بررسی اثر عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی بر رفتار شبه اضطرابی و افسردگی در مدل استرس مزمن مهاری موش سوری
Evaluation of Echium amoenum L. Hydro-alcoholic Extract Effect on Anxiety , Depressive-Like Behaviors in a Mice Model of Chronic Restraint Stress
مجریان: سید مصطفی اعرج خدایی , محمدعلی تربتی
خلاصه روش اجرا: اندام هوایی گیاه گل گاوزبان پس از جمع آوری در اواسط فصل گل دهی در شرایط آزمایشگاهی خشک می شوند. پس از پودرکردن گیاه توسط آسیاب برقی، عصاره گیری به روش ماسراسیون (خیساندن) توسط حلال اتانول 70% با هم زدن های مکرر طی چند روز متوالی در دمای آزمایشگاه انجام می گردد. پس از اتمام عصاره گیری، عصاره حاصل را صاف نموده و توسط دستگاه روتاری اواپراتور در دما و فشار پایین خشک و توزین می شود. در نهایت، عصاره هیدروالکلی حاصله به روش کروماتوگرافی لایه نازک و نیز با استفاده از معرف های مختلف به لحاظ تأیید حضور و یا عدم حضور گروه های مختلف ترکیبات شیمیایی مورد ارزیابی قرار می گیرد. سنجش محتوای تام ترکیبات فنولی به روش فولین-سیوکالتو و ارزیابی اسپکتروفوتومتری انجام می گیرد و فعالیت آنتی اکسیدانی عصاره ها با استفاده از درصد مهار رادیکال آزاد DPPH اندازه گیری می شود. عصاره هیدروالکلی تهیه شده پس از استانداردسازی با ماده مؤثره رزمارینیک اسید به روش HPLC ، زیردمای 4 درجه سانتیگراد در یخچال نگهداری خواهد گردید. این مطالعه بصورت تجربی و آزمایشگاهی بر روی حیوانات آزمایشگاهی در مرکز تحقیقات اعصاب دانشگاه علوم پزشکی تبریز انجام خواهد گردید. در مطالعه حاضر از 75 عدد موش کوچک آزمایشگاهی نر از نژاد خالص بالب سی (balb/c) در محدوده وزنی 30-28 گرم استفاده خواهد شد. عدم وجود هرگونه بیماری و رفتار غیرعادی به عنوان معیار ورود و بروز هر گونه بیماری و جراحت در طول دوره مطالعه به عنوان معیارهای خروج در نظر گرفته خواهد شد. موشها به 5 گروه 15 تائی، شامل گروههای زیر تقسیم خواهند شد. 1-گروه کنترل: شامل موش هایی خواهد بود که به مدت 21 روز از طریق خوراکی نرمال سالین با حجم 10 میلی لیتر به ازای هر کیلوگرم وزن بدن را دریافت خواهند کرد. 2-استرس مزمن: شامل موش هایی خواهد بود که به منظور القای رفتار شبه افسردگی و اضطرابی به مدت 21 روز تحت استرس مزمن مهاری قرار می گیرند و روزانه 2/ میلی لیتر نرمال سالین از راه خوراکی دریافت خواهند کرد. القای استرس مزمن مهاری برای القای استرس مزمن مهاری، موشهای سوری در یک لوله استوانهای شکل (با قطر 3 و طول 10 سانتیمتر) قرار داده میشوند. این تیوب با ممانعت از حرکت حیوان، استرس مزمن مهاری را القاء میکند. برای تهویه داخل لوله، منافذی به قطر 2 میلیمتر در بدنه لوله ایجاد می شود و هر موش به طور جداگانه و هر روز 6 ساعت در درون این لوله به مدت 21 روز بصورت ایزوله نگه داری می شوند. 5-3-استرس مزمن دریافت کننده دوزهای سهگانه عصاره هیدرو الکلی گیاه: شامل 3 گروه مختلف از موش هایی خواهد بود که در طول دوره القای استرس مزمن مهاری دوزهای بالا، متوسط، پایین عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی که به مدت 21 روز دوز عصاره براساس مقادیر رزمارینیک اسید موجود در آن تعیین خواهد شد. یک روز بعد از پایان دوره القای استرس، آزمونهای رفتاری شامل آزمونهای ماز بعلاوهای مرتفع شده و معلق سازی از دم به ترتیب برای ارزیابی رفتارهای اضطرابی و افسردگی انجام خواهد شد و به منظور سنجش سطح اضطراب، مدل رفتاری تست میدان باز مورد استفاده قرار خواهد گرفت. بعد از پایان آزمون رفتاری، حیوانات با داروهای کتامین و زایلازین بیهوش خواهند شد، سر آنها قطع شده و بافت مغز استخراج خواهد شد. بعد از انجماد در نیتروژن مایع، به فریزر منهای 70 منقل شده در ادامه شاخصهای التهابی در این نمونهها ارزیابی میشوند همچنین در این مرحله با خونگیری از بطن چپ میزان کورتیکوسترون و آنزیم های کبدی سرمی موش اندازه گیری خواهد شد. شاخصهای التهابی شامل اینترلوکین6، اینترلوکین1،TNF-a و NFkB و استرس اکسیداتیو شامل TAC، MDA، GPx، SOD بر اساس دستورالعمل کیتهای تجاری مربوطه اندازه گیری خواهد شد. متعهد می گردد، در این تحقیق کلیه پروتکل های کار روی حیوانات آزمایشگاهی مورد تأئید کمیته نظارت بر حقوق حیوانات آزمایشگاهی قرار خواهد گرفت.در طول مطالعه، تمام اصول ایمنی و عواملی که می تواند منجر به ایجاد آلودگی در آزمایشگاه و محیط زیست و افراد شود کاملا رعایت خواهد شد.کلیه جوانب و ملاحظات اخلاقی بیهوشی و نمونه گیری از حیوانات رعایت خواهد شد. پس از بیهوشی و نمونه برداریمغز حیوانات، لاشه آنها در داخل کیسه های پلاستیکی مجزا قرار گرفته و از طریق سیستم معدوم سازی مرکز تحقیقات معدوم خواهد شد. همچنین، وسایل مصرفی که احتمال ایجاد آلودگی بیولوژیک دارند بعداز بستن درب و قرار دادن در پلاستیک بسته شده اتوکلاو و سپس به ظرف زباله مخصوص مواد آزمایشگاهی منتقل خواهد شد. پسماندهای تیز و برنده مانند سرسوزن، وسایل شیشه ای شکسته، تیغ اسکالپل، نوک سمپلر و غیره در ظروف ایمن (Safety Box) قرار گرفته و به طریق بهداشتی دفع خواهد شد. نگهداری مواد شیمیایی و داروها مطابق با اطلاعات موجود در برگه شناسایی ایمنی مواد شیمیایی یاMaterial Safety Data Sheet = MSDS خواهد بود. ظروف و وسایل غیریکبارمصرف استفاده شده مربوط به محلولهای شیمیایی و محیط کشت سلولی مانند بطریها، بشر، ارلن، لوازم فلزی... در سینک مخصوص مواد شیمیایی شستشو خواهد شد. در موقع جمع آوری، حمل و نقل و دفع پسماندها از وسایل و پوشش های حفاظتی الزامی استفاده خواهد شد و جمع آوری و دفع پسماندها طبق برنامه زمانبدی مشخص و متناسب با میزان تولید پسماند بوده و به طور روزانه در زمان کار انجام خواهد پذیرفت. کلیه مواد اوریجینال مورد استفاده از طریق نمایندگیهای معتبر وارد کننده مواد شیمیایی و دارویی و نمایندگیهایSigma در سایر کشورها تهیه و خریداری خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 61431 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی اثر عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی بر رفتار شبه اضطرابی و افسردگی در مدل استرس مزمن مهاری موش سوری |
| عنوان لاتین طرح | Evaluation of Echium amoenum L. Hydro-alcoholic Extract Effect on Anxiety , Depressive-Like Behaviors in a Mice Model of Chronic Restraint Stress |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | مراقبت در بیماریهای شایع روانپزشکی با تاکید بر افسردگی و اختلالات اضطرابی، اختلال بیش فعالی و اوتیسم |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 10 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | افسردگی یکی از شایعترین اختلالات خلقی است.این بیماری بعـد از بیمـاریهـای قلب و عروق دومین عامل بیماری و نـاتوانی افـراد است و عمده ترین علت افت کـارایی در کشـورهای صنعتی محسوب میشود (6, 7). بر اساس گزارش WHO، در حال حاضر٣٠٠ میلیون نفر در جهان دچار افسردگی هستند. افراد متأثر از بحرانهای انسانی و یا جنگها و نیزکسانی که تحت تأثیر نیروی قهریه آواره شده اند، در برابر این بیماری آسیب پذیرتر میباشنداختلالات افسردگی یکی از شایعترین اختلالات روانپزشکی و از علل شایع ناتوانی ها و مرگ زودرس هستند. این اختلالات همچنین باعث افزایش هزینه های اقتصادی تحمیل شده به فرد و جامعه می گردند(8).لازم به ذکر است دراین مطالعه برای اولین بار مکانیسم های مولکولی را بررسی خواهیم کرد. |
| اهداف اختصاصی | تعیین میزان عصاره خشک در اندام هوایی گیاه گل گاوزبان ایرانی بومی آذربایجان -تعیین مقادیر محتوای تام ترکیبات فنولی عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی -تعیین میزان توانآنتی اکسیدانی عصاره هیدروالکلی گل گاوزبان ایرانی به روش DPPH -ارزیابی تاثیر دوزهای مختلف عصاره هیدرو الکلی گل گاوزبان ایرانی بر شاخص‌های التهابی ناشی از استرس مزمن مهاری -ارزیابی تاثیر دوزهای مختلف عصاره هیدرو الکلی گل گاوزبان ایرانی بر رفتار شبه‌افسردگی ناشی از استرس مزمن مهاری -ارزیابی تاثیر دوزهای مختلف عصاره هیدرو الکلی گل گاوزبان ایرانی بر اضطراب ناشی از استرس مزمن مهاری -ارزیابی تاثیر دوزهای مختلف عصاره هیدرو الکلی گل گاوزبان ایرانی بر شاخص‌های آنزیمهای کبدی پس از استرس مزمن مهاری |
| چکیده انگلیسی طرح | pThe aerial parts of the borage plant are dried in laboratory conditions after collection in the middle of the flowering season. After the plant is powdered using an electric grinder, extraction is carried out by maceration (soaking) using 70% ethanol solvent with repeated stirring for several consecutive days at laboratory temperature. After the extraction is completed, the resulting extract is filtered and dried using a rotary evaporator at low temperature and pressure and weighed. Finally, the resulting hydroalcoholic extract is evaluated by thin layer chromatography and using various reagents to confirm the presence or absence of different groups of chemical compounds. The total content of phenolic compounds is measured by the Folin-Ciocalteau method and spectrophotometric evaluation, and the antioxidant activity of the extracts is measured using the percentage of DPPH free radical scavenging. The hydroalcoholic extract prepared after standardization with the active ingredient rosmarinic acid by HPLC will be stored in a refrigerator at a temperature below 4 degrees Celsius. This study will be conducted experimentally and in vitro on laboratory animals at the Neurological Research Center of Tabriz University of Medical Sciences. In the present study, 75 male laboratory mice of pure Balb/c breed in the weight range of 28-30 grams will be used. The absence of any disease and abnormal behavior will be considered as an entry criterion and the occurrence of any disease and injury during the study period will be considered as an exit criterion. The mice will be divided into 5 groups of 15, including the following groups. 1- Control group: It will include mice that will receive normal saline orally for 21 days at a volume of 10 ml per kilogram of body weight. 2- Chronic stress: It will include mice that will be subjected to chronic restrained stress for 21 days in order to induce depression-like and anxiety-like behavior and will receive 2/2 ml of normal saline orally daily. Induction of chronic restraint stress To induce chronic restraint stress, mice are placed in a cylindrical tube (3 cm in diameter and 10 cm in length). This tube induces chronic restraint stress by preventing the animal from moving. For ventilation inside the tube, holes with a diameter of 2 mm are created in the body of the tube and each mouse is kept separately and isolated inside this tube for 6 hours every day for 21 days. 5-3-Chronic stress receiving triple doses of hydroalcoholic extract of the plant: It will include 3 different groups of mice that will receive high, medium, and low doses of hydroalcoholic extract of Persian borage during the chronic restraint stress induction period for 21 days. The dose of the extract will be determined based on the amounts of rosmarinic acid present in it. One day after the end of the stress induction period, behavioral tests including elevated plus maze and tail suspension will be performed to assess anxiety and depression behaviors, respectively, and in order to measure the level of anxiety, the behavioral model of the open field test will be used. After the end of the behavioral test, the animals will be anesthetized with ketamine and xylazine, their heads will be cut off, and brain tissue will be extracted. After freezing in liquid nitrogen, they will be transferred to a freezer at -70°C. Inflammatory indices in these samples will be evaluated. Also, at this stage, blood will be taken from the left ventricle to measure the level of corticosterone and serum liver enzymes in the mice. Inflammatory indices including interleukin-6, interleukin-1, TNF-a, and NFkB, and oxidative stress including TAC, MDA, GPx, and SOD will be measured according to the instructions of the relevant commercial kits. It is committed that in this research, all protocols for working with laboratory animals will be approved by the Laboratory Animal Rights Monitoring Committee. During the study, all safety principles and factors that can lead to contamination in the laboratory, the environment, and people will be fully observed. All ethical aspects and considerations of anesthesia and sampling of animals will be observed. After anesthesia and brain sampling, the animals' carcasses will be placed in separate plastic bags and will be destroyed through the research center's destruction system. Also, consumables that may cause biological contamination will be closed and placed in a sealed plastic autoclave and then transferred to a special waste container for laboratory materials. Sharp waste such as needle heads, broken glassware, scalpel blades, sampler tips, etc. will be placed in safe containers (Safety Box) and disposed of hygienically. Chemicals and drugs will be stored in accordance with the information in the Material Safety Data Sheet (MSDS). Non-disposable containers and equipment used for chemical solutions and cell culture media such as bottles, beakers, Erlenmeyer flasks, metal equipment, etc. will be washed in a sink for chemicals. Mandatory protective equipment and covers will be used during waste collection, transportation, and disposal, and waste collection and disposal will be carried out according to a specific schedule and in proportion to the amount of waste generated, and will be carried out daily during working hours. All original materials used will be purchased from reputable chemical and pharmaceutical importers and Sigma representatives in other countries. |
| کلمات کلیدی | الف) تعریف نظری افسردگی : یک بیماری ناتوان کننده است که با کاهش خلق و از دست دادن علاقه در اغلب فعالیت ها برای حداقل ۲ هفته و هکمراهی حداقل ٣ علامت مانند اختلال خواب، خستگی و افت انرژی مشخص می شود (48) ب) تعریف عملیاتی افسردگی : بر اساس آزمونهای رفتاری شامل آزمونهای ماز بعلاوهای مرتفع شده و معلق¬سازی از دم به ترتیب برای ارزیابی رفتارهای اضطرابی و افسردگی تعین خواهد شد و به منظور سنجش سطح اضطراب، مدل رفتاری تست میدان باز مورد استفاده قرار خواهد گرفت. ج) بار مالی: مفهوم علمی “بار” به معنای سال های از دست رفته زندگی ناشی از مرگ زودهنگام و یا ناتوانی شدید به دلیل یک بیماری خاص و در این مورد افسردگی است. د) مزاج: مزاج، کیفیتی است در طب سنتی، که از مخلوط شدن عناصر چهارگانه در بدن پیدا میشود و دارای ۹ قسم است. هر فرد و هر عضو مزاج خاص خودش رادارد. ح) حرارت غریزی: حرارت غریزی، حرارت ذاتی و گرمی طبیعی و خلقتی است که از حرارت اصلی روح در بدن سرچشمه می گیرد و آن بخاری است لطیف که از حفره قلب عبور می کند و در عروق و اعصاب جریان می یابد. ه) طب سنتی ایرانی: آمیخته ای از فرهنگ ایرانی با آمیزه های اسلامی می باشد که از تمام علوم شامل حکمت، فلسفه، منطق، نجوم، ریاضیات و ... بهره برده است. با توجه به تعاریف سازمان بهداشت جهانی می توان طب سنتی ایران را به دو بخش تقسیم کرد: ١) طب سنتی مکتوب: این بخش شامل کتاب ها و سایر محتویات موجود می باشد که گنجینه ای گرانبها بوده و می تواند سرمنشاء انجام تحقیقات و بررسی های بیشتر در زمینه طب سنتی برای تحقیق و پژوهشگران این حوزه باشد. ٢) طب سنتی شفاهی: حاوی اطلاعات و همچنین تجارب متعددی است که سینه به سینه از نسلی به نسل دیگر انتقال یافته و در برگیرنده انواع روش های مختلف بهداشتی و درمانی است (49) طب سنتی ایران با پیشینه طولانی، ظرفیتهای بالایی در زمینه پیشگیری و درمان بیماری¬ها دارد که در تعامل با طب جدید می تواند برخی از مشکلات بهداشتی و درمانی را حل نماید (15) سابقه طب سنتی ایران به حدود ده هزار سال بر می گردد. طبق قول اساتید برجسته تعداد چهارده هزار منبع مکتوب طب سنتی ایران و جهان اسلام وجود دارد که دانشمندان ایرانی نقش برجسته ای در این میان داشته اند (50, 51) فراورده هاي دارويي و گياهي |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران جامعه صنعت |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| سید مصطفی اعرج خدایی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| محمدعلی تربتی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| سعید صدیق اعتقاد | مشاور |
| ساناز حامدیزدان | مشاور |
| فاطمه رنجبر | مشاور |
| فرشته فرج دخت | همکار اصلی |
| محمد نوری | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر گل گاوزبان ایرانی باعث کاهش اضطراب و استرس در موش می شودمتن خبر افسردگی یکی از رایجترین اختلالات روانی است. افسردگی مـی توانـد سـلامت جسمانی، احساسات، رفتار و سـلامت روحـی انـسان هـا را تحت الشعاع قرار دهد. همچنین تاثیر مستقیمی بر کیفیت زندگی داشته و باعث ایجاد ناتوانی در فرد می شود. نتایج مطالعه ما نشان داد که عصاره گل گاوزبان ایرانی باعث بهبود رفتارهای اضطراب و افسردگی در موش می شود. از سوی دیگر یافته های این بررسی مبین اثر حفاظتی گل گاوزبان ایرانی در مواجهه با استرس مزمن و پیشگیری از تغییرات رفتاری و مولکولی ناشی از آن است. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
