ارتباط دریافت غذایی چربی با میزان بیان ژنهای TLR4 وTRIF در سلولهای تک هستهای خون محیطی و سطح سرمی اینترفرون β در بیماران مبتلا به سندرم متابولیک
Association of dietary fat intake with TLR4 and TRIF gene expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and serum level of interferon β in patients with metabolic syndrome
مجریان: مریم ثقفی اصل
خلاصه روش اجرا: در مطالعه مورد ـ شاهدی حاضر، نمونه گیری به شیوه آسان convienience sampeling انجام شد. بعد از نصب اطلاعیه در مراکز بهداشتی و کلینیک های شهر تبریز، افراد داوطلب و واجد شرایط طرح وارد مطالعه شده و بعد از توضیح در مورد روند انجام طرح، اخذ رضایت نامه و تکمیل فرم اطلاعات عمومی در صورت 12-10ساعت ناشتایی در حدود ml5 خون وریدی از افراد گرفته و سریعا به مدت 15دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس پارامترهای متابولیکی مورد نظر در سندرم متابولیک از جمله FBS,TG,HDL ناشتا اندازه گیری شده و قسمتی از نمونه نیز به منظور اندازه گیری فاکتور سرمی IFNβ در فریزر 70- منجمد شد تا در موعد مناسب با روش آزمایشگاهی مناسب اندازه گیری شود. فشار خون افراد شرکت کننده بعد از 10دقیقه استراحت در حالت نشسته از بازوی چپ بیمار دو بار و با فاصله دو دقیقه با فشارسنج جیوه ای اندازه گیری شده و سپس مقدار آن به صورت میانگین گزارش شد. همچنین اندازه گیری دور کمر با استفاده از متر نواری با دقتcm 1/0 در ناحیه بین دنده ها و ستیغ ایلیاک و در انتهای بازدم فرد اندازه گیری شد. بعد از تشخیص اولیه افراد مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم، در مراجعه دوم میزان cc 10 خون وریدی از این افراد دریافت شد. زیر هود بیولوژیک و تحت شرایط استریل، cc 10خون EDTA دار در فالکون ml 50ریخته و با استفاده از محیط RPMI 1640 به حجم20 ml رسانده شد. در فالکون هایml15 ( سه عدد) ،ml 5 فایکول ریخته و خون رقیق شده به آرامی به آن اضافه شد سپس در سانتریفیوژ یخچال دار و در دمای 18 درجه سانتی گراد، ابتدا به مدت 5 دقیقه و با دور 1500rpm و به دنبال آن به مدت 20 دقیقه با دور 3500rpm سانتریفیوژ شد. پس از سانتریفیوژ، محتویات فالکون به چندین لایه مجزا تقسیم می گردد، که لایه های تشکیل شده در لوله از بالا به پایین به ترتیب، لایه پلاسما، لایه سلول های تک هسته ای، لایه فایکول، لایه سلول های چند هسته ای، پلاکت و پایین ترین لایه، گلبول های قرمز می باشد. لایه سلول های تک هسته ای به صورت یک دیسک مجزا در وسط فالکون تشکیل می شود که این لایه به کمک پیپت پاستور خارج گردید. به منظور خنثی کردن اثر مخرب فایکول بر روی سلول ها، سلول های جدا شده سه بار به کمک محیط RPMI 1640 و سانتریفیوژ کردن شسته شد.در مرحله بعد RNA سلول ها به روش فنل کلروفرم با استفاده از محلول Accusol agent استخراج گردید. غلظت RNA با روش تعیین دانسیته نوریOptical Density(OD) و میزان جذب در طول موج 260nm، توسط دستگاه بیوفتومتر اندازه گیری شد. سپس به وسیله آنزیم Reverse Transcriptase، و با استفاده از سه پرایمر Oligo dT، Random hexamer و پرایمر اختصاصی سکانس cDNA از RNA الگو سنتز شد. نهایتا به کمک تکنیک Real time-PCR میزان بیان ژن های TLR4,TRIF در هر دو گروه مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم بررسی شد. لازم به ذکر است که در صورت آلودگی احتمالی نمونهRNA ، آلودگی توسط دو روش زیر به حداقل رسید : با استفاده از تیمار RNA با آنزیم DNase I و راهکار دوم توسط طراحی پرایمر اختصاصی به فرم exon-exon junction. دریافت چربی غذایی نیز با استفاده از آنالیز فرم ثبت غذایی سه روزه و پرسشنامه معتبر بسامد خوراک (44) با نرم افزار Nutritionist IV تعیین و بین دو گروه مقایسه شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا در دانشکده/مرکز |
| کد طرح | 60891 |
| عنوان فارسی طرح | ارتباط دریافت غذایی چربی با میزان بیان ژنهای TLR4 وTRIF در سلولهای تک هستهای خون محیطی و سطح سرمی اینترفرون β در بیماران مبتلا به سندرم متابولیک |
| عنوان لاتین طرح | Association of dietary fat intake with TLR4 and TRIF gene expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and serum level of interferon β in patients with metabolic syndrome |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | دیابت |
| نوع مطالعه | مطالعه مورد/شاهد ( Case - Control ) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | کارشناسی ارشد |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | در صورت وجود ارتباط مثبت بین دریافت غذایی چربی با بیان ژنهای TLR4وTRIF در سلولهای تک هسته ای خون محیطی و سطح سرمی اینترفرون β در مطالعه حاضر شاید بتوان با توصیه به تغییر در رژیم غذایی (چه از جهت میزان دریافت چربی و چه از نظر نوع چربی دریافتی) راهکار موثری در زمینه کنترل و جلوگیری از پیشرفت این وضعیت التهابی ارائه نمود. همچنین نتایج این مطالعه ممکن است بتواند در درک بهتر سندرم متابولیک با لحاظ نمودن مکانیسم های مولکولی دخیل در پاتوژنز آن مفید واقع شود. |
| اهداف اختصاصی | تعیین و مقایسه میزان دریافت غذایی چربی و میزان بیان ژنهای TLR4وTRIF و سطح سرمی IFNβ در دو گروه مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم -تعیین و مقایسه ارتباط دریافت غذایی چربی با میزان بیان ژنهای TLR4وTRIF و سطح سرمی IFNβ بین هر دو گروه مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم -تعیین ارتباط دریافت غذایی چربی، میزان بیان ژنهای TLR4و TRIF و سطح سرمی IFNβ با اجزای سندرم متابولیک -تعیین و مقایسه ارتباط شاخصهای تن سنجی (BMI و دور کمر) با میزان بیان ژنهای TLR4وTRIF و سطح سرمی IFNβدر هر دو گروه |
| چکیده انگلیسی طرح | در مطالعه مورد ـ شاهدی حاضر، نمونه گیری به شیوه آسان convienience sampeling انجام شد. بعد از نصب اطلاعیه در مراکز بهداشتی و کلینیک های شهر تبریز، افراد داوطلب و واجد شرایط طرح وارد مطالعه شده و بعد از توضیح در مورد روند انجام طرح، اخذ رضایت نامه و تکمیل فرم اطلاعات عمومی در صورت 12-10ساعت ناشتایی در حدود ml5 خون وریدی از افراد گرفته و سریعا به مدت 15دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس پارامترهای متابولیکی مورد نظر در سندرم متابولیک از جمله FBS,TG,HDL ناشتا اندازه گیری شده و قسمتی از نمونه نیز به منظور اندازه گیری فاکتور سرمی IFNβ در فریزر 70- منجمد شد تا در موعد مناسب با روش آزمایشگاهی مناسب اندازه گیری شود. فشار خون افراد شرکت کننده بعد از 10دقیقه استراحت در حالت نشسته از بازوی چپ بیمار دو بار و با فاصله دو دقیقه با فشارسنج جیوه ای اندازه گیری شده و سپس مقدار آن به صورت میانگین گزارش شد. همچنین اندازه گیری دور کمر با استفاده از متر نواری با دقتcm 1/0 در ناحیه بین دنده ها و ستیغ ایلیاک و در انتهای بازدم فرد اندازه گیری شد. بعد از تشخیص اولیه افراد مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم، در مراجعه دوم میزان cc 10 خون وریدی از این افراد دریافت شد. زیر هود بیولوژیک و تحت شرایط استریل، cc 10خون EDTA دار در فالکون ml 50ریخته و با استفاده از محیط RPMI 1640 به حجم20 ml رسانده شد. در فالکون هایml15 ( سه عدد) ،ml 5 فایکول ریخته و خون رقیق شده به آرامی به آن اضافه شد سپس در سانتریفیوژ یخچال دار و در دمای 18 درجه سانتی گراد، ابتدا به مدت 5 دقیقه و با دور 1500rpm و به دنبال آن به مدت 20 دقیقه با دور 3500rpm سانتریفیوژ شد. پس از سانتریفیوژ، محتویات فالکون به چندین لایه مجزا تقسیم می گردد، که لایه های تشکیل شده در لوله از بالا به پایین به ترتیب، لایه پلاسما، لایه سلول های تک هسته ای، لایه فایکول، لایه سلول های چند هسته ای، پلاکت و پایین ترین لایه، گلبول های قرمز می باشد. لایه سلول های تک هسته ای به صورت یک دیسک مجزا در وسط فالکون تشکیل می شود که این لایه به کمک پیپت پاستور خارج گردید. به منظور خنثی کردن اثر مخرب فایکول بر روی سلول ها، سلول های جدا شده سه بار به کمک محیط RPMI 1640 و سانتریفیوژ کردن شسته شد.در مرحله بعد RNA سلول ها به روش فنل کلروفرم با استفاده از محلول Accusol agent استخراج گردید. غلظت RNA با روش تعیین دانسیته نوریOptical Density(OD) و میزان جذب در طول موج 260nm، توسط دستگاه بیوفتومتر اندازه گیری شد. سپس به وسیله آنزیم Reverse Transcriptase، و با استفاده از سه پرایمر Oligo dT، Random hexamer و پرایمر اختصاصی سکانس cDNA از RNA الگو سنتز شد. نهایتا به کمک تکنیک Real time-PCR میزان بیان ژن های TLR4,TRIF در هر دو گروه مبتلا به MetS و افراد به ظاهر سالم بررسی شد. لازم به ذکر است که در صورت آلودگی احتمالی نمونهRNA ، آلودگی توسط دو روش زیر به حداقل رسید : با استفاده از تیمار RNA با آنزیم DNase I و راهکار دوم توسط طراحی پرایمر اختصاصی به فرم exon-exon junction. دریافت چربی غذایی نیز با استفاده از آنالیز فرم ثبت غذایی سه روزه و پرسشنامه معتبر بسامد خوراک (44) با نرم افزار Nutritionist IV تعیین و بین دو گروه مقایسه شد. |
| کلمات کلیدی | سندرم متابولیک: سندرم متابولیک بیماری متابولیکی شایع در سراسر جهان که بر طبق معیارATP III به وجود حداقل سه مورد از پنج مورد اختلال متابولیکی شامل افزایش دور کمر، تری گلیسرید، قند خون ناشتا، فشار خون و کاهش HDL در فرد اطلاق می گردد. یکی از عوامل خطر مهم برای بروز بیماری های قلبی ـ عروقی و دیابت می باشد که این بیماریها به ترتیب دومین و چهارمین علت مرگ و میر را در دنیا به خود اختصاص می دهند. در افراد مبتلا به MetS ، احتمال مرگ دو برابر و احتمال ابتلا به سکته مغزی یا قلبی سه برابر بیش از کسانی است که مبتلا به این سندرم نیستند (3، 4). ATP III (Adult Treatment Panel III) : پانل درمانی بزرگسالان III شاخص های بیوشیمیایی: گلوکز ناشتای خون، تری گلیسیرید، کلسترول تام، LDL-C و HDL-C. شاخص¬های تن¬سنجی: شاخص¬های تن¬سنجی شامل نمایه توده بدن(BMI) و دور کمر (WC) و دور باسن می باشند. نمایه توده بدن (Body mass index: BMI): BMI از تقسیم وزن (kg) به مجذور قد (m) محاسبه می شود. ترکیب بدن: ترکیب بدن شامل توده چربی(Fat mass) و توده بدون چربی(Fat free mass)می باشد. بیش وزن (Overweight): بیش وزن به افراد دارای] 30< ≤BMI25 [اطلاق می شود. چاق (Obese): چاق به افراد دارای] 30≥ (kg/m2) BMI [اطلاق می شود. چاقی شکمی: چاقی شکمی عبارت است از انباشته شدن چربی اضافی در ناحیه شکم تا حدی که تاثیرات منفی بر روی سلامتی داشته باشد (41). مطابق WHO، چاقی شکمی به داشتن دور کمر 88cm≤ در زنان و 102cm≤ در مردان اطلاق می شود. البته در این مطالعه طبق نظر کمیته ملی چاقی ایران نقطه برش دور کمر برای زنان و مردان 95 سانتی متر و به بالا در نظر گرفته خواهد شد (5، 42). سلول های تک هسته ای خون محیطی(PBMCs): سلول های تک هسته ای خون محیطی شامل لنفوسیت ها و منوسیت ها و ماکروفاژ ها بوده که دارای یک هسته گرد و چند لوبه هستند و نقش مهمی درسیستم ایمنی ذاتی و مبارزه با عفونت دارند (40). تکنیک Ficoll-Hypaque : تکنیک Ficoll-Hypaqueبه منظور استخراج سلول های تک هسته ای خون محیطی استفاده می گردد. در این روش خون دارای ماده ضد انعقاد(EDTA) و رقیق شده با RPMI به نسبت یک به یک با فایکول مخلوط می گردد که این ماده با ایجاد گرادیان غلظتی باعث تجمع گلبول های قرمز خون و در نتیجه رسوب آن ها می گردد. بنابراین سلول های تک هسته ای از لایه بالایی گلبول های قرمز قابل جمع آوری هستند (23، 24). دریافت غذایی چربی: منظور از دریافت غذایی چربی، تعیین میزان و نوع چربی مصرفی با استفاده از نرم افزار Nutritionist IV می باشد. گروه کنترل: گروه کنترل در این مطالعه افراد به ظاهر سالم دارای چاقی شکمی و غیر مبتلا به سندرم متابولیک و همسان شده از لحاظ سن و جنس با گروه مورد می باشند. FFAs (Free Fatty Acids): اسید های چرب آزاد (FFAs) که معمولا در ساختمان تری گلیسریدها و فسفولیپیدها وجود دارند و در صورتی که به مولکولهای دیگر اتصال نیابند بدین نام خوانده میشوند. عمدتا توسط آلبومین در خون منتقل می شوند. سطوح طبیعی FFAs پلاسمایی در زنان μmol/liter 477 و مردان به ظاهر سالم μmol/liter 416 گزارش شده است (39). LPS (Lipopolysaccharides): لیپوپلی ساکارید (لیپوگلیکان یا اندوتوکسین) مولکولهای حاوی لیپید و پلی ساکارید که در غشای خارجی باکتری های گرم منفی وجود داشته و باعث تحریک سیستم ایمنی و پاسخ ایمنی می شوند (38). TLRs (Toll Like Receptors): گیرنده های شبه toll نوعی گیرنده پروتئینی داخل غشایی است که معمولا در سلولهای سیتم ایمنی مثل ماکروفاژها حضور داشته و با شناسایی عوامل میکروبی موجب فعال کردن سیستم ایمنی می شود. تا به حال 9نوع از این گیرنده ها شناسایی شده اند که مهم ترین آنها TLR2وTLR4 می باشند. این گیرنده از دو بخش تشکیل شده است: 1) خارج سلولی (LRR) که غنی از توالی های اسیدآمینه لوسین بوده و نقش این بخش شناسایی عوامل پاتوژن است.2) بخش سیتوپلاسمی (TIR) که منجر به فعال کردن مسیر سیگنال دهی مولکولی از طریق آداپتور پروتئینهای MYD88 یا TRAM و در نهایت تولید سیتوکین های پیش برنده التهاب و آغاز فرآیند التهاب می شود (25). :TRIF (Toll/IL-1R resistance)TIR domain containing adaptor inducing IFNβ، آداپتور پروتئین مرتبط با گیرنده شبه Toll می باشد که با فعال نمودن مسیر غیر وابسته به Myd88 به کمک پروتئین هایIRF3(interfron regulatory factor3) و NF-KB موجب القا تولید اینترفرون های نوع 1 می شود (24). اینترفرون بتا (INFβ): اینترفرون بتا (INFβ) نوعی سیتوکین متعلق به خانواده اینترفرون نوع1 است (24). Myd88: فاکتور تمایز میلوئیدی88 از پروتئین های آداپتور مسیر سیگنال دهی وابسته بهTLRs است (37). لیگاند های مربوط به TLR با فعال کردن پروتئین های آداپتور، از طریق مسیر وابسته به MyD88 و یا مسیرهای غیروابسته به MyD88منجر به بروز پاسخ های التهابی متعاقب می شوند (22، 24، 25). دریافت غذایی چربی: منظور از دریافت غذایی چربی، تعیین میزان و نوع چربی مصرفی (شامل اسیدهای چرب اشباع و غیراشباع (موفا و پوفا) و به تفکیک اسیدهای چرب و نیز درصد چربی از انرژی دریافتی می باشد که با استفاده از آنالیز فرم ثبت غذایی سه روزه و پرسشنامه معتبر بسامد خوراک (44) با نرم افزار Nutritionist IV تعیین و بین دو گروه مقایسه خواهد شد. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| مریم ثقفی اصل | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| بهزاد برادران | مشاور |
| پریچهر امیری | همکار اصلی |
| داریوش شانه بندی | مشاور |
| مهسا نقی زاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
| محمد اصغری جعفرآبادی | مشاور |
| حسین مهرعلیزاده | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر مکانیسم احتمالی اثر چربی غذایی در فعال کردن آبشار التهابی TLR4 و TRIF در سلول های تک هسته ای خون محیطی بیماران مبتلا به سندم متابولیکمتن خبر سندرم متابولیک مجموعه ای از اختلالات متابولیکی است که شامل چاقی شکمی (افزایش دورکمر) نیز می باشد. چاقی شکمی یک وضعیت پیش برنده التهاب محسوب میشود.گیرنده های شبه تول (TLRs) گیرنده های غشایی موجود در سلولهای تک هسته ای خون محیطی (PBMCs) هستند که نقش بالقوهای در پاسخ ایمنی ذاتی و بروز MetS دارند. از جمله مهمترین گیرنده های دخیل در این سندرم می توان به TLR4 اشاره کرد که پس از شناخت لیگاندهای مربوطه از جمله اسیدهای چرب، پروتئین آداپتور (TRIF) را فعال می کند که منجر به تولید سیتوکینهای التهابی مانند اینترفرونβ (INFβ)می شود. با توجه به نقش رژیم غذایی در کنترل یا پیشرفت خطر MetS و افزایش بیان ژن TLR4 و پروتئینهای آداپتور مسیرسیگنال دهی آن در ایجاد چاقی و التهاب، در مطالعه حاضر، ارتباط میزان بیان ژنهای TLR4 و TRIF در PBMCs با دریافت غذایی چربی و سطح سرمی INFβ در افراد مبتلا به Mets با چاقی شکمی و گروه سالم با چاقی شکمی در قالب یک مطالعه مورد ـ شاهد بررسی شد. نتایج مطالعه نشان دهنده آن است که دور کمر واسطه مهمی در ارتباط بین بیان ژنهای TLR4 و TRIF و سطح سرمی INFβ و وضعیت متابولیکی میباشد. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر مکانیسم احتمالی اثر چربی غذایی در فعال کردن آبشار التهابی TLR4 و TRIF در سلول های تک هسته ای خون محیطی بیماران مبتلا به سندم متابولیکمتن خبر سندرم متابولیک مجموعه ای از اختلالات متابولیکی است که شامل چاقی شکمی (افزایش دورکمر) نیز می باشد. چاقی شکمی یک وضعیت پیش برنده التهاب محسوب میشود.گیرنده های شبه تول (TLRs) گیرنده های غشایی موجود در سلولهای تک هسته ای خون محیطی (PBMCs) هستند که نقش بالقوهای در پاسخ ایمنی ذاتی و بروز MetS دارند. از جمله مهمترین گیرنده های دخیل در این سندرم می توان به TLR4 اشاره کرد که پس از شناخت لیگاندهای مربوطه از جمله اسیدهای چرب، پروتئین آداپتور (TRIF) را فعال می کند که منجر به تولید سیتوکینهای التهابی مانند اینترفرونβ (INFβ)می شود. با توجه به نقش رژیم غذایی در کنترل یا پیشرفت خطر MetS و افزایش بیان ژن TLR4 و پروتئینهای آداپتور مسیرسیگنال دهی آن در ایجاد چاقی و التهاب، در مطالعه حاضر، ارتباط میزان بیان ژنهای TLR4 و TRIF در PBMCs با دریافت غذایی چربی و سطح سرمی INFβ در افراد مبتلا به Mets با چاقی شکمی و گروه سالم با چاقی شکمی در قالب یک مطالعه مورد ـ شاهد بررسی شد. نتایج مطالعه نشان دهنده آن است که دور کمر واسطه مهمی در ارتباط بین بیان ژنهای TLR4 و TRIF و سطح سرمی INFβ و وضعیت متابولیکی میباشد. |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
