ساخت و تأیید سلول نوترکیب HEK با بیان بالای TIM₁
ساخت و تأیید سلول نوترکیب HEK با بیان بالای TIM₁
مجریان: توحید کاظمی
خلاصه روش اجرا: هدف از انجام این طرح تولید یک سلول نو ترکیب با بیان بالای Tim₁ می باشد . مولکول Tim₁ ، یک گلیکو پروتئین سطح سلولهای T می باشد .که به عنوان مولکول کمک تحریکی در کمپلکس ارسال پیام TCR ،همراه با CD₃ می باشد . در واکنش سیستم ایمنی بدن به پیوند ، خود ایمنی ، آسم و آلرژی و پاسخ به بیماریهای عفونی به ویژه ویروسی ، مولکول Tim₁ در تنظیم پاسخ سلولهای T نقش ایفا می کند . بر اساس مطالعات انجام شده این گلیکو پروتئین سطحی می تواند یک هدف امید بخش در درمان بیماریهای آسم و آلرژی ،خود ایمنی و تحمل پیوند از طریق تغییر در ارسال پیام سلول T باشد . در این راستا تحقیقات در زمینه شناسایی بیشتر عملکردهای پروتئین Tim₁ اهمیت پیدا می کند. لذا می توان با استفاده از روش نمایش در سطح سلول cell display)) یک سیستم بیان مناسب و کارآمد جهت بیان Tim ₁ در یک لاین سلولی ایجاد کرد . برای این منظور ، با استفاده از cDNA سلولهای تک هسته ای خون محیطی، ژن کد کننده ی Tim₁کلون شده و پس از تأیید در وکتور کلونینگ، وارد وکتور بیانی PcDNA می شود. سپس سازه ژنی تولید شده، بر اساس پروتکل Turbofect Ragent در سلولهای HEK ترانسفکت می شود. بعد از 48 ساعت از زمان ترانسفکشن، جهت تایید بیان Tim₁ در سطح سلول ، فلوسایتومتری انجام می گردد . با تأیید بیان، داروی هیگرومایسین به محیط اضافه می شود و سلولها به مدت حدود یک ماه تحت تیمار با هیگرومایسین قرار می گیرد و در انتهای این دوره کلون های سلولی باقیمانده برداشته شده و سلولهای رشد نموده در این شرایط جهت تایید بیان Tim₁ در سطح سلول ، در آزمون فلوسایتومتری بررسی می شوند
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 61378 |
| عنوان فارسی طرح | ساخت و تأیید سلول نوترکیب HEK با بیان بالای TIM₁ |
| عنوان لاتین طرح | ساخت و تأیید سلول نوترکیب HEK با بیان بالای TIM₁ |
| نوع طرح | طرح تحقیقاتی |
| اولویت طرح | آنتی بادی های مونوکلونال و پروتئین های نوترکیب (از نظر: الف- جنبه های تولیدی و 2- پروتکل های درمانی) |
| نوع مطالعه | مطالعات غیر مداخله ای (همبستگی - توصیفی) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | خير |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | تاکنون سلول HEK دارای بیان بالای TIM-1 تولید نشده است. |
| اهداف اختصاصی | 1) ساخت پلاسمید حاوی کاست بیانی TIM₁ -2) ترانسفکشن سازه ژنی حاوی کاست بیانی TIM1 در سلول های 293 HEK -3 ) بیان پایدار TIM1 بر روی سلولهای 293 HEK |
| چکیده انگلیسی طرح | در واکنش سیستم ایمنی بدن به پیوند ، خود ایمنی ، آسم و آلرژی و پاسخ به بیماریهای عفونی به ویژه ویروسی ، مولکول Tim₁ در تنظیم پاسخ سلولهای T نقش ایفا می کند . بر اساس مطالعات انجام شده این گلیکو پروتئین سطحی می تواند یک هدف امید بخش در درمان بیماریهای آسم و آلرژی ،خود ایمنی و تحمل پیوند از طریق تغییر در ارسال پیام سلول T باشد . در این راستا تحقیقات در زمینه شناسایی بیشتر عملکردهای پروتئین Tim₁ اهمیت پیدا می کند. لذا می توان با استفاده از روش نمایش در سطح سلول cell display)) یک سیستم بیان مناسب و کارآمد جهت بیان Tim ₁ در یک لاین سلولی ایجاد کرد . برای این منظور ، با استفاده از cDNA سلولهای تک هسته ای خون محیطی، ژن کد کننده ی Tim₁کلون شده و پس از تأیید در وکتور کلونینگ، وارد وکتور بیانی PcDNA می شود. سپس سازه ژنی تولید شده، بر اساس پروتکل Turbofect Ragent در سلولهای HEK ترانسفکت می شود. بعد از 48 ساعت از زمان ترانسفکشن، جهت تایید بیان Tim₁ در سطح سلول ، فلوسایتومتری انجام می گردد . با تأیید بیان، داروی هیگرومایسین به محیط اضافه می شود و سلولها به مدت حدود یک ماه تحت تیمار با هیگرومایسین قرار می گیرد و در انتهای این دوره کلون های سلولی باقیمانده برداشته شده و سلولهای رشد نموده در این شرایط جهت تایید بیان Tim₁ در سطح سلول ، در آزمون فلوسایتومتری بررسی می شوند |
| کلمات کلیدی | HEK293 Human embryonic kidney cells : سلولهای کلیه جنین انسان که کاربرد های گسترده ای در بیولوژی سلولی دارد و به راحتی ترانس فورم میشود Overexpression : بیان بیش از حد یک مولکول توسط سلول را گویند. TIM₁ : پروتئین ویژه ی سطحی سلول های Th ₂ ,واسطه ای برای تنظیم پاسخ های ایمنی |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| توحید کاظمی | مجری اول (اصلی-هیات علمی) |
| جعفر مجیدی ذوالبین | همکار اصلی |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر بدست آوردن ژن خالص TIM1 در آزمایشگاهمتن خبر در واکنش سیستم ایمنی بدن به پیوند ، خود ایمنی ، آسم و آلرژی و پاسخ به بیماریهای عفونی به ویژه ویروسی ، مولکول TIM1 در تنظیم پاسخ سلولهای T نقش ایفا می کند.
برای بدست آوردن ژن تولید کننده TIM1 سلول های تک هسته ای خون جداسازی شده و مواد ژنتیکی آنها استخراج گردید. با روشی به نام PCR تنها ژن تولید کننده TIM1 از مجموعه تمام ژن ها جدا شده و سپس وارد حامل های ژنتیکی گردید این ژن به همراه حامل، وارد سلول های انسانی با نام HEK گردید و با انجام آزمون های تأییدی، تولید پروتئین TIM1 در این سلول نشان داده شد.
ژن تخلیص شده TIM1 برای کاربردهای دیگر از جمله ژن درمانی نیز می تواند کاربرد داشته باشد. از سوی دیگر این ژن می تواند وارد سلول های دیگر شده و تولید گردد. سلول HEK دارای بیان TIM1 که حاصل این مطالعه است، قابل استفاده برای تولید آنتی بادی اختصاصی برای اهداف تشخیصی تخصصی و درمانی باشد.
PCR: واکنش زنجیره ای پلیمراز، که برای تکثیر یک ژن کاربرد دارد. TIM1: یک مولکول مهاری سیستم ایمنی است. HEK: سلول مشتق از بافت کلیه انسان است. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر تولید سلول انسانی HEK-293 با بیان بالای مولکول TIM1متن خبر مولکول TIM1 مولکولی مهم در عملکرد سیستم ایمنی است که تولید آنتی بادی منوکلونال علیه آن در بررسی های مختلف عملکرد سلولهای ایمنی اهمیت بالایی دارد. بدلیل اینکه در تولید آنتی بادی منوکلونال علیه یک مولکول، مقادیر زیادی از فرم خالص آن نیاز است که این امر هزینه بر می باشد، تولید و بیان حالت نوترکیب آن در سطح یک سلول یوکاریوتی گام اولیه و مهمی برای اقدامات بعدی از جمله تولید آنتی بادی منوکلونال است، که در این طرح محقق گردید. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر تولید سلول انسانی HEK-293 با بیان بالای مولکول TIM1متن خبر یکی از مهمترین و هزینه بر ترین مراحل تولید آنتی بادی منوکلونال علیه یک مولکول خاص، تولید حالت نوترکیب آن مولکول از ژن مربوطه می باشد، که در این طرح مولکول TIM1 به عنوان یک مولکول مهم ایمونولوژیک مورد هدف بوده است. ژن این پروتئین بدست آمده و سپس با وارد کردن آن به داخل سلول HEK-293 حالت نوترکیب آن در سطح سلول های مذکور بدست آمد. این محصول قابلیت تجاری سازی جهت استفاده از ژن و یا مولکول نوترکیب می باشد. |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
