بررسی تاثیر اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادی CD34+ به سمت رده ی لنفوئیدی و میلوئیدی
The effect of Acellular Wharton Jelly-derived exosomes on the differentiation of CD34 + stem cells into lymphoid and myeloid lineage
مجریان: علی اکبر موثق پور اکبری , مهدی یوسفی
خلاصه روش اجرا: در ابتدا برای تهیه ژل وارتون آسلولار تعداد10بند ناف به شرط استریل بودن و دارا بودن مقدار کافی ژل وارتون از نوزادان زنان سالم و نرمال انتخاب می شود. سپس ژل وارتون را جدا می کنیم.سپس در فالکون 50ml که حاوی 15ml-DMEM است ریخته می شود و به مدت 10min با دور1400rpm سانتریفیوژ می کنیم سلولهای و بقایای اضافی در کف تیوپ به صورت پلیت جدا می شود و مایع رویی به عنوان ژل وارتون آسلولار جمع آوری می شود و در دمای -80 درجه سانتی گراد فریز می کنیم تا در مواقع نیاز استفاده شود.سلولهای بنیادی خونساز CD34+ از منبع خون بند ناف انسانی توسط روش ستونی مگنتیک (MACS) با استفاده از آنتیبادیهای ضد آنتیژنCD34 متصل به ذرات میکرو مگنتیک جدا میشوند. بدین منظور، دو نمونه خون بند ناف به شرط استریل بودن و مقدار کافی خون از نوزادان زنان سالم و نرمال بهطور تصادفی و با کسب رضایت آگاهانه انتخاب میشوند. سلولهای جمعآوری شده از ستون بعد از تاٌیید میزان خلوص با فلوسایتومتری، در محیط کشت القاییIMDM حاوی 10درصد FBSیاAWJیا محیط فاقد سرم، 1درصد ترکیب آنتی بیوتیک پنی¬سیلین/استرپتومایسین (Pen/Strep) و ترکیب سایتوکاینی شامل SCF، Flt-3L، TPO، IL-6، IL-3 کشت داده خواهند شددر مرحله ی بعد اگزوزوم ها را به وسیله اولتراسانتریفوژ جدا می کنیم و به محیط هایی که در آن هماتوپوئتیک استم سل وجود دارد اضافه می کنیم. پس از 72 ساعت به منظور بررسی بیان ژن ها از تکنیک RealTime PCR و هم چنین جهت بررسی مارکرهای سطح سلولی از تکنیک فلوسایتومتری استفاده می کنیم.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60928 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی تاثیر اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادی CD34+ به سمت رده ی لنفوئیدی و میلوئیدی |
| عنوان لاتین طرح | The effect of Acellular Wharton Jelly-derived exosomes on the differentiation of CD34 + stem cells into lymphoid and myeloid lineage |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | سلولهای بنیادی، مهندسی بافت و پزشکی بازساختی و زیست مواد |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 12 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | ازآنجایی که امروزه سلولهای بنیادی خونساز CD34+به همراه سلولهای بنیادی مزانشیمی پیوند زده میشوند و علیرغم زدودن محیط های کشت و مواد آنها از سلولها، بازهم مقداری از این مواد باقی مانده و به گیرنده پیوند تزریق میشوند و در صورتی که منبع این محیط ها حیوانی باشد باعث انتقال برخی بیماری ها و مشکلات ایمنی برای شخص میشوند؛ جایگزینی این محیط ها با محیط های سالم حداقل با منبع انسانی امری ضروری است. و از طرفی تا به حال بر روی اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون و تاثیر آن بر سلول های بنیادی CD34+ به سمت رده ی لنفوئیدی و میلوئیدی مطالعه ای صورت نگرفته است. بنابراین ما تصمیم بر انجام این مطالعه گرفته ایم تا تاثیر اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادیCD34+ به سمت رده ی لنفوئیدی و میلوئیدی را بررسی کنیم و نتایج حاصل از آن را مورد بحث و مطالعه قرار دهیم. |
| اهداف اختصاصی | 1)تهیه و جداسازی استریل ژل وارتون آسلولار -2) جداسازی اگزوزومهای ژل وارتون -3 ) همکشتی و بررسی تاثیر اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادی CD34+ به سمت رده ی لنفوئیدی -4) همکشتی و بررسی تاثیر اگزوزوم های حاصل از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادی CD34+ به سمت رده ی میلوئیدی |
| چکیده انگلیسی طرح | |
| کلمات کلیدی | • واکنش پیوند برعلیه میزبان (GVHD): واکنش لنفوسیتهای بافت پیوندی برعلیه سلولهای گیرندهی میزبان را گویند که از عوارض شایع پیوند مغزاستخوان و انتقال خون میباشد. • اگزوزوم :دسته کوچکی از وزیکول های خارج سلولی کوچک و ترشحی با منشا اندوزومی بوده که از سلول های مختلفی به محیط بیرون ترشح می شوند وحاوی مواد مختلفی از قبیل پروتئین ها و فاکتورهای رشد بوده که به طور اختصاصی در ارتباطات سلولی دخیل هستند. • آلودگی zoonotic:آلودگی¬هایی که بین حیوانات مهرهدار و انسان قابل انتقال هستند. • (Hematopoietic Stem and Progenitor Cells (HSPCs: سلولهای بنیادی خونساز/پیش سازهای خونی می¬باشد. • (Human Leukocyte Antigen (HLA: آنتیژنهای مشترک لکوسیتی می¬باشد. • (Fetal Bovine Serum (FBS: سرم جنین گاو می¬باشد. • DWJM:ماتریکس ژل وارتون دسلولار • (Hematopoietic Stem Cell (HSC: سلول بنیادی خونساز می¬باشد. • (Wharton's jelly (WJ: ژل وارتون بافتی است که عروق بند ناف را احاطه میکند. • (Acellular wharton's jelly (AWJ: ژل وارتون بدون سلول • LT-HSc) Long Term Hematopoetic stem cell) : سلول های بنیادی هماتوپوئتیک با قابلیت رشد طولانی مدت که دارای توانایی خودنوسازی بالایی هستند. • ST-HSC) Short Term Hematopoetic stem cell) : سلول های بنیادی هماتوپوئتیک با قابلیت رشد کوتاه مدت که دارای توانایی خودنوسازی کمی هستند. |
| ذینفعان نتایج طرح | از آنجایی که علیرغم زدودن محیط های کشت ومواد آنها از سلولهای بنیادی پیش از پیوند، بازهم مقداری از این مواد باقی مانده و به گیرنده پیوند تزریق میشوند و در صورتی که منبع این محیط ها حیوانی باشد باعث انتقال برخی بیماری ها و مشکلات ایمنی برای شخص میشوند؛ جایگزینی این محیط ها با محیط های سالم حداقل با منبع انسانی باعث جلوگیری ازانتقال بیماریهای گوناگون و مشکلات ایمنی برای بیمارمی شود. همچنین به محققانی که روی تکثیر استم سل و تمایز آنها به رده های سلولی کار میکنند،کمک میکند تا ازیک منبع کم هزینه تر، سالمتر، غنی ترازفاکتورهای رشد و قابل دسترس تر استفاده کنند. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| علی اکبر موثق پور اکبری | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| مهدی یوسفی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| مهدی طالبی | مشاور |
| حسین عباس زاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
| مهدی عدالتی | مشاور |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر اگزوزوم های مشتق از ژله وارتون آسلولار اثر کاهنده بر تمایز سلول های بنیادی CD34 به سمت رده ی میلوئیدی دارد.متن خبر اگزوزومها (Exosomes) زیر گروهی از خانواده ویزیکولهای خارج سلولی(EVs) هستند که در ارتباطات سلول به سلول نقش دارند. مطالعات قبلی ما نشان داده اند که ژله وارتون انسانی اثر حمایتی بر سلول های بنیادی CD34 خون بند ناف دارند، ولی تاکنون اثر ریز محیط های ژله وارتون بر این سلول ها مورد مطالعه قرار نگرفته بود. ما در این مطالعه به بررسی اثر اگزوزوم های مشتق از ژله وارتون آسلولار بر تمایز سلول های بنیادی CD34 به سمت رده ی میلوئیدی پرداختیم و نتایج حاصل از کار ما نشان دهنده ی اثر کاهنده این اگزوزوم ها بر روند تمایز بود. با توجه به نتایج حاصل شده می توان از این اثر کاهنده در درمان بیماری های زمینه ای مربوط به سلول های میلوئیدی استفاده کرد. |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
