آنالیز مولکولی پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی Arg753Glnژن TLR2در مبتلایان به هیداتیدوزیس
Molecular analysis of single nucleotide polymorphism Arg753Gln TLR2gene in Hydatidosis patients
مجریان: عادل اسپوتین , محمود محامی اسکوئی
خلاصه روش اجرا: در این مطالعه 80 نفر به عنوان گروه مورد مطالعه(جامعه هدف) از بین افراد مراجعه کننده به بیمارستان های مرجع در استان های گیلان و آذربایجان شرقی و اردبیل که مبتلا به کیست هیداتید هستند(بر اساس لام هیستوپاتولوژی و رادیولوژی) و80نفر که بر اساس سن_جنس با گروه مورد مطالعه مطابقت داده می شوند به عنوان گروه کنترل از بین مراجعین به بیمارستان های فوق الذکر که تست الایزای آنها منفی باشد انتخاب می شوند. از افراد مبتلا به کیست هیداتید و گروه کنترل سالمhealthy control(HC) بعد از کسب رضایت نامه اخلاقی،5ml خونگیری انجام می شود و در لوله های حاوی ضد انعقاد EDTA جمع آوری و سپس به آزمایشگاه تحصیلات تکمیلی گروه انگل شناسی و قارچ شناسی انتقال داده و در فریز 4- درجه سانتی گراد نگهداری می کنیم. با استفاده از کیت استخراج DNG-Pاز خون تام، DNA استخراج می شود و در 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. برای شناسی پلی مورفیسم TLR2 بر پایه جهش های تک نوکلوتیدی Arg753Gln از روش polymerase chain reaction-restriction fragment-length polymorphism (PCR-RFLP) استفاده می نماییم. برای انجام واکنش PCR و تزاید قطعه حاوی جهش برای هر کدام از جهش های تک نقطه ی Single nucleotide polymorphism (SNP) از یک جفت پرایمر اختصاصی استفاده می نماییم. تکثیر قطعه ژنی حاوی SNP، با استفاده از پرایمرهای forward 5′-GCCTACTGGGTGGAGAACCT-3′ and reverse 5′-GGCCACTCCAGGTAGGTCTT-3′ . صورت می گیرد. روی محصول PCR بدست آمده عمل برش آنزیمی توسط آنزیم Aci I برای ژن TLR 2 در SNP،Arg753Gln در طول یک شبانه روز در دمای37 درجه سانتی گراد انجام داده می شود. سپس روی آگاروز الکتروفورز انجام داده شد. با توجه به داده های بدست آمده با استفاده از نرم افزار آماری SPSS به تحلیل نتایج می پردازیم.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60967 |
| عنوان فارسی طرح | آنالیز مولکولی پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی Arg753Glnژن TLR2در مبتلایان به هیداتیدوزیس |
| عنوان لاتین طرح | Molecular analysis of single nucleotide polymorphism Arg753Gln TLR2gene in Hydatidosis patients |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | اطلاعات سلامت (health information) |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | کیست هیداتید بیماری مشترک بین انسان وحیوان با گسترش جهانی در نواحی تروپیکال و ساب تروپیکال است.این بیماری توسط لارو کرم اکینوکوکوس گرانولوزوس که از خانواده تنیده است ,ایجاد می شود.در این بیماری میزبان نهایی سگ وسگ سانان و میزبان واسط حیوانات اهلی و انسان می باشد.(1) این بیماری دارای سه چرخه زندگی,چرخه اهلی (بز,گوسفند و سگ) چرخه وحشی (نشخوار کنندگان وحشی و سگ سانان وحشی ) چرخه صحرایی (شتر و شغال و سگ ) است.(2) آلودگی انسان و حیوانات با خوردن تخم عفونت زای دفع شده از مدفوع سگ ایجاد شده و پس از بلع تخم جنین در روده آزاد شده و از طریق عروق لنفاوی به اندامهای مختلف مهاجرت می کند.(3) درصد آلودگی اندامهای مختلف در کشور ایران شامل : کبدبا 5/5تا 5/9% و ریه با 4/4 تا8/4% و کلیه ها 2% و استخوان ومغز 1% می باشد.(4) از کل اعمال جراحی صورت گرفته در کشورمان حدود 1%مربوط به این بیماری می باشد که اغلب در سنین 22-40 سال وزنان خانه دار می باشد.(5) با توجه به مطالب عنوان شده مطالعه مسیر های ایمنی و شناسایی عوامل ژنیتیکی این بیماری برای پی بردن به سیر بیماری هیداتیدوزیس در مناطق و جمعیت های مختلف ضروری است.چون ژنیتیک هر شخص نقش مهمی را در ایجاد بیماری دارد.سیستم ایمنی بدن شامل :ایمنی ذاتی و ایمنی اکتسابی می باشد که اولین خط دفاعی بدن در برابر تمامی پاتوژن ها بخصوص انگل ها ایمنی ذاتی می باشد که شامل اجزای مختلفی نظیر پوست و سلول های ایمنی شامل: منوسیت /ماکروفاژ/دندریتیک سل ها می باشد. Toll_like receptors (TLRs) اجزائ ایمنی ذاتی می باشد که دارای 12 نوع TLR بوده که 10نوع آن در انسان بیان می شود. TLRs پروتین هایی هستند که دارای یک قسمت خارج سلولی (LRRs)leucin rich repeat بوده که عهده دار شناسایی انتی ژنها میباشند و یک قسمت داخل سلولی (TIR) که با همکاری سلولهای ایمنی سلولی ومولکولهایی نظیر و(MYD88 )myeloid differentiation factor 88 و interferon regulatory factor3(IRF3) باعث فعال شدن ایمنی سلولی و التهاب می شود.(6) در طی بیماری با فعال شدن MYD88 و Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) رو نویسی از ژن های تولید کننده سایتوکین های التهابی اینترلوکین6 (IL_6)، اینترلوکین12(IL_12) و Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) شروع شده که در نتیجه باعث فعات شدن مسیر TH1 می شود.از طرفی فعال شدن TRIF و IRF_3 تولید Interferon alpha(INF-α) را القاء کرده که در نتیجه باعث فعال شدن دندریتیک سل ها شده که به عنوان antigen-presenting cells (APCs) ایمنی سلولی می شود.(7) TLRs باآنتی ژن های مختلفی از قبیل لیپوپلی ساکارید باکتری های گرم منفی، ماننان قارچ ها و گلیکان سطح کرم های خانواده تنیده باند می شود.(8) افراد مختلف استعداد ابتلا به انواع بیماری ها را با توجه به زمینه ژنتیکی شان دارند واین زمینه ژنتیکی حساسیت و درجه آلودگی آنها را نسبت به آلودگی به کیست هیداتید و سیر آن به شدت تحت تاثیر قرار می دهد.(9) افرادی که دارای پلی مورفیسم تک نوکلئو تیدی(SNP) در ژن TLR خود هستند نسبت به لیگاند های TLRs پاسخ مناسبی نداشته و در نتیجه استعداد و حساسیت ابتلا به انواع بیماری های عفونی در این افراد افزایش می یابد.باتوجه به اینکه مطالعه ای یرای بررسی ارتباط بین پلی مورفیسم TLRs ها و حساسیت یا مقاومت نسبت هیداتیدوزیس انجام نشده و همچنین به دلیل افزایش سطح بیان TLR2 در بیماری اکینوکوکوزیس انجام مطالعه رای بررسی این موضوع ضروری می باشد.تغییرات ژنتیکی در ژن TLR2 GenBank acc.) no.: ) )جهش های تک نوکلوتیدی، در اسید آمینه 753 ( ( Arg753Gln بعلت تغییری که روی ناحیه ی ژنی کد کننده دامین خارج سلولی که قسمت عملکردی در شناسایی و اتصال به لیگاندهای پاتوژنی است، جایگزین شده است .این تغییرات در ساختار TLR2 از اتصال به لیگاند و پاتوژن مربوطه مانع شده در نتیجه از کا رآیی سیستم ایمنی کاسته شده و فرد را با ابتلاء بیماری مستعد تر می کند.(10) در این مطالعه برای اولین بار نقش SNP ( Arg753Gln ) وپلی مورفیسم ژن TLR2 ناشی از آن در بیماران هیداتیدوزیس مراجعه کننده به بیمارستان های استان رشت و اردبیل و آذربایجان شرقی مورد بررسی قرار گرفتند. |
| اهداف اختصاصی | تعیین پلی مورفیسم تک نوکلئوتیدی Arg753Glnژن TLR2در مبتلایان به هیداتیدوزیس |
| چکیده انگلیسی طرح | در این مطالعه 80 نفر به عنوان گروه مورد مطالعه(جامعه هدف) از بین افراد مراجعه کننده به بیمارستان های مرجع در استان های گیلان و آذربایجان شرقی و اردبیل که مبتلا به کیست هیداتید هستند(بر اساس لام هیستوپاتولوژی و رادیولوژی) و80نفر که بر اساس سن_جنس با گروه مورد مطالعه مطابقت داده می شوند به عنوان گروه کنترل از بین مراجعین به بیمارستان های فوق الذکر که تست الایزای آنها منفی باشد انتخاب می شوند. از افراد مبتلا به کیست هیداتید و گروه کنترل سالمhealthy control(HC) بعد از کسب رضایت نامه اخلاقی،5ml خونگیری انجام می شود و در لوله های حاوی ضد انعقاد EDTA جمع آوری و سپس به آزمایشگاه تحصیلات تکمیلی گروه انگل شناسی و قارچ شناسی انتقال داده و در فریز 4- درجه سانتی گراد نگهداری می کنیم. با استفاده از کیت استخراج DNG-Pاز خون تام، DNA استخراج می شود و در 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. برای شناسی پلی مورفیسم TLR2 بر پایه جهش های تک نوکلوتیدی Arg753Gln از روش polymerase chain reaction-restriction fragment-length polymorphism (PCR-RFLP) استفاده می نماییم. برای انجام واکنش PCR و تزاید قطعه حاوی جهش برای هر کدام از جهش های تک نقطه ی Single nucleotide polymorphism (SNP) از یک جفت پرایمر اختصاصی استفاده می نماییم. تکثیر قطعه ژنی حاوی SNP، با استفاده از پرایمرهای forward 5′-GCCTACTGGGTGGAGAACCT-3′ and reverse 5′-GGCCACTCCAGGTAGGTCTT-3′ . صورت می گیرد. روی محصول PCR بدست آمده عمل برش آنزیمی توسط آنزیم Aci I برای ژن TLR 2 در SNP،Arg753Gln در طول یک شبانه روز در دمای37 درجه سانتی گراد انجام داده می شود. سپس روی آگاروز الکتروفورز انجام داده شد. با توجه به داده های بدست آمده با استفاده از نرم افزار آماری SPSS به تحلیل نتایج می پردازیم. |
| کلمات کلیدی | Toll_like receptor: گروهی از پروتئین ها انتقالی که به عنوان رسپتور ، الگوهای مولکولی روی پاتوژن ها را شناسایی و پاسخ های ایمنی را راه اندازی می کنند. کیستیک اکینوکوکوزیس: هیداتیدوزیس بیماری زئونوز ناشی از مرحله متاسستودی اکینوکوکس گرانولوزوس که در ارگان های مختلف کیست ایجاد می کند. SNP: جهش تک نوکلوتیدی در ژنوم single-nucleotide polymorphism |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| عادل اسپوتین | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| محمود محامی اسکوئی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| احسان احمدپور | مشاور |
| محمد علی مرادخانی | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر جهش های تک نوکلوتیدی ژن TLR2 برای غربال گری بیماران مبتلا به کیست هیداتید عود شونده استفاده می شود.متن خبر کیست هیداتید یک بیماری کرمی کشنده می باشد که در اثر تماس مستقیم با تخم انگل اکینوکوکوس دفع شده از مدفوع سگ ایجاد می شود. فاکتور های دخیل در عود کیست های هیداتیددر بیماران جراحی شده به عنوان یک مشکل جدی در جامعه جراحی باقی مانده است. گیرندهای شبه تول(TLRs ) نقش اساسی در ارتباط بین ایمنی ذاتی و اکتسابی در کیست هیداتید بازی می کنند. نتایج نشان می دهد که پلی مورفیسم TLR2Arg753Gln و هاپلوتایپ های آن بطور واضح و معنا داری با وقوع کیست هیداتید عود شونده ارتباط کلینیکی دارند. کدون TLR2Arg753Gln و آلل A/A می تواند به عنوان یک مارکر قابل اعتماد در تشخیص و غربال گری بیماران کیست هیداتید عود شده که تحت جراحی قرار گرفته اند، مورد استفاده قرار گیرد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
