مهار ترکیبی فاکتور القاشونده با هایپوکسی (HIF-1α)، CD73 و کینازهای وابسته با سایکلین (CDKs) در رده های سلولی سرطانی در محیط in vitro
Combinatorial inhibition of hypoxia inducible factor-α (HIF-1α), CD73 and cyclin dependent kinases (CDKs) in cancer cell lines, in vitro
مجریان: فرهاد جدیدی نیارق
خلاصه روش اجرا: ابتدا با واکنش کیتوزان و اسید لاکتیک ترکیب کیتوزان لاکتات را تولید می کنیم. سپس باید نانوذرات کیتوزان لاکتات RNA مداخله گر را در بر بگیرند. کیتوزان لاکتات پتانسیل بالایی برای کپسوله کردن siRNA و حفاظت از آن در برابر تخریب سرمی دارد. تشکیل نانو ذرات کیتوزان لاکتات در اثر تعاملات یونی بین کیتوزان لاکتات و siRNA حل شده در سدیم تری پلی فسفات ( siRNA/TPP ) صورت می گیرد. و نانوذرات حاویsiRNA تولید می شوند که خصوصیات فیزیکو شیمیایی آن ها بررسی می شود. تولید کمپلکس نانوذرات-siRNA با ژل اکتروفورز در ژل 2% آگارز تایید می شود و میزان بارگیریsiRNA به صورت کمی بوسیله روش اولتراسانتریفیوژ بررسی خواهد شد. از رده های سلول های سرطانی 4T1 (سرطان پستان) و CT26 ( سرطان کلون ) و B16F10 ( ملانوما ) در این مطالعه استفاده خواهد شد که مطالعات گذشته بیان مولکول های هدف این مطالعه توسط آن ها را اثبات کرده است و میزان تولید آن نیز در هر رده سلولی متفاوت است. این رده های سلولی در محیط RPMI1640حاوی 10%fetal bovine serum و آنتی بیوتیک کشت داده می شوند. پس از گذشت ۲۴ ساعت از کشت سلولی نانوذرات حاوی siRNA ضد HIF-1α و CD73را به همراه داروی مهارکننده CDKs (Dinaciclib) به محیط کشت هر رده سلولی اضافه می کنیم. میزان تاثیر درمان های ترکیبی و تکی بر روی بیان ژن HIF-1α ، CD73 و CDKs در کشت سلول ها توسط تکنیک Real-time PCR در فواصل زمانی مختلف بررسی می شود.تاثیر نانوذرات حاویsiRNA بر روی حیات سلولی توسط آزمون MTT ارزیابی می شود. همچنین، تاثیر درمان ترکیبی بر روی جلوگیری از بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهارکننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز نیز توسط تکنیک Real-time PCR بررسی می گردد. علاوه بر این تاثیر درمان ترکیبی بر ترشح سایتوکاین های IL-6، TNF-α، IL-10، IL-33 و VEGF بوسیله آزمون الایزا بررسی خواهد گشت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 61008 |
| عنوان فارسی طرح | مهار ترکیبی فاکتور القاشونده با هایپوکسی (HIF-1α)، CD73 و کینازهای وابسته با سایکلین (CDKs) در رده های سلولی سرطانی در محیط in vitro |
| عنوان لاتین طرح | Combinatorial inhibition of hypoxia inducible factor-α (HIF-1α), CD73 and cyclin dependent kinases (CDKs) in cancer cell lines, in vitro |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه, گرنت پژوهشی |
| اولویت طرح | توسعه فناوریهای نوین برای دارورسانی |
| نوع مطالعه | مطالعات مرور سیستماتیک |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | همزمان با رشد سریع سلول های توموری,شرایط هایپوکسیک و به دنبال آن محیط غنی از آدنوزین در ناحیه تومور ایجاد می شود که می توانند فعالیت ضد توموری سلول های T و NK را مهار کنند.طبق مطالعات انجام شده بیشترین فاکتوری که در این شرایط فعال می شود HIF-1 است که می تواند موجب رشد سلول های توموری شود و بر متاستاز ‚رگزایی و مقاومت دارویی تومور تاثیر بگذارد.HIF-1 همچنین می تواند روی بیان CD73 تاثیر داشته باشد و شرایط غنی از آدنوزین در محیط ایجاد شود که نقش مهمی در مکانیسم فرار تومور ایفا می کند.از طرفی افزایش بیان CDKs در سرطان های مختلف موجب افزایش سرعت تکثیر آنعا می گردد.مطالعات جداگانه زیادی برای مهار HIF-1α و CD73 و CDKs انجام شده است که گاها به علت اختصاصی نبودن عوارض جانبی زیادی داشتند.ولی در این مطالعه ما به کمک نانوذرات و RNAهای مداخله گر به دنبال معرفی روشی هدفمند هستیم که بیان ژن های CD73و HIF-1α در تکیب با مهار CDKs را برای اولین بار بطور همزمان در ریزمحیط توموری سرکوب کند و با دوز کم ، بیشترین تاثیر و کمترین عارضه را داشته باشد. |
| اهداف اختصاصی | تولید نانو ذرات کیتوزان لاکتات حاوی : siRNA -مطالعه in vitro اثر بخشی درمان ترکیبی بر روی بقای سلول های سرطانی با روش MTT -مطالعه in vitro اثر بخشی درمان ترکیبی بر روی بیان ژن های پیش برنده آپوپتوز، مهار کننده آپوپتوز، تکثیر سلولی، آنژیوژنز و متاستاز سلول های سرطانی با روش Real-time PCR: -بررسی تاثیر درمان ترکیبی بروی تولید سایتوکاین بوسیله سلول های سرطانی |
| چکیده انگلیسی طرح | ....................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... |
| کلمات کلیدی | : siRNA RNAمداخله گر (RNAi) اصطلاح کلی است که به تکنولوژی خاموشی پس از رونویسی توسط RNA دو رشته ای اطلاق می گردد.در تکنولوژی RNA مداخله گر (RNAi) ، رشته مکمل mRNA ژن مورد نظر ساخته شده و این رشته به mRNA ژن هدف متصل و یک توالی دورشته ای (dsRNA) را بوجودمی آورد. از آنجا که سیستم سنتز پروتئین قادر به ترجمه mRNA دو رشته ای نمی باشد، بیان ژن هدف متوقف و اصطلاحاً ژن خاموش می شود. HIF-1α: جزئی از فاکتور رونویس هترو دایمر HIF-1 است که از دو جزء HIF-1α وHIF-1β تشکیل شده است.یک جزء حساس به اکسیژن است که بیان آن تحت شرایط کمبود اکسیژن القا می گردد. به عنوان تنظیم کننده اصلی رونویسی در پاسخ سلولی به شرایط کمبود اکسیژن عمل می کند.در بقا و تهاجم سلول های توموری و رگزایی نقش دارد. CD73: یک پروتئین غشای پلاسمایی است که در بسیاری از سرطان ها افزایش بیان می یابد.نوکلئوتید خارج سلول ((AMP را به آدنوزین تبدیل می کند. که آدنوزین نقش مهمی در مکانیسم های سرکوب سیستم ایمنی در محیط تومور ایفا می کند. Dinaciclib :یک مهار کننده قوی برای cdk1,2,5,9 می باشد وباعث القای پسرفت تومورهای solid می شود. CDKs :Cyclin dependent kinases یا کینازهای وابسته به سیکلین و دسته ای از پروتئین های سرین ترئونین کیناز هستند که در پیشبرد و کنترل چرخه ی سلولی نقش اساسی دارند.CDKs بعد از اتصال به سیکلین فعال می شوند.در ساختار CDKs سه بخش اساسی وجود دارد:1) دومن N-terminal که غالبا از صفحات بتا ساخته شده است. 2) دومن C-terminal که غالبا مارپیچ الفا دارد. 3)سایت اتصال به ATP VEGF: ماده ای است که توسط سلول ها تولید می شود و تشکیل رگ های جدید را تحریک می کند. TGFβ: فاکتور تغییر دهنده رشد β از طریق مهار لنفوسیت ها و فاگوسیت ها باعث تعدیل و تنظیم پاسخ های ایمنی می گردد. این سایتوکین هم اثر ضد التهابی و هم اثر پیش التهابی را نشان می دهد که بسته به زمان و مقدار تولید و سیستمیک یا موضعی بودن آن دارد. TGF-β از سلول های T تحریک شده ، بیگانه خوارهای تک هسته ای فعال شده با LPS و بسیاری دیگر از سلول ها تولید می شود. CD39: یک پروتئین گذرنده از غشا است که در سطح سلول های توموری و تعدادی از سلول های سیستم ایمنی بیان می شود.ATP خارج سلولی را به ADP و سپس به AMP تبدیل می کند. MDSC: از سلول های رده میلوئیدی است که موجب مهار پاسخ های ایمنی می شود. |
| ذینفعان نتایج طرح | بیماران سرطانی |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| فرهاد جدیدی نیارق | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| فاطمه اطیابی | مشاور |
| مهدی یوسفی | مشاور |
| بهزاد برادران | مشاور |
| فرناز حاجی زاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
| توحید کاظمی | مشاور |
| قاسم قلم فرسا | مشاور |
| سپیده ایزدی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر درمان ترکیبی فاکتورهای موجود در ریزمحیط تومور روش موثری برای مهار پیشرفت سرطان محسوب می شود.متن خبر کمبود اکسیژن در محیط تومور با بیان فاکتور القا کننده هیپوکسی (HIF) -1 همراه است که می تواند منجر به افزایش بیان بسیاری از عوامل تحریک کننده سرطان شود. آدنوزین یک فاکتور سرکوبگر ایمنی مهم است که می تواند هم به وسیله سلول های تومور و هم سلول های ایمنی به واسطه عملکرد دو مولکول اکتونوکلئوتیداز سطح سلولی به نام های CD39 و CD73 ترشح شود. در این مطالعه برای افزایش ثبات و بهبود عملکرد نانوذرات اکسید آهن از کایتوزان تیوله و تری متیل کایتوزان برای محصور کردن آن ها استفاده شد. این مطالعه نانوذرات اکسید آهن را به عنوان یک وکتور توانا در ژن درمانی معرفی کرد. علاوه بر این ، سرکوب همزمان CD73 و HIF-1α را می توان به عنوان یک استراتژی جدید درمان سرطان با پتانسیل سرکوب بالا معرفی کرد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
