مطالعه خاصیت ضد میکروبی باکتری Bacillus megaterium بر روی پاتوژن های انسانی و گیاهی
Study of antimicrobial activity of Bacillus megaterium on human and plant Pathogens
مجریان: آزیتا دیلمقانی , سمیه حلاج نژادی
خلاصه روش اجرا: 1- در این پژوهش در ابتدا باکتری Bacillus megaterium کشت داده خواهد شدکه از عسل منطقه خوزستان جدا سازی شده و این باکتری در 30 درجه سانتیگراد به مدت 48، 72 و 96 ساعت در شیکر 150 دور در دقیقه قرار گرفته و برای تعیین مقاومت در مقابل آنتی بیوتیک های مختلف از روش دیسک دیفیوژن استفاده خواهد شد. برای انجام دیسک دیفیوژن سوسپانسیون باکتری با غلظت 5/0 مک فارلند تهیه شده و در محیط کشت TSA کشت داده خواهد شد. دیسک های آنتی بیوتیک بر روی آن قرار داده خواهد شد. برای تعیین مقاومت به آنتی بیوتیک ظرف پتری دیش به مدت 24 ساعت در 30 درجه سانتی گراد انکوبه خواهد شد. پس از آن قطر هاله عدم رشد اندازه گیری شده و سپس نتایج با استفاده از جدول استاندارد دیسک ها بصورت حساس ، حساس نسبی و مقاوم ثبت خواهد شد. برای مثال هاله بزرگ تر از 13 میلی متر حساس ، 11-12 میلی متر مقاوم نسبی و هاله کمتر از 10 میلی متر به عنوان مقاوم به متی سیلین در نظر گرفته خواهد شد. نتایج با استفاده از نرم افزار SPSS و آزمون chi square تجزیه تحلیل می گردد. 2- در این مطالعه خواص ضد باکتریایی و ضد قارچی ، باکتری مورد نظر را با سویه های تجاری مختلف (چهار سویه باکتریا یی بیماریزای انسانی ، چهار سویه باکتریایی بیماریزای گیاهی و چهار سویه قارچی بیماریزای گیاهی) مقایسه خواهد شد. باکتری در محیط مربوطه در دمای 30 درجه سانتیگراد(دمای اپتیمم) به مدت 24 ساعت انکوبه می شود. سپس به منظور جداسازی سلولهای باکتری از محیط کشت از سانتریفیوژ یخچال دار در 4000 دور به مدت 20 دقیقه انجام می گردد. مایع رویی جدا گردیده و برای اطمینان از عدم وجود سلول از فیلتر باکتریایی 45/0 میکرومتر عبور داده خواهد شد. به منظور بررسی فعالیت ضد میکروبی به روش انتشار در محیط آگار استفاده خواهد شد. در داخل محیط کشت چاهک هایی با قطر 5 میلی متر ایجاد کرده و سپس 100 میکرولیتر از باکتری را به داخل چاهک های ایجاد شده در پلیت های حاوی باکتری و قارچهای مورد آزمایش ریخته خواهد شد. سپس پلیت ها در دمای 30 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت نگهداری خواهد شد. پس از اتمام این زمان، انداره هاله های ایجاد شده با استفاده از خط کش اندازه گیری خواهد شد. نتایج با استفاده از نرم افزار SPSS و آزمون chi square تجزیه و تحلیل می گردد. 3- تعیین مقدار بازدارندگی به روش میکرودایلوشن براث: در میکروپلیت های 96 خانه مقدار 100 میکرولیتر محیط TSA همراه سوسپانسون باکتری به تمام چاهکها و مقدار 100 میکرو لیتر از باکتری هایا قارچ ها مورد نظر به چاهکهای اول اضافه می گردد. سپس غلظت های مختلف از میکرو ارگانیسم تهیه شده و در نهایت 100 میکرو لیتر از هر غلظت به چاهکهای مختلف اضافه می گردد. در هر آزمایش از تمام رقتهای سوسپانسیون باکتری بدون میکرو ارگانیسمها بعنوان شاهد منفی جهت مقایسه و از هر میکرو ارگانیسم همراه با محیط کشت بعنوان شاهد مثبت جهت تایید رشد هر میکرو ارگانیسم استفاده خواهد شد. پس از کشت ، میکروپلیت ها شیک شدند تا مخلوط کاملا یکنواخت گردد. سپس میکرو پلیتها به مدت 48 ساعت در داخل انکوباتور در دمای 30 درجه قرار داده و نتایج بعد از 48 ساعت مورد مطالعه قرار خواهد گرفت. آخرین رقتی که مانع رشد میکرو ارگانیسمها گردد بعنوان MIC در نظر گرفته خواهد شد
اطلاعات کلی طرح 
| مرحله جاری طرح | خاتمه قرارداد و اجرا |
| کد طرح | 60492 |
| عنوان فارسی طرح | مطالعه خاصیت ضد میکروبی باکتری Bacillus megaterium بر روی پاتوژن های انسانی و گیاهی |
| عنوان لاتین طرح | Study of antimicrobial activity of Bacillus megaterium on human and plant Pathogens |
| نوع طرح | طرح - پایان نامه |
| اولویت طرح | بهبود کیفیت مراقبت های سلامت (با اخذ تائید برای موضوع ارائه شده از معاونت های درمان و بهداشت، حسب موضوع) |
| نوع مطالعه | مطالعات علوم پایه (Experimental) |
| تحقیق در نظام سلامت | بلی |
| آیا طرح پایاننامه دانشجویی است؟ | بله |
| مقطع پایان نامه | دکتری عمومی |
| مدت اجرا - ماه | 14 |
| نوآوری و ضرورت انجام تحقیق | گسترش مشکل مقاومت میکروبی نیاز به تحقیقات دارویی را برای جایگزینی داروهای شیمایی ضروری کرده است، که از ارزنده ترین جایگزین ها، متابولیت های ثانویه آنتی بیوتیکی میکروارگانیسم ها است. از آنجایی که تا کنون گزارشی از بررسی فعالیت ضد میکروبی باکتری Bacillus megaterium جدا شده از عسل صورت نگرفته است لذا در این تحقیق به بررسی خواص ضد باکتریایی و ضد قارچی باکتری Bacillus megaterium پرداخته شده است. |
| اهداف اختصاصی | بررسی اثر برخی آنتی بیوتیک ها بر روی باکتری Bacillus megaterium-بررسی خاصیت ضد قارچی باکتری Bacillus megaterium-: بررسی خاصیت ضد باکتری باکتری Bacillus megaterium-تعیین مقدار بازدارندگی آنتی میکروبیال تولید شده به وسیله Bacillus megaterium به روش MIC و MBC |
| چکیده انگلیسی طرح | 1- In this study, initially, Bacillus megaterium bacteria will be cultivated, which was isolated from honey in the Khuzestan region, and this bacteria will be placed in a shaker at 150 rpm for 48, 72, and 96 hours at 30 degrees Celsius. The disk diffusion method will be used to determine resistance to various antibiotics. To perform disk diffusion, a bacterial suspension with a concentration of 0.5 McFarland will be prepared and cultured in TSA culture medium. Antibiotic disks will be placed on it. To determine antibiotic resistance, the Petri dish will be incubated for 24 hours at 30 degrees Celsius. After that, the diameter of the growth inhibition zone will be measured, and then the results will be recorded using the standard disk table as sensitive, relatively sensitive, and resistant. For example, a zone larger than 13 mm will be considered sensitive, 11-12 mm will be considered relatively resistant, and a zone less than 10 mm will be considered resistant to methicillin. The results are analyzed using SPSS software and chi square test. 2- In this study, the antibacterial and antifungal properties of the target bacteria will be compared with different commercial strains (four human pathogenic bacterial strains, four plant pathogenic bacterial strains and four plant pathogenic fungal strains). The bacteria are incubated in the relevant environment at 30 degrees Celsius (optimum temperature) for 24 hours. Then, in order to separate the bacterial cells from the culture medium, a refrigerated centrifuge is performed at 4000 rpm for 20 minutes. The supernatant is separated and passed through a 0.45 micrometer bacterial filter to ensure the absence of cells. In order to examine the antimicrobial activity, the agar diffusion method will be used. 5 mm diameter wells are created inside the culture medium and then 100 microliters of bacteria will be poured into the wells created in the plates containing the bacteria and fungi to be tested. Then the plates will be kept at 30°C for 24 hours. After this time, the size of the formed halos will be measured using a ruler. The results will be analyzed using SPSS software and chi square test. 3- Determination of the inhibition value by broth microdilution method: In 96-well microplates, 100 microliters of TSA medium with bacterial suspension is added to all wells and 100 microliters of the desired bacteria or fungi are added to the first wells. Then different concentrations of the microorganism are prepared and finally 100 microliters of each concentration are added to different wells. In each experiment, all dilutions of the bacterial suspension without microorganisms will be used as negative controls for comparison and each microorganism with culture medium will be used as positive controls to confirm the growth of each microorganism. After cultivation, the microplates were shaken until the mixture was completely uniform. The microplates are then placed in an incubator at 30 degrees for 48 hours and the results will be read after 48 hours. The last dilution that inhibits the growth of microorganisms will be considered as the MIC. |
| کلمات کلیدی | Aspergillus flavus, Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea Neurospora crassa,: قارچهای گیاهی که متابولیسم ثانویه تولید توکسین مختلف کرده که باعث آلرژی، طیف گسترده ای از عفونت، از جمله سطحی مانند کراتیت و ناخن و سرطان در انسان می کند. آنتی میکروبیال: ماده ای هست که باعث توقف رشد و یا از بین بردن برخی یا تما م میکروارگانیسم ها می شود. |
| ذینفعان نتایج طرح | شناسایی ماده آنتی میکروبیال جدید از باکتری Bacillus megaterium که بر علیه پاتوژن های انسانی و گیاهی عمل کند و بتواند جایگزینی برای آنتی بیوتیکهایی که به آن ها مقاومت ایجاده شده باشد. |
اطلاعات مجری و همکاران
| نام و نامخانوادگی | سمت در طرح |
|---|---|
| آزیتا دیلمقانی | استاد راهنمای اول (آموزشی ) |
| سمیه حلاج نژادی | استاد راهنما دوم (آموزشی ) |
| مهران راغب | دانشجوی مالک پایان نامه |
اطلاعات تفضیلی
| حوزه خبر | خبر |
|---|---|
| رسانه ها و مردم | عنوان خبر توانایی آنتی میکروبی باسیلوس مگاتریوم بر روی قارچهامتن خبر امروز به دلیل مقاومت میکروبی، تولید آنتی میکروبیال های جدید بسیار اهمیت دارد. در این مطالعه باکتری باسیلوس مگاتریوم جداسازی شده از عسل غرب کشور توانایی تولید آنتی میکروبیال داشت که بر علیه قارچ های Fusarium oxysporum ، Neurospora crassa و Botrytis cinerea اثر کشندگی داشت ولی هیچ اثر ضد میکروبی بر روی باکتری ها نداشت.
بر اساس نتایج بدست آمده باکتری باسیلوس مگاتریوم جداسازی شده از عسل پتانسیل بسیار خوبی برای تولید آنتی میکروبیال ضد قارچی در پزشکی دارد |
| متخصصان و پژوهشگران | عنوان خبر توانایی آنتی میکروبی باسیلوس مگاتریوم بر روی قارچهامتن خبر روز به دلیل مقاومت میکروبی، تولید آنتی میکروبیال های جدید بسیار اهمیت دارد. در این مطالعه باکتری باسیلوس مگاتریوم جداسازی شده از عسل غرب کشور توانایی تولید آنتی میکروبیال داشت که بر علیه قارچ های Fusarium oxysporum ، Neurospora crassa و Botrytis cinerea اثر کشندگی داشت ولی هیچ اثر ضد میکروبی بر روی باکتری ها نداشت.
بر اساس نتایج بدست آمده باکتری باسیلوس مگاتریوم جداسازی شده از عسل پتانسیل بسیار خوبی برای تولید آنتی میکروبیال ضد قارچی در پزشکی دارد |
| سیاستگذاران درمانی | عنوان خبر متن خبر |
| سیاستگذاران پژوهشی | عنوان خبر متن خبر |
| لینک (URL) مقاله انگلیسی مرتبط منتشر شده 1 |
