تعیین میزان متیلاسیون و اندازه¬گیری سطح بیان ژنهای IL-10 و IL-6 در بیماران مبتلا به بهجت
Determination of Methylation and expression of IL-10 and IL-6 Genes in Ptients with Behc¸et’s Disease.
مجریان: محمد نوری , ابراهیم سخی نیا
خلاصه روش اجرا: هدف از اجرای این طرح اندازه گیری سطح متیلاسیون ژنهای IL10 و IL6 در بیماران مبتلا به بیماری بهجت و مقایسه این الگو با گروه کنترل و در نهایت میزان بیان این دو ژن درگروه بیمار و کنترل بررسی خواهد شد . ابتدا از 40 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان امام رضا و کلینیک آتیه که بیماری بهجت در آنها توسط متخصص روماتولوژی بر اساس معیارهای تشخیصیICBD محرز گردیده است، نمونه خون گرفته خواهد شد و سپس به روش فایکول سلول¬های تک¬هسته¬ای خون جدا شده و DNA و RNA نمونه ها بر اساس پروتکل شرکت سازنده کیت استخراج می¬شود. برای اندازه¬گیری سطح متیلاسیون ژن¬ها از تکنیک زیر استفاده می¬شود: methylated DNA immunoprecipitation-quantitative polymerase chain reaction (MeDIP-qPCR) در این روش DNA استخراج شده توسط سونیکاسیون به قطعات200 تا 1000bp تبدیل شده و سپس قطعات DNA متیله توسط رسوب¬گذاری ایمنی و با استفاده از آنتی بادی ضد 5- متیل سیتوزین رسوب داده می¬شوند و برای تشخیص سطح متیلاسیون پروموتر ژنها از تکنیک Real-time PCR استفاده خواهد شد. همین فرایند در گروه کنترل جهت مقایسه الگوی متیلاسیون و همچنین میزان بیان ژن¬های مذکور انجام خواهد شد. در نهایت میزان پروتیئن حاصل از بیان ژنهای IL-10 و IL-6 با استفاده از تکنیک الایزا مورد بررسی قرار خواهد گرفت.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60641 |
| عنوان فارسی طرح | تعیین میزان متیلاسیون و اندازه¬گیری سطح بیان ژنهای IL-10 و IL-6 در بیماران مبتلا به بهجت |
| عنوان لاتین طرح | Determination of Methylation and expression of IL-10 and IL-6 Genes in Ptients with Behc¸et’s Disease. |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | بیماری های اتوایمیون (آرتریت روماتوئید و لوپوس اریتماتوز سیستمیک) |
| نوع مطالعه | مطالعه مورد/شاهد ( Case - Control ) |
| تحقیق در نظام سلامت | خیر |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 16 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | هنوز علت و پاتولوژی بیماری بهجت بطور کامل مشخص نشده است. با این حال، تحقیقات اخیر پیشرفتهای قابل توجهی را نشان می¬دهند. از آنجا که بیماری¬های روماتولوژیک از جمله بیماری¬هایی هستند که علاوه بر ژنتیک، با عوامل محیطی نیز در ارتباط هستند، و همچنین بخاطر اینکه فرآیندهای اپی¬ژنتیکی تحت تاثیر عوامل محیطی بر روی بیان ژنها موثر هستند، ما را بر آن داشت که مطالعه¬ای بر تاثیر اپی¬ژنتیک روی بیان یکسری از ژنهای موثر در این بیماری انجام دهیم. با توجه به نقش اثبات شده ژن¬های IL-10 و IL-6 در بیماری¬های روماتولوژیک و بهجت و عدم مطالعه بر روی اپی¬ژنتیک ناحیه پروموتری این¬ ژنها، در این مطالعه بر آنیم تا الگوی متیلاسیون پروموتر این ژن¬ها را در بیماران بهجتی مورد ارزیابی قرار دهیم، تا امکان دستیابی و شناسایی مکانیسم¬های ارتباطی احتمالی ژن¬های IL-10 و IL-6 با بیماری بهجت فراهم گردد. همچنین با این روش می¬توان افراد مستعد را قبل از مبتلا شدن به بیماری شناسایی کرد. |
| اهداف اختصاصی |
تعیین میزان متیلاسیون مربوط به ژن IL-6 در بیماران مبتلا به بهجت و مقایسه آن با افراد گروه کنترل -اندازه گیری میزان بیان ژن مربوط به ژن IL-10 در افراد مبتلا به بهجت و مقایسه آن با افراد گروه کنترل -اندازه گیری سطح بیان ژن IL-6 در افراد مبتلا به بهجت و مقایسه آن با افراد گروه کنترل -اندازه گیری میزان پروتیئن اینترلوکین 10 در بیماران مبتلا به بهجت و مقایسه آن با افراد گروه کنترل -اندازه گیری میزان پروتیئن اینترلوکین 6 در بیماران مبتلا به بهجت و مقایسه آی با افراد گروه کنترل |
| چکیده انگلیسی طرح | .هدف از اجرای این طرح اندازه گیری سطح متیلاسیون ژنهای IL10 و IL6 در بیماران مبتلا به بیماری بهجت و مقایسه این الگو با گروه کنترل و در نهایت میزان بیان این دو ژن درگروه بیمار و کنترل بررسی خواهد شد . ابتدا از 40 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان امام رضا و کلینیک آتیه که بیماری بهجت در آنها توسط متخصص روماتولوژی بر اساس معیارهای تشخیصیICBD محرز گردیده است، نمونه خون گرفته خواهد شد و سپس به روش فایکول سلول¬های تک¬هسته¬ای خون جدا شده و DNA و RNA نمونه ها بر اساس پروتکل شرکت سازنده کیت استخراج می¬شود. برای اندازه¬گیری سطح متیلاسیون ژن¬ها از تکنیک زیر استفاده می¬شود: methylated DNA immunoprecipitation-quantitative polymerase chain reaction (MeDIP-qPCR) در این روش DNA استخراج شده توسط سونیکاسیون به قطعات200 تا 1000bp تبدیل شده و سپس قطعات DNA متیله توسط رسوب¬گذاری ایمنی و با استفاده از آنتی بادی ضد 5- متیل سیتوزین رسوب داده می¬شوند و برای تشخیص سطح متیلاسیون پروموتر ژنها از تکنیک Real-time PCR استفاده خواهد شد. همین فرایند در گروه کنترل جهت مقایسه الگوی متیلاسیون و همچنین میزان بیان ژن¬های مذکور انجام خواهد شد. در نهایت میزان پروتیئن حاصل از بیان ژنهای IL-10 و IL-6 با استفاده از تکنیک الایزا مورد بررسی قرار خواهد گرفت. |
| کلمات کلیدی | بیماری بهجت: از جمله بیماری¬های روماتولوژیک می¬باشد که با آفتهای عود کننده دهانی، زخمهای چشم، زخم های تناسلی، و ضایعات پوستی مشخص می گردد. در این بیماری بیشترین نقش ژنتیکی به HLA-B 51 مربوط می¬شود. هنوز علت و پاتولوژی بیماری بهجت بطور کامل مشخص نشده است. با این حال، تحقیقات اخیر پیشرفتهای قابل توجهی را از این نظر بدست آورده اند. همچنین توجه زیادی به موضوع درمان با آنتی TNF آلفا در این بیماری شده است. MeDIP: از انواع تکنیک¬های تشخیصی میزان متیلاسیون در کل یا جزئی از ژنوم می¬باشد. در این تکنیک به دنبال استخراج DNA، در ابتدا ژنوم توسط دستگاه سونیکاتور قطعه قطعه شده، سپس توسط بافرهای داخل کیت دناچوره شده، به دنبال آن رسوبگذاری ایمنی توسط آنتی¬بادی علیه 5-متیل سیتوزین انجام شده و در نهایت میزان متیلاسیون DNA توسط تکنیک¬های مختلف مانند qPCR برای قسمتی از ژن و miro-array برای کل ژنوم مورد سنجش قرار می¬گیرند. |
| ذینفعان نتایج طرح |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمد نوری | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| ابراهیم سخی نیا | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| ناصر صمدی | مشاور |
| علیرضا خبازی اسکویی | همکار اصلی |
| زهره بابالو | مشاور |
| جعفر فرهادی | همکار اصلی |
| شهریار علیپور | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر افزایش معنی دار متیلاسیون ژن اینترلوکین 10 و کاهش معنی دار متیلاسیون ژن اینترلوکین 6 در بیماران بهجت مشاهده شد.متن خبر اینترلوکین 6 و اینترلوکین 10 بترتیب از سیتوکینهای مهم التهابی و ضدالتهابی هستند که در پاتوفیزیولوژی بیماریهای خودایمنی روماتیسمی نقش اساسی دارند. با توجه به اهمیت زیاد میزان متیلاسیون ژنهای سیتوکینهای مذکور در پاتوژنز و روند پیشرفت بیماریها، در این مطالعه موردـشاهدی، 40 بیمار بهجت و 40 فرد سالم همسان شده از نظر سن و جنس انتخاب شدند و میزان متیلاسیون ژنهای اینترلوکین 6 و 10 بررسی شد. براساس نتایج، متیلاسیون ژنهای اینترلوکین 6 و 10 در بیماران در مقایسه با گروه کنترل بترتیب بطور معنی داری کاهش و افزایش نشان داد که موجب افزایش و کاهش سطح بیان اینترلوکینهای 6 و 10 بترتیب شد. پیشنهاد میگردد جهت دستیابی به نتایج دقیقتر مطالعاتی با حجم نمونه بیشتر و بررسی متیلاسیون سایر ژنهای دخیل در پاتوژنز بیماری بهجت انجام شود. |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
