محیط کشت و گذشت مدت زمان لازم ، محیط کشت قبلی با محیط کشت حاوی MTT تعویض شده و بعد از انکوباسیون برای اندازه گیری میزان رشد و تکثیر سلول ها ، جذب نوری در طول موج 570nm توسط دستگاه ELISA Plate Reader قرائت می گردد. مهاجرت و متاستاز سلولهای سرطانی بعد از ترانسفکت miR-145 بوسیله تکنیک Wound healing assay بررسی می شود، در این روش 105× 5 سلول ترانسفکت شده با miR-145 در محیط کشت انکوبه و با نوک پیپت شیاری در محیط کشت ایجاد می گردد که بعد از شستشوی محیط با بافر PBS و انکوباسیون، از محل شیار توسط میکروسکوپ نوری عکسبرداری می شود. |
| کلمات کلیدی | سرطان معده : نوعی از سرطان که بعلت رشد بدون کنترل سلول های بدخیم در معده ایجاد می شود. microRNA: RNA های کوچک غیرکدکننده به طول 24-21 نوکلئوتید که در تنظیم بیان ژن دخالت دارند. microRNA replacement therapy : تکنیکی است که در آن ژن microRNA تومور ساپرسور را توسط یک وکتور وارد سلول سرطانی می کنند. MMP-9: ژن Matrix metalloproteinase در متاستاز و آنژیوژنز سلول های سرطانی نقش دارد. K-RAS :V-Ki-ras Kristen rat sarcoma viral oncogene Homolog در تکثیر و رشد سلولی نقش دارد. c-Myc :Avian myeloblastosis virus oncogene cellular homology در تکثیر و رشد سلولی نقش دارد. apoptosis: آپوپتوز یا مرگ برنامه ریزی شده سلول بعنوان روش حفاظت شده، تحت کنترل ژن هاست که به منظور حذف سلول های ناخواسته و غیر ضروری موجودات زنده بکار می رود. Metastasis: فرایندی پیچیده و چند مرحله ای است که منجر به گسترش سرطان در مکان های دورتر از جایگاه اولیه تومور می شود. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیمار |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| بهزاد برادران | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| طاهره زینلی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر جایگزینی miR-145 باعث مهار رشد و مهاجرت در رده سلولی سرطان معده MKN-45 می شود.متن خبر سرطان معده سومین علت مرگ¬ بر اثر سرطان می¬باشد اما بعلت اینکه این سرطان یک بیماری چند ژنی می¬باشد که پیشرفت¬های درمانی چشم¬گیری نداشته است. miR¬-145¬ بعنوان miRNA تومورساپرسور در اکثر بافت¬های نرمال و مایعات بدن بیان می¬شود اما در انواع سرطان¬های مختلف مانند سرطان معده بیان ندارد یا دچار کاهش بیان می¬شود. در این مطالعه، هدف ما بازگردانی سطح بیان miR-145 و بررسی اثرات مهاری آن در رشد و متاستاز سلول¬های MKN-45 می¬باشد.
نتایج حاکی از آن است که جایگزینی miR-145 باعث بازگردانی و افزایش سطح بیان miR-145 می¬شود و بدین ترتیب این miRNA می¬تواند مسیرهای انکوژنیک را مانند حالت طبیعی در سلول¬های سرطانی کنترل و تنظیم نماید. بنابراین روش جایگزینی miR-145 می¬تواند بعنوان یک روش نوین جهت درمان سرطان معده مطرح شود. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر جایگزینی miR-145 باعث مهار رشد و مهاجرت در رده سلولی سرطان معده MKN-45 می شود.متن خبر سرطان معده سومین علت مرگ¬ بر اثر سرطان می¬باشد اما بعلت اینکه این سرطان یک بیماری چند ژنی می¬باشد که پیشرفت¬های درمانی چشم¬گیری نداشته است. miR¬-145¬ بعنوان miRNA تومورساپرسور در اکثر بافت¬های نرمال و مایعات بدن بیان می¬شود اما در انواع سرطان¬های مختلف مانند سرطان معده بیان ندارد یا دچار کاهش بیان می¬شود. در این مطالعه، هدف ما بازگردانی سطح بیان miR-145 و بررسی اثرات مهاری آن در رشد و متاستاز سلول¬های MKN-45 می¬باشد.
نتایج حاکی از آن است که جایگزینی miR-145 باعث بازگردانی و افزایش سطح بیان miR-145 می¬شود و بدین ترتیب این miRNA می¬تواند مسیرهای انکوژنیک را مانند حالت طبیعی در سلول¬های سرطانی کنترل و تنظیم نماید. بنابراین روش جایگزینی miR-145 می¬تواند بعنوان یک روش نوین جهت درمان سرطان معده مطرح شود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
