بررسی تاثیر حفاظتی تورین،کروسین و عصاره دانه انگور سیاه بر سلول های قلبی انسانی درمسمومیت با آلومینیوم فسفید در مدل کشت سلولی
Study of the cardioprotective effects of taurine, crocin, and extract of grapes’ seed on HCM in aluminum phosphide poisoning in cell culture
مجریان: محمود قاضی خوانساری , محمد علی اقبال
خلاصه روش اجرا: سلول های قلبی انسان با کد HCMاز موسسه انستیتو پاستور تهران-ایران تهیه خواهند شد، سپس برای نگهداری در میکروتیوب ها و در تانک ازت مایع قرار خواهند گرفت. جهت دفریز کردن سلول ها بعد از درآوردن آن ها از تانک ازت آنها را به بن ماری و در دمای 37 درجه منتقل و قبل از اینکه محتویات کرایوتیوب به کلی ذوب شود به زیر هود منتقل خواهند شد.9 میلی لیتر از محیط کشت کامل را به وسیله ی سمپلر به محتویات کرایوتیوب، به منظور خنثی سازی اثرات سمیDMSO اضافه خواهد کرد. سوسپانسیون حاصله به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ شده و سپس 5 میلی لیتر از محیط DMEM که تازه به دمای محیط رسیده است را به فالکون منتقل خواهند داد و چندین بار عمل پیپتاژ را انجام خواهند داد سپس محیط کشت حاوی سلول به فلاسک حاوی محیط کشت منتقل داده خواهد شد. سلول ها را به 24 گروه برای درمان و پیش درمان 1.سلول های قلبی سالم 2سلول های قلبی سالم+نرمال سالین 3.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید 4.سلول های قلبی سالم+تورین100mg/ml 5سلول های قلبی سالم+کروسین100mg/ml 6.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه100mg/kg 7.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین25mg/ml 8.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین50mg/ml 9.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین100mg/ml 10. سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین25mg/ml 11.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین50mg/ml 12.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین100mg/ml 13.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+عصاره دانه انگور سیاه25mg/kg 14. سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+اعصاره دانه انگور سیاه50mg/kg 15.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+عصاره دانه انگور سیاه100mg/kg 16.سلول های قلبی سالم+تورین25mg/ml +آلومینیوم فسفید 17.سلول های قلبی سالم+تورین50مmg/ml+آلومینیوم فسفید 18.سلول های قلبی سالم+تورین100mg/ml+آلومینیوم فسفید 19. سلول های قلبی سالم+کروسین25mg/ml+آلومینیوم فسفید 20.سلول های قلبی سالم+کروسین50mg/ml+آلومینیوم فسفید 21.سلول های قلبی سالم+کروسین100mg/ml+آلومینیوم فسفید 22.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه25mg/kg+آلومینیوم فسفید 23. سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه50mg/kg+آلومینیوم فسفید 24.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه100مmg/kg+آلومینیوم فسفید تقسیم خواهند کرد. با فاصله 30 دقیقه درمان و پیش درمان آغاز خواهد شد. از روش رنگ سنجی نمک تترازولیوم برای سنجش زنده ماندن و میزان مرگ و میر و فعالیت سلول استفاده خواهد شد و نتایج حاصله با الایزا ریدر در طول موج 570 نانومتر و طول موج رفرانس 630 نانومتر به دست خواهد آمد. به دنبال تاثیر رادیکال های آزاد بر لیپیدها ترکیبات مختلفی از جمله مالون دی آلدهید آزاد می شود.این ماده در اثر مواجهه با تیوباربیتوریک اسید در PH اسیدی و همچنین دمای بالا واکنش داده و رنگ صورتی ایجاد خواهد کردکه ماکسیمم جذب نوری آن در 532 نانومتر است. برای این منظور 25 میلی لیتر تری کلرو استیک اسید 20% به سلول ها اضافه شده و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق نگهداری خواهند شد. سپس بعد از 10 دقیقه سانتریفیوژبا دور 3000 مایع رویی دور ریخته شده 0.025 میلی لیتر اسید سولفوریک 0.05 مولار و 0.02 میلی لیتر محلول تیوباربیتوریک اسید 0.02% به رسوب حاصله اضافه خواهد شد. نمونه ها به مدت 30 دقیقه در حمام جوش 10 درجه سلسیوس قرار داده خواهند شد. پس از سرد شدن به هر کدام 0.04 میلی لیترNبوتانول اضافه شده و بعد از ورتکس کردن به مدت 10 دقیقه دوباره سانتریفیوژ انجام خواهد شد. سپس مایع رویی را برداشته و میزان جذب آن در طول موج 532 نانومتر به صورت mol/gr µقرایت خواهد شد. مخلوط واکنش برای سنجش فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز بافر فسفات 50 میلی مولار، متیونین 13 مولار،EDTA1مولار و ریبوفلاوین 2 میکرومولار می باشد که جذب آن توسط دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج 560 نانومتر براساس واحد آنزیمی محاسبه خواهد شد. مخلوط واکنش برای سنجش فعالیت آنزیم کاتالاز با هدف بررسی کاهش مقدار پراکسید هیدروژن بافر فسفات 50 میلی مولار و پراکسید هیدروژن 15 میلی مولار می باشد و تغییرات جذب در طول موج 240 نانومتر توسط دستگاه اسپکتروفتومتری محاسبه خواهد شد. طی استرس اکسیداتیو رادیکال های هیدروکسیل به پروتئین ها حمله می کنند و کربونیل های پروتئین را ایجاد می کنند.برای سنجش پروتئین کربونیل از مخلوط TCA (تری کلرواستیک اسید) 20 %، گوانین هیدروکلراید 6مولار و10 میلی 10 2و4دی نیتروفنیل هیدرازین(DNPH) استفاده خواهد شد و میزان جذب کمبلکس زرد رنگ ایجاد شده در طول موج 380 نانومتر توسط اسبکتروفتومتر قرائت خواهد شد.
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60582 |
| عنوان فارسی طرح | بررسی تاثیر حفاظتی تورین،کروسین و عصاره دانه انگور سیاه بر سلول های قلبی انسانی درمسمومیت با آلومینیوم فسفید در مدل کشت سلولی |
| عنوان لاتین طرح | Study of the cardioprotective effects of taurine, crocin, and extract of grapes’ seed on HCM in aluminum phosphide poisoning in cell culture |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | اپیدمیولوژی و پیشگیری از سوانح با تاکید بر سوختگی، سقوط و مسمومیت |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری تخصصی PhD |
| مدت اجرا - ماه | 36 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | میزان مسمومیت با الومینیوم فسفید در کشورهای در حال توسعه از جمله ایران رو به افزایش است، این مسمومیت آنتی دوت اختصاصی ندارد و میزان مرگ در این مسمومیت که بیشتر به قصد خودکشی اتفاق می افتد بسیار بالاست. بیشترین آسیب از طریق مسمومیت با الومینیوم فسفید مربوط به ارگان مهم و حیاتی قلب می باشد، و از آنجایی که بعد ازتولید گاز فسفین رادیکال های آزاد فراوانی در بدن تولید می شود و با تخلیه آنزیم های آنتی اکسیدانی مهمی چون سوپراکسید دیسموتاز و کاتالاز، آسیب جدی به سلول وارد می شود. بر آن شدیم تا مطالعه ای مبنی بر درمان سمیت قلبی آلومینیوم فسفید داشته باشیم تا سلول های قلبی را از آسیب استرس اکسیداتیو محافظت کنیم، تورین من جمله اسیدآمینه ای می باشد که نقش آنتی اکسیدانتی در جهت حفاظت از سلول ها دارد،کروسین نیز از مهم ترین کارتینوئیدهای گیاهی می باشد که از کلاله زعفران استخراج می شود و باعث بهبود عملکردهای قلب می گردد و از آسیب ارگانل های داخل عضلات قلب به ویژه میتوکندری ها پیشگیری می کند و آسیب های موجود را به واسطه اثرات آنتی اکسیدانی و ضدالتهابی به حداقل می رساند،همچنین اسانس دانه انگور سیاه غنی از پروآنتوسیانیدین است و یک آنتی اکسیدان بسیار قوی می باشدکه قادر است از تخریب سلولی توسط رادیکال های آزاد ممانعت کند و تاثیر پیشگیری کننده ای بر روی عوارض قلبی و سمیت سلولی داشته باشد. هدف از این مطالعه نیز بررسی تاثیر حفاظتی تورین، کروسین و اسانس دانه انگور سیاه بر بهبود عملکرد سمیت قلبی و پیشگیری از آسیب های سلولی رادیکال های آزاد فسفین به واسطه اثرات آنتی اکسیدانی بر آلومینیوم فسفید در مدل کشت سلول می باشد. |
| اهداف اختصاصی | 1) .تاثیر تورین بر مهار استرس اکسیداتیو در مسمومیت با آلومینیوم فسفید 2) .تاثیر کروسین بر مهار استرس اکسیداتیو در مسمومیت با آلومینیوم فسفید 3) تاثیر عصاره دانه انگور سیاه بر مهار استرس اکسیداتیو در مسمومیت با آلومینیوم فسفید -تست MTT سنجش میزان بقای سلول |
| چکیده انگلیسی طرح | سلول های قلبی انسان با کد HCMاز موسسه انستیتو پاستور تهران-ایران تهیه خواهند شد، سپس برای نگهداری در میکروتیوب ها و در تانک ازت مایع قرار خواهند گرفت. جهت دفریز کردن سلول ها بعد از درآوردن آن ها از تانک ازت آنها را به بن ماری و در دمای 37 درجه منتقل و قبل از اینکه محتویات کرایوتیوب به کلی ذوب شود به زیر هود منتقل خواهند شد.9 میلی لیتر از محیط کشت کامل را به وسیله ی سمپلر به محتویات کرایوتیوب، به منظور خنثی سازی اثرات سمیDMSO اضافه خواهد کرد. سوسپانسیون حاصله به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ شده و سپس 5 میلی لیتر از محیط DMEM که تازه به دمای محیط رسیده است را به فالکون منتقل خواهند داد و چندین بار عمل پیپتاژ را انجام خواهند داد سپس محیط کشت حاوی سلول به فلاسک حاوی محیط کشت منتقل داده خواهد شد. سلول ها را به 24 گروه برای درمان و پیش درمان 1.سلول های قلبی سالم 2سلول های قلبی سالم+نرمال سالین 3.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید 4.سلول های قلبی سالم+تورین100mg/ml 5سلول های قلبی سالم+کروسین100mg/ml 6.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه100mg/kg 7.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین25mg/ml 8.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین50mg/ml 9.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+تورین100mg/ml 10. سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین25mg/ml 11.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین50mg/ml 12.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+کروسین100mg/ml 13.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+عصاره دانه انگور سیاه25mg/kg 14. سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+اعصاره دانه انگور سیاه50mg/kg 15.سلول های قلبی سالم+آلومینیوم فسفید+عصاره دانه انگور سیاه100mg/kg 16.سلول های قلبی سالم+تورین25mg/ml +آلومینیوم فسفید 17.سلول های قلبی سالم+تورین50مmg/ml+آلومینیوم فسفید 18.سلول های قلبی سالم+تورین100mg/ml+آلومینیوم فسفید 19. سلول های قلبی سالم+کروسین25mg/ml+آلومینیوم فسفید 20.سلول های قلبی سالم+کروسین50mg/ml+آلومینیوم فسفید 21.سلول های قلبی سالم+کروسین100mg/ml+آلومینیوم فسفید 22.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه25mg/kg+آلومینیوم فسفید 23. سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه50mg/kg+آلومینیوم فسفید 24.سلول های قلبی سالم+عصاره دانه انگور سیاه100مmg/kg+آلومینیوم فسفید تقسیم خواهند کرد. با فاصله 30 دقیقه درمان و پیش درمان آغاز خواهد شد. از روش رنگ سنجی نمک تترازولیوم برای سنجش زنده ماندن و میزان مرگ و میر و فعالیت سلول استفاده خواهد شد و نتایج حاصله با الایزا ریدر در طول موج 570 نانومتر و طول موج رفرانس 630 نانومتر به دست خواهد آمد. به دنبال تاثیر رادیکال های آزاد بر لیپیدها ترکیبات مختلفی از جمله مالون دی آلدهید آزاد می شود.این ماده در اثر مواجهه با تیوباربیتوریک اسید در PH اسیدی و همچنین دمای بالا واکنش داده و رنگ صورتی ایجاد خواهد کردکه ماکسیمم جذب نوری آن در 532 نانومتر است. برای این منظور 25 میلی لیتر تری کلرو استیک اسید 20% به سلول ها اضافه شده و به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق نگهداری خواهند شد. سپس بعد از 10 دقیقه سانتریفیوژبا دور 3000 مایع رویی دور ریخته شده 0.025 میلی لیتر اسید سولفوریک 0.05 مولار و 0.02 میلی لیتر محلول تیوباربیتوریک اسید 0.02% به رسوب حاصله اضافه خواهد شد. نمونه ها به مدت 30 دقیقه در حمام جوش 10 درجه سلسیوس قرار داده خواهند شد. پس از سرد شدن به هر کدام 0.04 میلی لیترNبوتانول اضافه شده و بعد از ورتکس کردن به مدت 10 دقیقه دوباره سانتریفیوژ انجام خواهد شد. سپس مایع رویی را برداشته و میزان جذب آن در طول موج 532 نانومتر به صورت mol/gr µقرایت خواهد شد. مخلوط واکنش برای سنجش فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز بافر فسفات 50 میلی مولار، متیونین 13 مولار،EDTA1مولار و ریبوفلاوین 2 میکرومولار می باشد که جذب آن توسط دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج 560 نانومتر براساس واحد آنزیمی محاسبه خواهد شد. مخلوط واکنش برای سنجش فعالیت آنزیم کاتالاز با هدف بررسی کاهش مقدار پراکسید هیدروژن بافر فسفات 50 میلی مولار و پراکسید هیدروژن 15 میلی مولار می باشد و تغییرات جذب در طول موج 240 نانومتر توسط دستگاه اسپکتروفتومتری محاسبه خواهد شد. طی استرس اکسیداتیو رادیکال های هیدروکسیل به پروتئین ها حمله می کنند و کربونیل های پروتئین را ایجاد می کنند.برای سنجش پروتئین کربونیل از مخلوط TCA (تری کلرواستیک اسید) 20 %، گوانین هیدروکلراید 6مولار و10 میلی 10 2و4دی نیتروفنیل هیدرازین(DNPH) استفاده خواهد شد و میزان جذب کمبلکس زرد رنگ ایجاد شده در طول موج 380 نانومتر توسط اسبکتروفتومتر قرائت خواهد شد. |
| کلمات کلیدی | فسفید آلومینیوم: آلومینیوم فسفید ALP（ Aluminum Phosphide)، به عنوان یک آفت کش ارزان و موثر برای کنترل جوندگان و ماده ای برای محافظت از برنج در فروشگاه ها و حمل و نقل استفاده می شوند ، اثرات سمی AlP به دلیل گاز فسفین (PH 3) در هنگام تماس با رطوبت یا اسید هیدروکلریک می باشد و این سم جز سموم میتوکندریایی است. کروسین : کروسین(Cro （ و کروستین از مهمترین کارتینوئیدهای گیاهی می باشند.این ترکیبات را می توان از کلاله زعفران (Crocus sativus L) استخراج نمود.این دو ترکیب مسئول رنگ زعفران هستند. تورین : تورین اسیدآمینه ای است که حاوی سولفور می باشد. عصاره دانه انگور سیاه : عصاره دانه انگور سیاه غنی از پروآنتوسیانیدین است، این ترکیب یک آنتی اکسیدان بسیار قوی می باشد و قادر است از تخریب های سلولی توسط رادیکال های آزاد ممانعت نماید. همچنین این عصاره دارای خواص آنتی هیستامینی، ضد آلرژی و ضد التهابی بوده و موجب تقویت سیستم ایمنی بدن نیز می گردد. HCM: سلولهای قلبی سالم و نرمال انسانی که از انستیتو پاستور تهیه می شود. |
| ذینفعان نتایج طرح | مسمومین با آلومینیوم فسفید(ALP) |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| محمدرضا ستاری | مشاور |
| یدالله آذرمی | مشاور |
| مستوره ندافی | دانشجوی مالک پایان نامه |
| محمود قاضی خوانساری | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| محمد علی اقبال | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر متن خبر |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر تورین، کروسین و عصاره دانه انگور سیاه بر سمیت قلبی ناشی از مسمومیت آلومینیوم فسفید در مدل کشت سلول اثرات محافظتی دارد.متن خبر اثرات محافظتی تورین، کروسین و عصاره دانه انگور سیاه بر سمیت قلبی ناشی از مسمومیت با
آلومینیوم فسفید در مدل کشت سلولی مورد بررسی قرار گرفته است.
براساس یافته ها تورین، کروسین و عصاره دانه انگور سیاه در کنترل تغییرات ناشی از
مسمومیت آلومینیوم فسفید به میزان زیادی موثر بود.بهبود قابل توجه در مارکرهای استرس اکسیداتیو پس
از درمان با دوزهای 2 میلی مولار تورین، 7 میلی مولار کروسین و 100 گرم بر لیتر عصاره دانه انگور سیاه
مشاهده شد.نتایج ما نشانگر توانایی تورین، کروسین و عصاره دانه انگور سیاه در مقابله با آسیب استرس
اکسیداتیوناشی از آلومینیوم فسفید در قلب می باشند. مطالعات بیشتری به منظور بررسی تورین، کروسین و
عصاره دانه انگور سیاه به عنوان آنتی دوت مسمومیت با آلومینیوم فسفید مورد نیاز می باشد. لینک مقالات مربوطه
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S004565352102717X?via=ihub
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0024320520315666?via=ihub
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0045653522002934
https://academic.oup.com/jpp/article/73/11/1539/6125377 |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
